NTA技術(shù)已被作為外泌體表征手段之一,相較于其他表征方式NTA技術(shù)的樣本處理更簡單、更能保證外泌體原始狀態(tài)、檢測速度更快。大致方法是:將分離的外泌體樣本注入納米顆粒追蹤分析儀,用激光光束穿過樣本,激光在腔室內(nèi)與顆粒相互作用時會發(fā)生散射,通過裝有攝像頭的顯微鏡收集散射光,捕捉外泌體的布朗運動,實現(xiàn)顆??梢暬?。然后使用Stokes-Einstein方程來測量粒子的平均速度,繼而估算粒子的大小。NTA能夠測量粒徑10-1000nm之間的顆粒,包含了外泌體50-150nm的徑粒范圍,但是NTA鑒定需要大于0.5毫升的樣品體積以及優(yōu)化的數(shù)據(jù)收集和分析參數(shù),另外,NTA比較難區(qū)分與外泌體具有相似布朗運動的蛋白質(zhì)聚集體,因此無法排除其他物質(zhì)的干擾。外泌體的提取的方式:免疫磁珠法。乳液外泌體提取試劑盒生產(chǎn)廠家
近年來,外泌體的捕獲技術(shù)越來越多,微流體系也被用于外泌體提取,此方法能根據(jù)其物理和生化特性同時分離外泌體。采用這種方法獲得的樣品純度高,且可及時獲取外泌體用于疾病的相關(guān)檢測。在初次注射時外泌體粘附在微流控設(shè)備的內(nèi)表面,并在隨后的PBS注射中沖洗掉。此方法采用的設(shè)備復(fù)雜,所需的樣本量取決于流動通道的長度。另外,樣品量的注入速率比較低,因此,對于大樣品量,將需要較長的處理時間。外泌體在包括瘤子在內(nèi)的各種疾病的發(fā)病機理中具有重要的功能。目前,研究人員已開發(fā)了多種方法來分離外泌體,離心技術(shù)仍然是常用方法,其他方法,例如過濾、磁珠分離和色譜法等,也顯示出獨特的優(yōu)勢,但目前仍然沒有一種公認(rèn)有效的提取方法,研究人員應(yīng)針對不同來源的樣本以及不同的下游分析選取較適宜的提取方案。北京外泌體示蹤外泌體具有相似布朗運動的蛋白質(zhì)聚集體,因此無法排除其他物質(zhì)干擾。
外泌體的提取、純化和鑒定:每一個外泌體研究者較初都要為外泌體的分離提取而煩惱。選擇的分離方式是利用超速離心的方式分離外泌體,并且可以選用梯度密度離心法得到純度更高的外泌體。另外利用外泌體自身的物理化學(xué)性質(zhì)所研發(fā)的各種市售的外泌體分離提取試劑盒也能達(dá)到分離效果。提取的外泌體的鑒定方式主要是通過形態(tài)學(xué)、粒子大小以及標(biāo)志蛋白等方式實現(xiàn)的。近來的研究發(fā)現(xiàn)外泌體在比較多生理病理上起著重要的作用,如免疫中抗原呈遞、瘤子的生長與遷移、組織損傷的修復(fù)等。不同細(xì)胞分泌的外泌體具有不用的組成成分和功能,可作為疾病診斷的生物標(biāo)志物。外泌體具有脂質(zhì)雙層膜結(jié)構(gòu),能比較好的保護(hù)其包被的物質(zhì),且能靶向特定細(xì)胞或組織,因此是一種比較好靶向給藥系統(tǒng)。
外泌體的提取分離方法:1、超速離心法(差速離心):超離法是較常用的外泌體純化手段,采用低速離心、高速離心交替進(jìn)行,可分離到大小相近的囊泡顆粒。超離法因操作簡單,獲得的囊泡數(shù)量較多而廣受歡迎,但過程比較費時,且回收率不穩(wěn)定(可能與轉(zhuǎn)子類型有關(guān)),純度也受到質(zhì)疑;此外,重復(fù)離心操作還有可能對囊泡造成損害,從而降低其質(zhì)量。2、密度梯度離心:在超速離心力作用下,使蔗糖溶液形成從低到高連續(xù)分布的密度階層,是一種區(qū)帶分離法。通過密度梯度離心,樣品中的外泌體將在1.13-1.19g/ml的密度范圍富集。此法獲得的外泌體純度較高,但步驟繁瑣,耗時。外泌體作為一個新型的研究熱點,由于它在體內(nèi)存在的普遍性和獲取的便捷性。
流式細(xì)胞技術(shù)是細(xì)胞和小顆粒定性和定量表征的有效方法,其用于外泌體定量檢測的準(zhǔn)確性也在不斷上升。將外泌體表面特異性標(biāo)志物CD63、CD81等相應(yīng)抗體進(jìn)行標(biāo)記,可用流式細(xì)胞儀檢測到陽性表達(dá),從而實現(xiàn)對外泌體的定量。但流式細(xì)胞技術(shù)檢測時需要單顆粒懸浮液,當(dāng)外泌體濃度高或分離過程中發(fā)生外泌體囊泡聚集時將導(dǎo)致一次觀察到多個顆粒,從而導(dǎo)致數(shù)據(jù)不準(zhǔn)確。因此,為了通過流式細(xì)胞儀觀察,需要將外泌體通過免疫捕獲或共價結(jié)合固定在磁珠表面上,從而便于將外泌體囊泡暴露于已知或者預(yù)期在外泌體表面表達(dá)的抗原的熒光偶聯(lián)抗體中。在流式細(xì)胞術(shù)之前,可以在落射熒光顯微鏡(EPI)下觀察與磁珠和熒光抗體偶聯(lián)的外泌體囊泡。當(dāng)樣品通過流式細(xì)胞儀時采集熒光信號,不只可以對外泌體進(jìn)行高通量分析,還可以基于抗原表達(dá)對外泌體進(jìn)行定量或分類。外泌體中常見的細(xì)胞質(zhì)蛋白是Rabs蛋白,是鳥苷酸三磷酸酶家族的一種。外泌體普遍參與細(xì)胞間物質(zhì)運輸與信息傳遞,調(diào)控細(xì)胞生理活動。江西CD81外泌體慢病毒包裝
外泌體可通過其攜帶的蛋白質(zhì)、核酸、脂類等來調(diào)節(jié)受體細(xì)胞的生物學(xué)活性。乳液外泌體提取試劑盒生產(chǎn)廠家
尺寸排阻色譜法(SEC)根據(jù)大小來分離樣本。該技術(shù)應(yīng)用了一個裝有多孔聚合物珠的色譜柱,該聚合物珠包含多個孔和通道,分子根據(jù)其直徑穿過。半徑小的分子穿過柱子的孔遷移需要較長的時間,而大分子則較早地從柱子上洗脫下來。SEC可精確分離大分子和小分子。與離心分離方法相比,SEC分離的外泌體不受剪切力的影響,剪切力可能會改變囊泡的結(jié)構(gòu)。此方法分離到的外泌體純度較高,在電鏡下大小均一,但是獲取量少,所需設(shè)備特殊。此外,SEC方法與超濾相結(jié)合已被用于尿液來源的外泌體的分離和分析。乳液外泌體提取試劑盒生產(chǎn)廠家
宇玫博生物,2015-10-16正式啟動,成立了外泌體提取試劑盒,外泌體,外泌體檢測,外泌體提取等幾大市場布局,應(yīng)對行業(yè)變化,順應(yīng)市場趨勢發(fā)展,在創(chuàng)新中尋求突破,進(jìn)而提升Umibio的市場競爭力,把握市場機遇,推動醫(yī)藥健康產(chǎn)業(yè)的進(jìn)步。宇玫博生物經(jīng)營業(yè)績遍布國內(nèi)諸多地區(qū)地區(qū),業(yè)務(wù)布局涵蓋外泌體提取試劑盒,外泌體,外泌體檢測,外泌體提取等板塊。同時,企業(yè)針對用戶,在外泌體提取試劑盒,外泌體,外泌體檢測,外泌體提取等幾大領(lǐng)域,提供更多、更豐富的醫(yī)藥健康產(chǎn)品,進(jìn)一步為全國更多單位和企業(yè)提供更具針對性的醫(yī)藥健康服務(wù)。值得一提的是,宇玫博生物致力于為用戶帶去更為定向、專業(yè)的醫(yī)藥健康一體化解決方案,在有效降低用戶成本的同時,更能憑借科學(xué)的技術(shù)讓用戶極大限度地挖掘Umibio的應(yīng)用潛能。