PCR是一種具有選擇性的體外擴增DNA的片段的方法。其特異性由兩個人工合成的引物DNA序列決定。所謂引物是指與待擴增核酸片段兩端互補的寡核苷酸，其本質是ssDNA(單鏈DNA)的片段。指在引物指導下由酶催化的對特定模板（克隆或基因組DNA）的擴增反應，是模擬體內DNA復制過程，在體外特異性擴增基因片段的一種技術，在分子生物學中有普遍的應用，包括用于DNA作圖、DNA測序、分子系統(tǒng)遺傳學等。CR技術的基本原理類似于DNA的天然復制過程，其特異性依賴于與靶序列兩端互補的寡核苷酸引物。DNA的半保留復制是生物進化和傳代的重要途徑。雙鏈DNA在多種酶的作用下可以變性解旋成單鏈，在DNA聚合酶的參與下，根據堿基互補配對原則復制成同樣的兩分子拷貝。在實驗中發(fā)現(xiàn)，DNA在高溫時也可以發(fā)生變性解鏈，當溫度降低后又可以復性成為雙鏈。因此，通過溫度變化控制DNA的變性和復性，加入設計引物，DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的體外復制。英瀚斯生物可承接臨床樣本、動物組織、細胞樣本各類pcr檢測。四川靠譜pcr多少錢

PCR產物是否為特異性擴增，其結果是否準確可靠，必須對其進行嚴格的分析與鑒定，才能得出正確的結論。PCR產物的分析，可依據研究對象和目的不同而采用不同的分析方法。凝膠電泳分析：PCR產物電泳，EB溴乙錠染色紫外儀下觀察，初步判斷產物的特異性。PCR產物片段的大小應與預計的一致，特別是多重PCR，應用多對引物，其產物片斷都應符合預訐的大小，這是起碼條件。瓊脂糖凝膠電泳：通常應用1～2%的瓊脂糖凝膠，供檢測用。聚丙烯酰胺凝膠電泳：6～10%聚丙烯酰胺凝膠電泳分離效果比瓊脂糖好，條帶比較集中，可用于科研及檢測分析。酶切分析：根據PCR產物中限制性內切酶的位點，用相應的酶切、電泳分離后，獲得符合理論的片段，此法既能進行產物的鑒定，又能對靶基因分型，還能進行變異性研究。分子雜交：分子雜交是檢測PCR產物特異性的有力證據，也是檢測PCR產物堿基突變的有效方法。Southern印跡雜交：在兩引物之間另合成一條寡核苷酸鏈(內部寡核苷酸)標記后做探針，與PCR產物雜交。此法既可作特異性鑒定，又可以提高檢測PCR產物的靈敏度，還可知其分子量及條帶形狀，主要用于科研。湖南什么是pcrpcr檢測的價格是多少？

PCR實驗技術中的RT-PCR一步法和兩步法的優(yōu)缺點介紹：一步法：利用同一緩沖液，在同一體系中加入逆轉錄酶、引物、Taq酶、4種dNTP直接進行mRNA反轉錄與PCR擴增。發(fā)現(xiàn)Taq酶不僅具有DNA多聚酶的作用，而且具有反轉錄酶活性，可利用其雙重作用在同一體系中直接以mRNA為模板進行反轉錄和其后PCR擴增，從而使mRNA的PCR步驟更為簡化。所需樣品量減少到比較低限度，臨床小樣品的檢測非常有利。用一步法擴增可檢測出總RNA中小于1ng的低豐度mRNA.該法可用于低豐度mRNA的cDNA文庫的構建及特異cDNA的克隆，并有可能與Taq酶的測序技術相組合，使得自動反轉錄、基因擴增與基因轉錄產物的測序在單管中進行。兩步法：由于單管反應時RT和PCR都不能在比較好條件下進行并且容易相互干擾，常只適宜用基因特異引物擴增較短的基因，及定量PCR.兩步法則是將RT和PCR分別進行，這樣使得兩個反應充分發(fā)揮各自的特點，更為靈活而且嚴謹，適合那些GC含量、二級結構嚴重的模板或者是未知模板，以及多個基因的RT-PCR。

pcr是一種在體外擴增特定DNA序列的技術方法，通過與特定DNA區(qū)域兩端互補的寡核苷酸為引物（primer）在試管中DNA聚合酶選擇性地單獨復制合成介于兩引物直接的基因片段，如同DNA復制中的半保留復制一樣，新合成的基因片段與模板鏈形成新的DNA雙鏈，經反復的變性（denature）引物退火（anerling）和引物延伸（extention）三步循環(huán)，前一循環(huán)合成的DNA鏈成為下一循環(huán)引物結合的模板，每循環(huán)一次，反應體系的DNA的量就增加一倍，20-30次反復循環(huán)，即可由微量的DNA模板開始獲得大量的DNA特異片段。近年來，PCR迅速發(fā)展，已深入生命科學的各個領域，技術方法不端完善，基本的PCR實驗技術主要有經典PCR技術、RT-PCR技術、免疫-PCR技術、PCR-SSCP技術等。什么是pcr的溶解曲線？

PCR由變性--退火--延伸三個基本反應步驟構成：

1、模板DNA的變性：模板DNA經加熱至93℃左右一定時間后，使模板DNA雙鏈或經PCR擴增形成的雙鏈DNA解離，使之成為單鏈，以便它與引物結合，為下輪反應作準備。

2、模板DNA與引物的退火（復性）：模板DNA經加熱變性成單鏈后，溫度降至55℃左右，引物與模板DNA單鏈的互補序列配對結合。3、引物的延伸：DNA模板--引物結合物在72℃、DNA聚合酶（如TaqDNA聚合酶）的作用下，以dNTP為反應原料，靶序列為模板，按堿基互補配對與半保留復制原理，合成一條新的與模板DNA鏈互補的半保留復制鏈。重復循環(huán)變性--退火--延伸三過程就可獲得更多的“半保留復制鏈”，而且這種新鏈又可成為下次循環(huán)的模板。每完成一個循環(huán)需2～4分鐘，2～3小時就能將待擴目的基因擴增放大幾百萬倍 哪些公司可以做pcr檢測？江蘇組織pcr外包

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PCR設計引物應遵循以下原則：①引物長度：15-30bp，常用為20bp左右。②引物擴增跨度：以200-500bp為宜，特定條件下可擴增長至10kb的片段。③引物堿基：G+C含量以40-60%為宜，G+C太少擴增效果不佳，G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC比較好隨機分布，避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。④避免引物內部出現(xiàn)二級結構，避免兩條引物間互補，特別是3'端的互補，否則會形成引物二聚體，產生非特異的擴增條帶。⑤引物3'端的堿基，特別是較末及倒數第二個堿基，應嚴格要求配對，以避免因末端堿基不配對而導致PCR失敗。⑥引物中有或能加上合適的酶切位點，被擴增的靶序列比較好有適宜的酶切位點，這對酶切分析或分子克隆很有好處。⑦引物的特異性：引物應與核酸序列數據庫的其它序列無明顯同源性。引物量：每條引物的濃度0.1～1umol或10～100pmol，以比較低引物量產生所需要的結果為好，引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴增，且可增加引物之間形成二聚體的機會。四川靠譜pcr多少錢

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