冷凍與解凍過(guò)程中涉及多個(gè)環(huán)節(jié)，包括溫度控制、時(shí)間控制、冷凍保護(hù)劑的添加與去除等。這些環(huán)節(jié)中的任何一步操作不當(dāng)都可能導(dǎo)致紡錘體損傷。因此，需要不斷優(yōu)化冷凍與解凍技術(shù)，以減少對(duì)紡錘體的不良影響。近年來(lái)，研究者們通過(guò)不斷嘗試和優(yōu)化冷凍保護(hù)劑的配方，取得了進(jìn)展。例如，甘油、二甲基亞砜（DMSO）等滲透性保護(hù)劑被用于哺乳動(dòng)物卵母細(xì)胞的冷凍保存中，它們能夠迅速降低細(xì)胞內(nèi)水分含量，減少冰晶形成。同時(shí)，一些非滲透性保護(hù)劑如蔗糖、海藻糖等也被發(fā)現(xiàn)對(duì)紡錘體具有一定的保護(hù)作用。紡錘體在細(xì)胞分裂后期通過(guò)收縮力推動(dòng)染色體分離。北京核移植紡錘體改善分級(jí)

紡錘體觀測(cè)儀使ICSI更加安全可靠

在進(jìn)行單精子卵胞漿內(nèi)注射（ICSI）授精時(shí)，**初人們觀察人體內(nèi)成熟的卵母細(xì)胞時(shí)，通常認(rèn)為，卵母細(xì)胞紡錘**于***極體附近，故傳統(tǒng)的ICSI操作是轉(zhuǎn)動(dòng)卵母細(xì)胞使其***極**于6點(diǎn)或12點(diǎn)處，然后在3點(diǎn)處注入精子。但是，在大量使用紡錘體觀測(cè)儀后發(fā)現(xiàn)，***極體并不能很好地預(yù)測(cè)紡錘體的位置。一項(xiàng)研究提示，在ICSI后，用紡錘體觀測(cè)儀觀察紡錘體與***極體的夾角，結(jié)果發(fā)現(xiàn)小于30°這組卵母細(xì)胞的正常受精率更高。極體在卵周隙中的移動(dòng)，或者紡錘體在胞質(zhì)中的易位都使兩者的位置關(guān)系發(fā)生改變，普通光學(xué)顯微鏡下ICSI穿刺部位的選擇，可能會(huì)損傷紡錘體和(或)造成染色體的異常。通過(guò)紡錘體觀測(cè)儀，可以精確地對(duì)卵母細(xì)胞中紡錘體的位置進(jìn)行定位，從而避免在ICSI過(guò)程中損傷紡錘體，使ICSI更加安全可靠。有文獻(xiàn)報(bào)道，在進(jìn)行ICSI時(shí)，觀察到“雙折射紡錘體”的成熟卵母細(xì)胞的受精率和質(zhì)量胚胎率***高于未觀察到雙折射紡錘體組。也有學(xué)者發(fā)現(xiàn)，有些卵母細(xì)胞在普通光學(xué)顯微鏡下看到是正常的，但在紡錘體觀測(cè)儀這個(gè)“照妖鏡”下，就能顯出原形，表現(xiàn)為有***極體、但缺乏雙折射的紡錘體，這類卵母細(xì)胞ICSI后的受精率和妊娠率極低。 北京成熟卵母細(xì)胞紡錘體Hoechst染料顯微鏡下的紡錘體，如同精密的分子機(jī)器，引導(dǎo)染色體分離。

紡錘體的完整性決定了染色體分裂的正確性。在有絲分裂前期，中心體被復(fù)制形成兩個(gè)中心體，并逐漸分離，形成兩個(gè)紡錘體。紡錘體的微管從中心體發(fā)出，與染色體上的著絲粒（kinetochore）結(jié)合。著絲粒是一組復(fù)雜的蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)，可以與微管的末端結(jié)合。當(dāng)纖維束的微管末端與著絲粒結(jié)合時(shí)，纖維束開(kāi)始縮短，將染色體拉向兩端，實(shí)現(xiàn)染色體的精確分離。這一過(guò)程不僅確保了每個(gè)新細(xì)胞都能獲得正確數(shù)量的染色體，還保證了遺傳信息的穩(wěn)定傳遞。

核移植，又稱體細(xì)胞核移植，是一種將體細(xì)胞的細(xì)胞核移入去核卵母細(xì)胞中的技術(shù)。這一技術(shù)的關(guān)鍵在于確保移植后的細(xì)胞核能夠在卵母細(xì)胞內(nèi)重新編程，恢復(fù)全能性，并引導(dǎo)后續(xù)的胚胎發(fā)育。自1996年克隆羊“多莉”誕生以來(lái)，核移植技術(shù)便引起了全球范圍內(nèi)的關(guān)注與研究熱潮。紡錘體是卵母細(xì)胞在減數(shù)分裂過(guò)程中形成的關(guān)鍵結(jié)構(gòu)，負(fù)責(zé)精確分離染色體，確保遺傳信息的正確傳遞。然而，紡錘體對(duì)外部環(huán)境極為敏感，容易受到冷凍過(guò)程中溫度波動(dòng)、滲透壓變化及冷凍保護(hù)劑毒性等因素的影響而發(fā)生損傷。因此，紡錘體卵冷凍技術(shù)的成功與否，直接關(guān)系到核移植后胚胎的發(fā)育潛力和質(zhì)量。紡錘體微管的動(dòng)態(tài)變化是細(xì)胞對(duì)外界刺激響應(yīng)的一部分。

在生殖醫(yī)學(xué)領(lǐng)域，卵母細(xì)胞的冷凍保存技術(shù)一直是研究的熱點(diǎn)之一。尤其是針對(duì)卵母細(xì)胞內(nèi)部高度復(fù)雜且精細(xì)的紡錘體結(jié)構(gòu)，其冷凍過(guò)程中的穩(wěn)定性與完整性直接關(guān)系到解凍后卵母細(xì)胞的存活率及發(fā)育潛能。紡錘體作為卵母細(xì)胞內(nèi)部的關(guān)鍵結(jié)構(gòu)，由微管等高分子物質(zhì)有序排列而成，具有雙折射性。這種特性使得紡錘體在偏振光下能夠呈現(xiàn)出獨(dú)特的形態(tài)和特征，從而被Polscope等偏振光顯微鏡捕捉并觀察。雙折射性紡錘體的形態(tài)、穩(wěn)定性和完整性對(duì)于卵母細(xì)胞的正常減數(shù)分裂及胚胎發(fā)育至關(guān)重要。紡錘體微管的動(dòng)態(tài)變化是細(xì)胞分裂過(guò)程中引人注目的現(xiàn)象之一。北京成熟卵母細(xì)胞紡錘體Hoechst染料

紡錘體微管的聚合與解聚受到多種酶的調(diào)控。北京核移植紡錘體改善分級(jí)

紡錘體觀測(cè)儀在補(bǔ)救ICSI中的應(yīng)用

我們知道，成熟的卵母細(xì)胞排出***極體。IVF加入精子后，精子會(huì)穿透層層障礙**終進(jìn)入卵子，隨著時(shí)間的推移，卵子的紡錘體會(huì)將染色單體拉向兩極，進(jìn)而排出第二極體，再往后大約加精后9-16小時(shí)，雌雄原核會(huì)出現(xiàn)，而原核的出現(xiàn)才是受精的標(biāo)志。但是對(duì)于那些沒(méi)有受精的卵子，到了原核出現(xiàn)的時(shí)間窗，發(fā)現(xiàn)沒(méi)有受精時(shí)再去補(bǔ)救ICSI，往往錯(cuò)過(guò)了卵子的比較好受精時(shí)間，因?yàn)闆](méi)有受精的卵子會(huì)在體外老化，即使受精，胚胎的發(fā)育潛能也很低。所以，我們?cè)诩泳�后�?-6小時(shí)，通過(guò)觀察第二極體的排出來(lái)初步判斷是否受精，**的增加了那些受精障礙患者的受精率，也避免了卵子的老化。

當(dāng)然，偶爾也會(huì)出現(xiàn)錯(cuò)誤補(bǔ)救。文獻(xiàn)報(bào)道對(duì)IVF受精后的未排出第二極體的卵母細(xì)胞進(jìn)行ICSI補(bǔ)救，實(shí)驗(yàn)組用紡錘體觀測(cè)儀觀察并統(tǒng)計(jì)紡錘體的數(shù)目，82.7%含有一個(gè)紡錘體，17.3%含有兩個(gè)紡錘體，并對(duì)含有一個(gè)紡錘體的卵母細(xì)胞進(jìn)行補(bǔ)救ICSI；而對(duì)照組并未用紡錘體觀測(cè)儀觀察紡錘體，只對(duì)未排出第二極體的卵母細(xì)胞進(jìn)行補(bǔ)救ICSI。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，使用紡錘體觀測(cè)儀觀察紡錘體的數(shù)目能顯著提高正常受精率，降低多原核受精比率。 北京核移植紡錘體改善分級(jí)