ELISA與WB的原理一樣，在抗體包被的微孔板中加入待測樣品、封閉、一抗孵育，洗滌后加入酶標待測物形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，徹底洗滌后加顯色劑并用酶標儀測定吸光值，結尾用標準曲線計算外泌體表達量。ELISA能實現對外泌體特異性蛋白的定量。其他外泌體鑒定方法還有微流體測定法和外泌體蛋白質組學分析等。由于外泌體在各種生命過程中的重要作用及其作為疾病生物標志物和藥物輸送系統的潛力，人們對此領域的興趣越來越高。盡管目前在技術上取得了長足的進步，但尚未建立對外泌體進行準確和標準化鑒定以及定量的方法，關于外泌體的量應由囊泡顆粒的數量、囊泡蛋白的量或囊泡數與蛋白之比來定義仍存在比較多爭論。建立外泌體分離、表征以及效價測定的標準化方法將是外泌體作為診斷和診療用途之前需要解決的問題。利用外泌體自身的物理化學性質所研發(fā)的各種市售的外泌體分離提取試劑盒也能達到分離效果。河南外泌體脂質組學

流式細胞技術是細胞和小顆粒定性和定量表征的有效方法，其用于外泌體定量檢測的準確性也在不斷上升。將外泌體表面特異性標志物CD63、CD81等相應抗體進行標記，可用流式細胞儀檢測到陽性表達，從而實現對外泌體的定量。但流式細胞技術檢測時需要單顆粒懸浮液，當外泌體濃度高或分離過程中發(fā)生外泌體囊泡聚集時將導致一次觀察到多個顆粒，從而導致數據不準確。因此，為了通過流式細胞儀觀察，需要將外泌體通過免疫捕獲或共價結合固定在磁珠表面上，從而便于將外泌體囊泡暴露于已知或者預期在外泌體表面表達的抗原的熒光偶聯抗體中。在流式細胞術之前，可以在落射熒光顯微鏡（EPI）下觀察與磁珠和熒光抗體偶聯的外泌體囊泡。當樣品通過流式細胞儀時采集熒光信號，不只可以對外泌體進行高通量分析，還可以基于抗原表達對外泌體進行定量或分類。外泌體中常見的細胞質蛋白是Rabs蛋白，是鳥苷酸三磷酸酶家族的一種。外泌體質量研究外泌體膜可以與靶細胞膜直接融合，非選擇性的釋放其所含的蛋白質、mRNA以及microRNA。

免疫印跡或蛋白質印跡是分析外泌體較常用的方法之一，其原理是外泌體上特異性抗原與抗體結合。首先對樣品進行處理將囊泡裂解并將蛋白質變性，變性后，通過SDS-PAGE分離蛋白質，然后將其轉移到硝酸纖維素膜或聚偏二氟乙烯（PVDF）膜上并暴露于針對目的抗原的抗體中?？贵w特異性識別膜表面上的抗原，然后將膜暴露于第二抗體中。通過二抗的熒光標簽或與二抗偶聯的辣根過氧化物酶或堿性磷酸酶基團進行檢測。常用的標記蛋白為CD63、CD81、TSG101和ALIX等。但是此方法的特異性和重復性會受到所用抗體質量的限制。

細胞攝取診療性外泌體：從樹突狀細胞、成纖維細胞和間充質細胞中分離出的診療性外泌體可對靶細胞產生特定的作用，包括新抗原呈遞、免疫調節(jié)和藥物有效載荷傳遞。診療性外泌體對靶細胞的影響可能是通過不同的進入或相互作用機制來控制的。完整的外泌體的進入可能包括受體介導的內吞作用、網格蛋白包被小凹、脂筏、吞噬作用、小凹和大胞飲作用。外泌體內容物的進入或外泌體信號的誘導可能涉及配體受體誘導的細胞內信號或融合，從而將外泌體內容物沉積到細胞質中。近年來，隨著外泌體研究的不斷深入，它的應用已經涉及醫(yī)學基礎和免疫領域、寄生蟲領域。建立外泌體分離、表征以及效價測定的標準化方法將是外泌體作為診斷和診療用途之前需要解決的問題。

細胞攝取診療性外泌體：從樹突狀細胞、成纖維細胞和間充質細胞中分離出的診療性外泌體可對靶細胞產生特定的作用，包括新抗原呈遞、免疫調節(jié)和藥物有效載荷傳遞。診療性外泌體對靶細胞的影響可能是通過不同的進入或相互作用機制來控制的。完整的外泌體的進入可能包括受體介導的內吞作用、網格蛋白包被小凹、脂筏、吞噬作用、小凹和大胞飲作用。外泌體內容物的進入或外泌體信號的誘導可能涉及配體受體誘導的細胞內信號或融合，從而將外泌體內容物沉積到細胞質中。外泌體是分泌的細胞外囊泡的主要群體，是具有生物活性的脂雙層囊泡。河南外泌體脂質組學

外泌體普遍存在于細胞培養(yǎng)上清以及各種體液中，包括血液、唾液、尿液、乳汁等。河南外泌體脂質組學

外泌體的提取主要包括以下幾種方式：1、免疫磁珠法，這種方法可以保證外泌體形態(tài)的完整，特異性高、操作簡單、不需要昂貴的儀器設備，但是非中性pH和非生理性鹽濃度會影響外泌體生物活性，不便進行下一步的實驗。2、PS親和法，該方法將PS（磷脂酰絲氨酸）與磁珠結合，利用親和原理捕獲外泌體囊泡外的PS。該方法與免疫磁珠法相似，獲得的外泌體形態(tài)完整，純度較高。由于不使用變性劑，不影響外泌體的生物活性，外泌體可用于細胞共培養(yǎng)和體內注射。3、色譜法，這種方法分離到的外泌體在電鏡下大小均一，但是需要特殊的設備，應用不普遍。河南外泌體脂質組學

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