紡錘體觀測儀在補救ICSI中的應用

我們知道，成熟的卵母細胞排出***極體。IVF加入精子后，精子會穿透層層障礙**終進入卵子，隨著時間的推移，卵子的紡錘體會將染色單體拉向兩極，進而排出第二極體，再往后大約加精后9-16小時，雌雄原核會出現(xiàn)，而原核的出現(xiàn)才是受精的標志。但是對于那些沒有受精的卵子，到了原核出現(xiàn)的時間窗，發(fā)現(xiàn)沒有受精時再去補救ICSI，往往錯過了卵子的比較好受精時間，因為沒有受精的卵子會在體外老化，即使受精，胚胎的發(fā)育潛能也很低。所以，我們在加精后的4-6小時，通過觀察第二極體的排出來初步判斷是否受精，**的增加了那些受精障礙患者的受精率，也避免了卵子的老化。

當然，偶爾也會出現(xiàn)錯誤補救。文獻報道對IVF受精后的未排出第二極體的卵母細胞進行ICSI補救，實驗組用紡錘體觀測儀觀察并統(tǒng)計紡錘體的數(shù)目，82.7%含有一個紡錘體，17.3%含有兩個紡錘體，并對含有一個紡錘體的卵母細胞進行補救ICSI；而對照組并未用紡錘體觀測儀觀察紡錘體，只對未排出第二極體的卵母細胞進行補救ICSI。結果發(fā)現(xiàn)，使用紡錘體觀測儀觀察紡錘體的數(shù)目能顯著提高正常受精率，降低多原核受精比率。 紡錘體微管的正極朝向細胞兩極，負極則靠近染色體。北京克隆紡錘體卵質量評估

解凍后的卵母細胞在無損觀察技術的支持下，可以直接進行紡錘體觀察，無需進行任何形式的固定和染色處理。這一技術能夠迅速評估解凍后卵母細胞的質量，包括紡錘體的形態(tài)、位置、穩(wěn)定性等關鍵指標，為后續(xù)的受精和胚胎發(fā)育提供重要參考。無損觀察紡錘體技術已逐步應用于臨床輔助生殖技術中。醫(yī)生可以在不破壞卵母細胞活性的情況下，通過該技術評估其質量并選擇合適的卵母細胞進行受精和胚胎移植。這不僅提高了妊娠率和胚胎質量，還減少了因卵母細胞質量不佳而導致的移植失敗和流產(chǎn)風險。北京雙折射性紡錘體觀測儀顯微鏡下的紡錘體，如同精密的分子機器，引導染色體分離。

隨著技術的不斷成熟和成本的降低，無損觀察紡錘體卵冷凍技術有望在更多醫(yī)療機構中得到應用和推廣。這將為更多女性提供生育能力保存的機會，同時也為生殖醫(yī)學領域的發(fā)展注入新的活力。此外，隨著國家對輔助生殖技術的重視和支持力度的加大，無損觀察紡錘體卵冷凍技術有望在政策層面得到更多支持和推廣。無損觀察紡錘體卵冷凍研究是一項具有重要意義的研究課題。通過技術創(chuàng)新和臨床應用推廣，我們可以更好地評估卵母細胞的質量、優(yōu)化冷凍保存條件、提高解凍后卵母細胞的存活率和發(fā)育潛能，為女性生育能力的保存和利用提供更加可靠和有效的解決方案。

如何觀察紡錘體呢？

在普通光學顯微鏡下，人類卵母細胞是半透明的，無法對紡錘體的結構進行觀察和分析。傳統(tǒng)方法是用一種特異的DNA熒光染料對卵母細胞染色，在紫外光下可顯示紡錘體，這種免疫熒光方法對卵母細胞有損傷，不能應用于臨床。為了更好的觀測紡錘體，美國海洋生物學實驗室的R．Oldenbourg等利用紡錘體的雙折射特性，開發(fā)出偏振光顯微鏡�，F(xiàn)今，偏振光顯微鏡已經(jīng)發(fā)展成為一種無創(chuàng)性的觀察和分析紡錘體動態(tài)結構的顯微觀測系統(tǒng)，我們也叫它紡錘體觀測儀。它不僅能對雙折射性紡錘體信號的有無進行定性分析，還能對信號的強弱進行定量分析。 紡錘體在細胞分裂過程中展現(xiàn)出驚人的自我組裝能力。

在卵母細胞冷凍保存過程中，紡錘體的形態(tài)變化是評估冷凍效果的重要指標之一。傳統(tǒng)的紡錘體觀察方法往往需要將卵母細胞固定并進行免疫熒光染色，這不僅破壞了細胞的活性，還限制了進一步觀察其發(fā)育潛能的機會。而偏光成像技術則能夠在不解凍、不染色的情況下，直接觀察紡錘體的形態(tài)變化。通過Polscope系統(tǒng)，研究者可以實時監(jiān)測冷凍過程中紡錘體的形態(tài)變化，評估冷凍保護劑對紡錘體的保護效果，以及解凍后紡錘體的恢復情況。冷凍后的卵母細胞紡錘體及染色體異常率增高，這將直接影響解凍后卵母細胞的減數(shù)分裂進程和胚胎的染色體正常性。利用偏光成像技術，研究者可以準確評估冷凍前后紡錘體的異常率，包括紡錘體的形態(tài)、位置、穩(wěn)定性等參數(shù)。通過對比分析，可以明確冷凍過程對紡錘體的具體影響，為優(yōu)化冷凍保存條件提供科學依據(jù)。紡錘體的形成與細胞骨架的重構密切相關。上海卵母細胞紡錘體Oosight Basic

紡錘體微管的動態(tài)變化受到細胞周期蛋白的調控。北京克隆紡錘體卵質量評估

紡錘體是如何形成的（2）

       動粒微管連接染色體動粒與位于兩極的中心體。在有絲分裂前期，一旦核被膜解聚，由相反兩個方向的中心體伸出的動粒微管就會隨機地與染色體上的動粒結合而俘獲染色體，微管**終附著在動粒上，動粒微管把染色體和紡錘體連接在一起。在細胞分裂期的后期，分開后的染色單體被拉向兩極。染色體移動由兩個相互獨立且同步進行的過程所介導，分別為過程A和過程B。在過程A中，在連接微管和動粒的馬達蛋白的作用下，動粒微管解聚縮短，在動粒處產(chǎn)生的拉力使染色體移向兩極。極間微管是從一個中心體伸出的某些微管與從另一個中心體伸出的微管相互作用，阻止了它們的解聚，從而使微管結構相對穩(wěn)定，兩套微管的這種結合形成了有絲分裂紡錘體的基本框架，具有典型的兩極形態(tài)，產(chǎn)生這些微管的兩個中心體稱為紡錘極，這些相互作用的微管被稱為極間微管。在有絲分裂后期過程B中，極間微管的伸長和相互間的滑行使紡錘極向兩極方向移動。星體微管從中心體向周圍呈輻射狀分布，在有絲分裂后期過程B中，每一紡錘極上向外伸展的星體微管發(fā)出向外的力，拉動兩個紡錘極向兩極方向移動。

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