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吉林組織免疫組化注意事項(xiàng)

來(lái)源: 發(fā)布時(shí)間:2024-05-05

免疫組化技術(shù)應(yīng)用于臨床cancer良惡性的判斷,英瀚斯生物為您介紹。對(duì)于反應(yīng)性增生還是cancer性增生,可用免疫球蛋白(Ig)的輕鏈抗體檢測(cè)B淋巴細(xì)胞增生的單克隆或多克隆性來(lái)區(qū)別。在濾泡反應(yīng)性增生時(shí),濾泡反應(yīng)中心的細(xì)胞不表達(dá)細(xì)胞凋亡蛋白(bcl-2),bcl-2陰性;而在濾泡性淋巴瘤中,由于90%以上cancer性濾泡細(xì)胞有bcl-2的高表達(dá),bcl-2陽(yáng)性。而增殖細(xì)胞核抗原(PCNA),周期素(Cycling),核抗原(Ki-67)通過(guò)對(duì)cancer細(xì)胞增生的程度作出評(píng)價(jià),從而提示增生細(xì)胞的良惡性。動(dòng)物、細(xì)胞的免疫組化、免疫熒光,就找英瀚斯生物!吉林組織免疫組化注意事項(xiàng)

吉林組織免疫組化注意事項(xiàng),免疫組化

做免疫組化時(shí)如何選擇一抗?

1、單克隆和多克隆抗體的選擇。由一種克隆產(chǎn)生的特異性抗體叫做單克隆抗體。單克隆抗體能目標(biāo)明確地與單一的特異抗原決定簇結(jié)合,就像導(dǎo)彈精確地命中目標(biāo)一樣。另一方面,即使是同一個(gè)抗原決定簇,在機(jī)體內(nèi)也可以由好幾種克隆來(lái)產(chǎn)生抗體,形成好幾種單克隆抗體混雜物,稱(chēng)為多克隆抗體。在抗原抗體反應(yīng)中,一般單克隆抗體特異性強(qiáng),但親和力相對(duì)小,檢測(cè)抗原靈敏度相對(duì)就低;而多克隆抗體特異性稍弱,但抗體的親和力強(qiáng),靈敏度高,但易出現(xiàn)非特異性染色(可以通過(guò)封閉等避免)。

2、應(yīng)用范圍的選擇。有的一抗只能用于Westernblotting,或免疫組化、免疫熒光、免疫沉淀等;甚至標(biāo)明石蠟切片或冰凍切片。

3、種屬反應(yīng)性的選擇(speciesreactivity)。這一點(diǎn)很重要,表明這種抗體可能存在種屬差別,且這種抗體適合檢測(cè)哪種種屬動(dòng)物體內(nèi)的抗原。

4、種屬來(lái)源,一般兔來(lái)源的多是多克隆抗體;而小鼠來(lái)源的多是單克隆抗體,但也有另外。根據(jù)此來(lái)源來(lái)選擇相應(yīng)的二抗。

5、生產(chǎn)廠(chǎng)家的選擇。


內(nèi)蒙古細(xì)胞免疫組化實(shí)驗(yàn)免疫組化流程是什么樣的?

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病理醫(yī)師日常工作中經(jīng)常說(shuō)的一句話(huà)應(yīng)該就是“做個(gè)免疫組化吧”;不管是臨床醫(yī)師,還是患者,他們問(wèn)的多的問(wèn)題則是“為什么要做免疫組化?”病理醫(yī)師通過(guò)“特殊染色”來(lái)進(jìn)行細(xì)胞的識(shí)別。這一做法的依據(jù)是特定細(xì)胞和組織中的成分不同、則化學(xué)性質(zhì)不同,通過(guò)染色的方法則可以呈現(xiàn)不同顏色。不過(guò),由于組織固定或儲(chǔ)存等,會(huì)造成相應(yīng)物質(zhì)的活性降低甚至消失,因而限制了特殊染色方法的應(yīng)用。隨著免疫學(xué)研究的進(jìn)展,根據(jù)抗原與相應(yīng)抗體間特異性結(jié)合的性質(zhì),則有了現(xiàn)在免疫組化的方法:不同細(xì)胞、不同組織中抗原有一定差異,抗體與被測(cè)組織中的特定抗原結(jié)合,進(jìn)而通過(guò)一定顯色方法將結(jié)合的抗體顯示出來(lái)。如有相應(yīng)顯色,則證實(shí)可能有被測(cè)抗原;無(wú)顯色則可能無(wú)被測(cè)抗原。當(dāng)然,這一方法中需注意相應(yīng)的“例外”,如抗體的非特異性結(jié)合、非特異性顯色,則容易造成“假陽(yáng)性”;或者雖有相關(guān)抗原、但所用抗體與該抗原并未結(jié)合等,則容易造成“假陰性”。隨著免疫組化的應(yīng)用經(jīng)驗(yàn)的增加,這些問(wèn)題在常規(guī)應(yīng)用中盡量得以避免,前者如各種顯色方法的優(yōu)化;后者如抗原修復(fù)方法的優(yōu)化、新型抗體開(kāi)發(fā)及選擇。

免疫組化如何才能充分脫蠟?

 (1)蠟不溶于水,如果脫蠟不干凈,少許蠟存留于切片上,將會(huì)引起染色不均勻、陽(yáng)性物時(shí)隱時(shí)現(xiàn)、真假難辨、背景染色增加等。為了解決上述的問(wèn)題,切片在染色前必須徹底脫蠟,目前用于脫蠟的試劑主要是二甲苯,因它脫蠟力強(qiáng),脫蠟時(shí)間較短; 

(2)脫蠟的時(shí)間要根據(jù)季節(jié),室溫和試劑的新鮮謀面是在不同。如果在夏天,室溫較高,脫蠟試劑也新鮮,則脫蠟時(shí)間不需很多,3-5分鐘就已足夠。如果在冬天,室溫較低,脫蠟試劑也較陳舊,則脫蠟時(shí)間需要延長(zhǎng),10-20分鐘或更長(zhǎng)。

(3)當(dāng)天切的切片,燒烤2小時(shí)后進(jìn)行染色,切片帶有溫度進(jìn)行脫蠟這將可加速脫蠟的過(guò)程,如果預(yù)先切好烤好的切片,在染色前,還必須對(duì)切片進(jìn)行加溫10-20分鐘,然后再行脫蠟,這樣脫蠟速度加快,效果魁偉更好??傊?,操作時(shí)應(yīng)根據(jù)不同的季節(jié),不同的室溫,不同的試劑來(lái)決定,脫蠟的時(shí)間,原則上是要徹底、干凈、完全地脫去切片上的蠟。

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免疫組化有哪幾種分類(lèi) ?

 1)按標(biāo)記物質(zhì)的種類(lèi),如熒光染料、放射性同位素、酶(主要有辣根過(guò)氧化物酶和堿性磷酸酶)、鐵蛋白、膠體金等,可分為免疫熒光法、放射免疫法、免疫酶標(biāo)法和免疫金銀法等。

 2)按染色步驟可分為直接法(又稱(chēng)一步法)和間接法(二步、三步或多步法)。與直接法相比,間接法的靈敏度提高了許多。

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3)按結(jié)合方式可分為抗原-抗體結(jié)合,如過(guò)氧化物酶-抗過(guò)氧化物酶(***)法;親和連接,如卵白素-生物素-過(guò)氧化物酶復(fù)合物(ABC)法、鏈霉菌抗生物素蛋白-過(guò)氧化物酶連結(jié)(SP)法等,其中SP法是比較常用的方法;聚合物鏈接,如即用型二步法,此方法尤其適合于內(nèi)源性生物素含量高的組織抗原檢測(cè)。 哪里可以做免疫組化??jī)?nèi)蒙古細(xì)胞免疫組化實(shí)驗(yàn)

病理報(bào)告中的免疫組化到底有什么作用?吉林組織免疫組化注意事項(xiàng)

免疫組化在什么情況下進(jìn)行組織抗原修復(fù),抗原修復(fù)的條件是什么? 

(1)由于組織中部分抗原在甲醛或多聚甲醛固定過(guò)程中,發(fā)生了蛋白之間交聯(lián)及醛基的封閉作用,從而失去抗原性。通過(guò)抗原修復(fù),使得細(xì)胞內(nèi)抗原決定族重新暴露,提高抗原檢測(cè)率。

(2)修復(fù)方法從強(qiáng)到弱一般分為三種,高壓修復(fù)、微波修復(fù)、胰酶修復(fù)。修復(fù)液也分為若干種(具體的可以查閱相關(guān)資料,大量的:中性的、高pH的等)。

(3)微波修復(fù),我們一般用6min*4次,效果不錯(cuò)。

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