細胞外囊泡是蛋白質(zhì)、mRNA、miRNA和脂質(zhì)運輸來完成細胞間通訊通路的重要媒介,根據(jù)它們的大小和發(fā)生分為三類,包括外泌體、微泡和凋亡小體。其中,外泌體是直徑大約為40-100nm的包裝囊泡,由多種細胞分泌,內(nèi)含有特定的蛋白質(zhì)、脂質(zhì)、細胞因子或遺傳物質(zhì)。來源于不同的組織的外泌體不只具有其特異性蛋白分子,而且還包含其行使功能的關鍵分子。近年來,隨著外泌體研究的不斷深入,它的應用已經(jīng)涉及瘤子診療領域、醫(yī)學基礎和免疫領域、寄生蟲領域;臨床研究上已涉及心血管系統(tǒng)、內(nèi)分泌代謝系統(tǒng)等。外泌體的提取的方式:密度梯度離心法。細胞外泌體提取試劑盒分類
外泌體的脂質(zhì)和蛋白質(zhì)組成可以影響它們的藥代動力學特性,它們的天然成分可能在提高生物利用度和減少不良反應方面發(fā)揮作用。除了它們的診療潛力,外泌體也有幫助疾病診斷的潛力。它們已經(jīng)在所有的生物液體中被報道,并且通過生物液體取樣(液體活組織檢查)可以比較容易地獲得外泌體的復雜貨物的組成。基于外泌體的液體活檢在病癥和其他疾病的診斷和確定預后方面具有潛在的應用價值。疾病的進展和對診療的反應也可以通過外泌體的多組分分析來確定。河南外泌體Dil外泌體的大?。和饷隗w的直徑約30-150nm。
質(zhì)膜的連續(xù)內(nèi)陷較終導致多泡體的形成,多泡體可與細胞內(nèi)的其他囊泡和細胞器交叉,從而增加了外泌體成分的多樣性。根據(jù)細胞來源的不同,細胞外囊泡,包括外泌體,可以包含細胞的許多成分,包括DNA、RNA、脂質(zhì)、代謝物、胞質(zhì)和細胞表面蛋白。目前產(chǎn)生外泌體的生理目的尚不清楚,需要進一步研究。一個推測的作用是外泌體可能從細胞中去除多余和/或不必要的成分以維持細胞內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定。較近的研究也表明外泌體中特定細胞成分的功能、靶向、機制驅動的積累,提示它們在調(diào)節(jié)細胞間通訊中發(fā)揮作用。
酶聯(lián)免疫吸附測定(ELISA):將其中一種針對外泌體表面抗原的抗體固定在微孔板的表面上,將外泌體樣品暴露于含有固定抗體的孔中,由于抗體-抗原相互作用,表達抗原的外泌體將被捕獲固定在板上。將未捕獲的樣品內(nèi)容物洗掉,并使用另一種抗體檢測固定的外泌體。ELISA已用于從尿液、血漿和血清中分離出外泌體,當使用標準液(已知外泌體的量)創(chuàng)建標準曲線時,甚至可以進行定量。但是,此方法需要通過超速離心或超濾對樣品進行預處理。同樣,流場-流分離與紫外線分析儀和光散射檢測器相結合已被用于分析外泌體的大小和純度。外泌體屬于胞外囊泡類,除了外泌體之外細胞還分泌微泡以及其它的膜囊泡。外泌體的數(shù)量:人體中大約有1014個,近乎于平均每個細胞產(chǎn)生1000-10000個。
外泌體提取在短時間(一周之內(nèi))使用,可以放在4度保存,如果長時間保存可以放在-20度或-80度保存。也可以將外泌體進行分裝,分別放在-20度或-80度。外泌體檢測方法:外泌體分離之后,需要經(jīng)過一系列鑒定才能確定分離的是外泌體。鑒定方法從物理特征到表面分子標志物,多角度進行鑒定。l、透射電鏡鑒定法:簡稱TEM,適合外泌體雙層囊膜超微結構觀察,即通常為茶托型或一側凹陷的半球形。2、納米顆粒追蹤分析法:簡稱NTA,該方法能保證外泌體原始狀態(tài)、檢測速度快,檢測后能提供外泌體粒徑和濃度信息。外泌體產(chǎn)生相關的重要分子:Ral、ARF6、PLD2、RAB家族。細胞上清外泌體攝取
外泌體的提取分離方法:PEG-base沉淀法。細胞外泌體提取試劑盒分類
當外泌體在1980年初次被發(fā)現(xiàn)后,其被認為是細胞排泄廢物的一種方式,如今隨著大量對其生物來源、其物質(zhì)構成及運輸、細胞間信號的傳導以及在體液中的分布的研究發(fā)現(xiàn)外泌體具有多種多樣的功能。外泌體的功能取決于其所來源的細胞類型,其可參與到機體免疫應答、抗原提呈、細胞遷移、細胞分化、肉瘤侵襲等方方面面。有研究表明肉瘤來源的外泌體參與到肉瘤細胞與基底細胞的遺傳信息的交換,從而導致大量新生血管的生成,促進了肉瘤的生長與侵襲。細胞外泌體提取試劑盒分類
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