免疫組化指的是根據抗體與抗原特異結合的原理來檢測組織切片中的抗原（如蛋白）。immuno的詞根來自操作中所使用的抗體，而histo意味著組織。另一種類似的技術是免疫細胞化學（Immunocytochemistry，簡稱ICC）。這兩個詞大家經?；熘?，看著好像差不多，但實際上還是有點區(qū)別。IHCvsICC對于IHC，組織是來自患者或動物，經過冷凍或石蠟包埋。將這些組織制成約4μm厚的切片，封片后再處理。通過這種方法，研究人員可觀察細胞組分的定位，同時維持周圍組織的原先結構。對于ICC，大部分細胞外基質及其他基質組分被去除，只剩下整個細胞來染色。ICC的來源可以是細胞懸液，來自患者或動物（如血涂片、拭子等），或在實驗室中進行的組織培養(yǎng)細胞系。 免疫組化可以看什么？遼寧病理免疫組化價格

免疫組化應該選擇石蠟切片還是冰凍切片？ 

（1）要求做冰凍切片的不一定能做石蠟切片，這是***我向一老師請教得出的結論。因為作石蠟切片時要高溫烤片，可能會破壞組織的抗原性，如果組織的抗原性較穩(wěn)定，則可作石蠟切片；但是要求做石蠟切片的，可作冰凍切片。

（2）冰凍切片的優(yōu)點是能夠較好的保存組織的抗原免疫活性，做免疫組化時不需抗原修復這一步。缺點是細胞內易形成冰晶而破壞細胞結構，可能會使抗原彌散；切片厚度較石蠟的厚，做的片子沒石蠟的漂亮。當你買一抗時，目錄上都寫著做什么樣的切片，如果它寫著只能做冰凍，就不能做石蠟，如寫著兩者都可，那就都能做。

（3）石蠟切片的優(yōu)點可以保持組織細胞的形態(tài)結構，且容易存放在室溫，而冰凍切片比較麻煩，一定要存在-80度的低溫冰箱中，尤其是用來做原位雜交的的切片，為了防止RNA降解，保存一貫很重要。由于石蠟切片可以切到4微米左右，所以原位雜交探針容易滲透到組織中去，容易成功，而且得到的顏色/形態(tài)都較冰凍切片好。

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免疫組化染色呈陰性結果的原因有哪些？

1、抗體濃度和質量問題以及抗體來源選擇錯誤。不是抗體濃度越高就越易出現陽性結果，抗原抗體反應有前帶和后帶效應，必須摸索比較好濃度。

2、抗原修復不全，對于甲醛固定的組織必須用充分抗原修復來打開抗原表位，以利于與抗體結合；建議微波修復用高火4次*6min試試。有人做過實驗，這是比較好的時間和次數。若不行，還可高壓修復。

3、組織切片本身這種抗原含量低。

4、血清封閉時間過長。

5、DAB孵育時間過短。

6、細胞通透不全，抗體未能充分進入胞內參與反應。

7、開始做免疫組化，建議一定要首先做個陽性對照片，排除抗體等問題。

免疫組化分類中免疫酶標方法，英瀚斯生物為您介紹。免疫酶標方法是繼免疫熒光后，于60年代發(fā)展起來的技術?；驹硎窍纫悦笜擞浀目贵w與組織或細胞作用，然后加入酶的底物，生成有色的不溶性產物或具有一定電子密度的顆粒，通過光鏡或電鏡，對細胞表面和細胞內的各種抗原成分進行定位研究。免疫酶標技術是目前定位準確、對比度好、染色標本可長期保存，適合于光、電鏡研究等。免疫酶標方法的發(fā)展非常迅速，已經衍生出了多種標記方法，目前在病理診斷中廣為使用的當屬***法（過氧化物酶-抗過氧化物酶）、ABC法（卵白素-生物素-過氧化物酶復合物）、SP法（鏈霉菌抗生物素蛋白-過氧化物酶）、即用型二步法（聚合物鏈接）等。免疫組化的樣本保存要求是什么？

細胞爬片免疫組化檢測實驗步驟

1、選擇貼壁良好的細胞爬片，用4%多聚甲醛固定后15min后自然晾干。

2、PBS洗3次，每次5min。3、切片放入3%過氧化氫溶液，室溫下孵育10min，以阻斷內源性過氧化物酶。

4、PBS洗3次，每次5min，甩干后5%BSA封閉20min（封閉電荷）。

5、去除BSA液，每張切片加入50μl稀釋的一抗覆蓋組織，4℃過夜。

6、PBS洗3次，每次5min。

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7、去除PBS液，每張切片加50μl-100μl相應種屬的二抗，4℃孵育50min。

8、PBS洗3次，每次5min。

9、去除PBS液，每張切片加50-100μl新鮮配制DAB溶液，顯微鏡控制顯色。

10、顯色完全后，蒸餾水或自來水沖洗，蘇木素復染，1%鹽酸酒精分化（1s），自來水沖洗，氨水返藍，流水沖洗。

11、切片經過梯度酒精（70-100%）10min一個梯度，脫水干燥，二甲苯透明，中性樹膠封固。 免疫組化protocol，詳情請看英瀚斯生物官網。江西做得好的免疫組化哪家好

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免疫組化如何比較大限度地降低組織非特異性染色？ 

（1）縮短一抗/二抗孵育時間、稀釋抗體來控制。這是重要的一條。

（2）一抗用多克隆抗體易出現非特異性著色，建議試用單克隆抗體看看。

（3）內源性過氧化物酶和生物素在肝臟、腎臟等組織含量很高（含血細胞多的組織），需要通過延長滅活時間和增加滅活劑濃度來降低背景染色； 

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（4）非特異性組分與抗體結合，這需要通過延長二抗來源的動物免疫血清封閉時間和適當增加濃度來加強封閉效果； 

（5）縮短DAB孵育時間或降低DAB濃度/過氧化氫濃度等； 

（6）適當增加PBS沖洗次數和浸洗時間，在一抗、二抗或SP孵育之后的浸洗尤為重要； 

（7）防止標本染色過程中出現干片，這容易增強非特異性著色。 遼寧病理免疫組化價格

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