近年來，隨著玻璃化冷凍技術(shù)的不斷發(fā)展，成熟卵母細(xì)胞紡錘體的冷凍保存研究取得了進(jìn)展。研究表明，采用玻璃化冷凍法冷凍保存的成熟卵母細(xì)胞，在解凍后其紡錘體和染色體的形態(tài)及功能均能得到較好的保持。這主要得益于玻璃化冷凍過程中避免了冰晶形成對細(xì)胞的損傷，以及冷凍保護(hù)劑對細(xì)胞的有效保護(hù)。然而，值得注意的是，盡管玻璃化冷凍法在提高解凍存活率和妊娠成功率方面取得了成效，但仍存在一些問題。例如，冷凍過程中紡錘體的微管結(jié)構(gòu)可能受到低溫的影響而發(fā)生解聚，導(dǎo)致染色體分離異常。此外，冷凍保護(hù)劑的毒性也可能對卵母細(xì)胞造成一定的損傷。為了克服這些問題，研究者們進(jìn)行了大量的實(shí)驗(yàn)和優(yōu)化工作。例如，通過改進(jìn)冷凍保護(hù)劑的配方和濃度，降低其對細(xì)胞的毒性；通過優(yōu)化冷凍速率和程序，減少冷凍過程中對細(xì)胞的機(jī)械損傷；以及通過篩選和評估不同冷凍載體和保存時間對卵母細(xì)胞冷凍效果的影響，尋找好的冷凍保存條件。紡錘體形成缺陷是多種遺傳疾病的共同特征。上海無損觀察紡錘體提高冷凍保存效率

卵母細(xì)胞冷凍保存主要采用兩種方法：慢速冷凍法和玻璃化冷凍法。相較于傳統(tǒng)的慢速冷凍法，玻璃化冷凍法因其更高的解凍存活率和妊娠成功率而逐漸成為主流技術(shù)。玻璃化冷凍法的基本原理是將含有生物樣本的溶液在極短的時間內(nèi)（如幾分鐘內(nèi)）冷卻至液氮溫度，使溶液在凝固點(diǎn)以下形成無冰晶的半固體或固體狀態(tài)。這種方法避免了冰晶形成對細(xì)胞結(jié)構(gòu)的破壞，從而減少了冷凍損傷。在卵母細(xì)胞冷凍保存中，玻璃化冷凍法通過優(yōu)化冷凍保護(hù)劑的濃度和冷凍速率，使卵母細(xì)胞在冷凍過程中保持其結(jié)構(gòu)的完整性。北京無損觀察紡錘體胚胎植入紡錘體在細(xì)胞分裂過程中經(jīng)歷明顯的形態(tài)和結(jié)構(gòu)變化。

近年來，研究者們通過不斷優(yōu)化冷凍保護(hù)劑的配方和濃度，發(fā)現(xiàn)某些特定成分的組合能夠減輕冷凍過程中紡錘體的損傷。例如，紫杉醇等細(xì)胞骨架保護(hù)劑在穩(wěn)定紡錘體微管結(jié)構(gòu)方面表現(xiàn)出色，成為冷凍保存中的重要輔助手段。Polscope偏振光顯微成像系統(tǒng)的應(yīng)用，使得對雙折射性紡錘體的動態(tài)觀察成為可能。通過實(shí)時監(jiān)測冷凍過程中紡錘體的形態(tài)變化，研究者能夠更準(zhǔn)確地評估冷凍效果，并優(yōu)化冷凍保存條件。此外，偏光成像技術(shù)還能夠提供紡錘體異常率的量化數(shù)據(jù)，為臨床應(yīng)用提供可靠依據(jù)。

紡錘體觀測儀在補(bǔ)救ICSI中的應(yīng)用

我們知道，成熟的卵母細(xì)胞排出***極體。IVF加入精子后，精子會穿透層層障礙**終進(jìn)入卵子，隨著時間的推移，卵子的紡錘體會將染色單體拉向兩極，進(jìn)而排出第二極體，再往后大約加精后9-16小時，雌雄原核會出現(xiàn)，而原核的出現(xiàn)才是受精的標(biāo)志。但是對于那些沒有受精的卵子，到了原核出現(xiàn)的時間窗，發(fā)現(xiàn)沒有受精時再去補(bǔ)救ICSI，往往錯過了卵子的比較好受精時間，因?yàn)闆]有受精的卵子會在體外老化，即使受精，胚胎的發(fā)育潛能也很低。所以，我們在加精后的4-6小時，通過觀察第二極體的排出來初步判斷是否受精，**的增加了那些受精障礙患者的受精率，也避免了卵子的老化。

當(dāng)然，偶爾也會出現(xiàn)錯誤補(bǔ)救。文獻(xiàn)報道對IVF受精后的未排出第二極體的卵母細(xì)胞進(jìn)行ICSI補(bǔ)救，實(shí)驗(yàn)組用紡錘體觀測儀觀察并統(tǒng)計紡錘體的數(shù)目，82.7%含有一個紡錘體，17.3%含有兩個紡錘體，并對含有一個紡錘體的卵母細(xì)胞進(jìn)行補(bǔ)救ICSI；而對照組并未用紡錘體觀測儀觀察紡錘體，只對未排出第二極體的卵母細(xì)胞進(jìn)行補(bǔ)救ICSI。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，使用紡錘體觀測儀觀察紡錘體的數(shù)目能顯著提高正常受精率，降低多原核受精比率。 紡錘體微管的正極朝向細(xì)胞兩極，負(fù)極則靠近染色體。

對于因疾病、年齡或其他原因可能失去生育能力的女性來說，MI期紡錘體卵冷凍技術(shù)提供了一種有效的生育能力保存方式。通過冷凍保存MI期卵母細(xì)胞并在適當(dāng)?shù)臅r候進(jìn)行解凍和受精操作，可以實(shí)現(xiàn)生育愿望的延續(xù)。在輔助生殖技術(shù)中，MI期紡錘體卵冷凍技術(shù)可以用于提高試管嬰兒的成功率。通過選擇質(zhì)量優(yōu)良的MI期卵母細(xì)胞進(jìn)行冷凍保存并在需要時進(jìn)行解凍和受精操作，可以篩選出更具發(fā)育潛能的胚胎進(jìn)行移植。MI期紡錘體卵冷凍技術(shù)還可以與遺傳病篩查技術(shù)相結(jié)合，通過檢測卵母細(xì)胞中的遺傳物質(zhì)來篩選出健康的胚胎進(jìn)行移植。這有助于降低遺傳病在后代中的發(fā)病率，提高出生人口的質(zhì)量。紡錘體的形成與消失是細(xì)胞周期中高度動態(tài)的過程。上海雙折射性紡錘體胚胎發(fā)育

紡錘體微管與染色體之間的相互作用是細(xì)胞分裂的重點(diǎn)事件。上海無損觀察紡錘體提高冷凍保存效率

秋水仙素會使動物細(xì)胞染色體加倍嗎微管蛋白按照來源可分為植物微管蛋白和動物腦蛋白。因植物微管蛋白難以制備，秋水仙堿與動物腦微管蛋白結(jié)合反應(yīng)研究得要更多一些。秋水仙堿是從植物秋水仙中提純出的一種生物堿，又名秋水仙素，構(gòu)成微管的α、β微管蛋白異源二聚體是秋水仙素分子的結(jié)合靶點(diǎn)。當(dāng)秋水仙堿與正在進(jìn)行有絲分裂的細(xì)胞接觸時，秋水仙堿結(jié)合到微管蛋白的特定位點(diǎn)，導(dǎo)致α微管蛋白與β微管蛋白二聚體結(jié)構(gòu)變形，從而阻斷微管蛋白組裝成微管，但并不影響微管蛋白的解聚，所以紡錘體會迅速消失。

秋水仙堿的濃度和作用時間對動、植物細(xì)胞染色體加倍的影響是關(guān)鍵。有研究結(jié)果表明，在花粉母細(xì)胞減數(shù)分裂細(xì)線期與粗線期進(jìn)行美洲黑楊2n花粉的誘導(dǎo)效果比較好，總體上在減數(shù)分裂粗線期進(jìn)行誘導(dǎo)得到的2n花粉**多，并且誘導(dǎo)的比較好濃度為0.5%。劉愛生等在利用人類外周血淋巴細(xì)胞進(jìn)行染色體G顯帶制作中，在阻斷培養(yǎng)的4h內(nèi)任意時間加入相應(yīng)劑量的秋水仙素，能獲得用于G顯帶的形態(tài)完好、大小適中、分散均勻、輪廓清楚的中期染色體標(biāo)本相。陳長超等利用秋水仙堿處理MⅠ期卵母細(xì)胞，結(jié)果發(fā)現(xiàn)Ml期紡錘體發(fā)生解聚，染色體周圍紡錘體微管全部消失或部分殘留，染色體排列異常。 上海無損觀察紡錘體提高冷凍保存效率