關(guān)于二代測(cè)序的簡介：

二代測(cè)序技術(shù)(Next-Generation Seguencing,NGS)也稱為高通量測(cè)序技術(shù)，是一種能夠同時(shí)對(duì)數(shù)百萬甚至數(shù)十億個(gè) DNA片段進(jìn)行測(cè)序的方法。與傳統(tǒng)的桑格測(cè)序相比二代測(cè)序技術(shù)具有高通量、高準(zhǔn)確性、高靈敏度和低成本等優(yōu)勢(shì)。

二代測(cè)序技術(shù)在大幅提高了測(cè)序速度的同時(shí)，大幅度的降低了測(cè)序成本，保持了高準(zhǔn)確性，以前完成一個(gè)人類基因組的測(cè)序需要3年時(shí)間，而使用二代測(cè)序技術(shù)則需要1周，但其序列讀長方面比起一代測(cè)序技術(shù)則要短很多，大多只100bp-150bp。

二代測(cè)序與Sanger測(cè)序相同嗎？徐匯區(qū)二代測(cè)序價(jià)格

二代測(cè)序—全外顯子測(cè)序的局限性

不能檢測(cè)所有的遺傳變異：它只能檢測(cè)外顯子區(qū)域的變異，對(duì)于非外顯子區(qū)域（如內(nèi)含子、基因間區(qū)域）的變異無法檢測(cè)，而這些區(qū)域的某些變異也可能對(duì)基因的表達(dá)和功能產(chǎn)生重要影響，如內(nèi)含子中的突變可能影響基因的剪接。

數(shù)據(jù)分析復(fù)雜：全外顯子測(cè)序會(huì)產(chǎn)生大量的數(shù)據(jù)，需要復(fù)雜的生物信息學(xué)工具和方法來進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。包括數(shù)據(jù)的質(zhì)量控制、變異的檢測(cè)和注釋、致病性的評(píng)估等多個(gè)環(huán)節(jié)，其中任何一個(gè)環(huán)節(jié)出現(xiàn)問題都可能導(dǎo)致錯(cuò)誤的結(jié)論。 靜安區(qū)二代測(cè)序運(yùn)用二代測(cè)序通量大，可以產(chǎn)生上G的reads.

二代測(cè)序的建庫步驟③

三、末端修復(fù)和加A尾（以DNA文庫為例）

末端修復(fù)：經(jīng)過片段化后的DNA末端可能是不平齊的，有5'-突出端或3'-突出端。末端修復(fù)反應(yīng)可以利用T4DNA聚合酶、Klenow片段等酶，將這些末端補(bǔ)平，使其成為平末端。T4DNA聚合酶具有5'→3'聚合酶活性和3'→5'外切酶活性，在合適的反應(yīng)緩沖液和dNTP（脫氧核糖核苷三磷酸）存在下，可以將突出的末端補(bǔ)平。

加A尾：在末端修復(fù)后的平末端DNA分子的3'-末端加上一個(gè)A堿基。這一步是為了后續(xù)連接帶有T-突出端的接頭做準(zhǔn)備，一般使用Klenow片段（3'→5'外切酶活性缺失）在dATP存在下進(jìn)行加A反應(yīng)，這樣可以使DNA片段能夠高效地與帶有T-突出端的測(cè)序接頭連接。

①二代測(cè)序一般多久出結(jié)果？

二代測(cè)序（Next-GenerationSequencing，NGS）出結(jié)果的時(shí)間會(huì)受到多種因素的影響，一般在數(shù)天到數(shù)周不等。

1、樣本類型和質(zhì)量

不同的樣本類型處理時(shí)間不同。例如，血液樣本相對(duì)容易處理，提取DNA的過程比較常規(guī)。如果是組織樣本，可能需要先進(jìn)行樣本的解離等復(fù)雜操作。如果樣本質(zhì)量高，DNA提取和文庫構(gòu)建等前期工作會(huì)比較順利，能加快整體進(jìn)程。但如果樣本量少或者DNA有降解等質(zhì)量問題，可能需要重新提取樣本或者進(jìn)行DNA修復(fù)等操作，這會(huì)**延長時(shí)間。例如，對(duì)于新鮮血液樣本，DNA提取可能在1-2天內(nèi)完成；而對(duì)于一些福爾馬林固定石蠟包埋（FFPE）組織樣本，可能需要3-5天來完成高質(zhì)量DNA的提取和后續(xù)的優(yōu)化處理。

16s測(cè)序是二代測(cè)序嗎？

二代測(cè)序的優(yōu)勢(shì)和劣勢(shì)分別有哪些？

優(yōu)勢(shì)：能夠同時(shí)得到大量的序列數(shù)據(jù)，相比于一代測(cè)序技術(shù)，通量提高了成千上萬倍;單條序列成本非常低廉。

劣勢(shì)：序列讀長較短，Illumina平臺(tái)為250-300bp，454平臺(tái)也只有500bp左右;由于建庫中利用了PCR富集序列，因此有一些含量較少的序列可能無法被大量擴(kuò)增，造成一些信息的丟失，且PCR過程中有一定概率會(huì)引入錯(cuò)配堿基。想要得到準(zhǔn)確和長度較長的拼接結(jié)果，需要測(cè)序的覆蓋率較高導(dǎo)致結(jié)果錯(cuò)誤較多和成本增加。 二代測(cè)序需要分析嗎？徐匯區(qū)二代測(cè)序價(jià)格

二代測(cè)序是基于PCR和基因芯片發(fā)展而來的DNA測(cè)序技術(shù)。徐匯區(qū)二代測(cè)序價(jià)格

不同二代測(cè)序技術(shù)平臺(tái)的速度

Illumina 測(cè)序平臺(tái)：這是目前市場(chǎng)上應(yīng)用較為***的二代測(cè)序平臺(tái)之一，其測(cè)序速度較快。例如 Illumina NovaSeq 系列，一次運(yùn)行可以在 1-3 天內(nèi)產(chǎn)生大量的數(shù)據(jù)，通量可達(dá)數(shù)億甚至數(shù)十億條讀長，能夠滿足大規(guī)?；蚪M學(xué)研究和臨床檢測(cè)的需求。

Roche 454 測(cè)序平臺(tái)：Roche 454 測(cè)序系統(tǒng)的測(cè)序速度也較快，其特點(diǎn)是測(cè)序片段比較長，高質(zhì)量的讀長能達(dá)到 400bp 左右，一次運(yùn)行可以在 24 小時(shí)左右完成對(duì)一定數(shù)量樣本的測(cè)序。

BGISEQ 系列：華大智造的 BGISEQ 系列測(cè)序儀在速度上也有出色表現(xiàn)，如全球二代測(cè)序速度**快設(shè)備 E25 量產(chǎn)，為快速測(cè)序提供了有力支持 徐匯區(qū)二代測(cè)序價(jià)格