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來源: 發(fā)布時(shí)間:2023-03-14

外泌體研究背景:胞外囊泡是從細(xì)胞膜上脫落或者由細(xì)胞分泌的具有雙層膜結(jié)構(gòu)的囊泡狀小體,主要由微囊泡、凋亡小體、外泌體組成。而外泌體是其中一類小囊泡,直徑為30~150nm,密度1.10~1.18g/ml,可攜帶核酸、蛋白質(zhì)質(zhì)和脂質(zhì)等,存在于血液、唾液、尿液等多種體液中。越來越多的研究證實(shí),外泌體可以通過細(xì)胞間轉(zhuǎn)移核酸、蛋白質(zhì)、脂質(zhì)等特定物質(zhì),發(fā)揮特殊的功能。如在抗原提呈細(xì)胞中呈遞抗原程中、腫細(xì)胞細(xì)胞發(fā)生了發(fā)展、神經(jīng)細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)過程中都發(fā)揮著重要作用。對(duì)外泌體的分析和檢測(cè)可以輔助疾病的早期診斷、療效評(píng)價(jià)和預(yù)后分析。外泌體可通過其攜帶的蛋白質(zhì)、核酸、脂類等來調(diào)節(jié)受體細(xì)胞的生物學(xué)活性。外泌體屬于胞外囊泡類,除了外泌體之外細(xì)胞還分泌微泡以及其它的膜囊泡。杭州胸水外泌體

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AFC自動(dòng)收集器是將qEV分離法這一過程自動(dòng)化的儀器,將用來收集外泌體樣本的微量離心管放置在AFC的中間轉(zhuǎn)盤內(nèi),根據(jù)稱重精確測(cè)量流體體積,可精確的測(cè)量到樣品中每一個(gè)液滴的重量并精確測(cè)量總重量。將在空隙體積之前從qEV柱洗脫的流體收集到AFC轉(zhuǎn)盤的單獨(dú)中心孔中并送至廢液桶,避免將不需要的空隙部分收集到微量離心管中。在提取期間,當(dāng)達(dá)到設(shè)定的提取體積后,轉(zhuǎn)盤會(huì)自動(dòng)旋轉(zhuǎn)到下一個(gè)微量離心管繼續(xù)收集,到收集完成后自動(dòng)停止。微滴式數(shù)字PCR技術(shù)不佳有效提高了核酸分子的擴(kuò)增效率,而且由于采用微滴計(jì)數(shù)的方法進(jìn)行定量,可以不依賴與RT-PCR的熒光信號(hào)和Ct值,對(duì)所測(cè)樣品中的核酸分子進(jìn)行一定定量。從研究上來講并不太嚴(yán)格區(qū)分外泌體或微泡。細(xì)胞外泌體lncRNA測(cè)序外泌體鑒定方法從物理特征到表面分子標(biāo)志物,多角度進(jìn)行鑒定。

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外泌體的相關(guān)成分:1、外泌體的膜同細(xì)胞一樣,是磷脂雙分子層。2、外泌體膜含有MHC-1/2蛋白,能綁定特異性的肽鏈。3、外泌體膜中有跨膜蛋白PGRL、LAMP1、LAMP2。4、外泌體膜中有膜轉(zhuǎn)運(yùn)融合蛋白annexins、RAN、GTPases。5、外泌體膜上有脂質(zhì)筏Chol、ceramide、SM、PC,限制膜流動(dòng),參與包括跨膜信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、物質(zhì)內(nèi)吞、脂質(zhì)及蛋白定向分選的多種功能。6、外泌體中含有核酸,包括miRNA、DNA、lncRNA、mRNA;同時(shí)還有一些蛋白、脂類也能被包裹到外泌體中。7、與外泌體產(chǎn)生相關(guān)的重要分子:Ral、ARF6、PLD2、RAB家族。8、一些物質(zhì)進(jìn)行外泌體中是特異性的:如hnRNPA2B1能結(jié)合lncRNA或miRNA特異性的序列(GGAG/CCCU),進(jìn)行主動(dòng)包埋。外泌體的膜同細(xì)胞一樣,是磷脂雙分子層。

細(xì)胞外囊泡是蛋白質(zhì)、mRNA、miRNA和脂質(zhì)運(yùn)輸來完成細(xì)胞間通訊通路的重要媒介,根據(jù)它們的大小和發(fā)生分為三類,包括外泌體、微泡和凋亡小體。其中,外泌體是直徑大約為40-100nm的包裝囊泡,由多種細(xì)胞分泌,內(nèi)含有特定的蛋白質(zhì)、脂質(zhì)、細(xì)胞因子或遺傳物質(zhì)。來源于不同的組織的外泌體不只具有其特異性蛋白分子,而且還包含其行使功能的關(guān)鍵分子。近年來,隨著外泌體研究的不斷深入,它的應(yīng)用已經(jīng)涉及瘤子診療領(lǐng)域、醫(yī)學(xué)基礎(chǔ)和免疫領(lǐng)域、寄生蟲領(lǐng)域;臨床研究上已涉及心血管系統(tǒng)、內(nèi)分泌代謝系統(tǒng)等。外泌體發(fā)揮功能方式:細(xì)胞-細(xì)胞之間的通訊,譬如抗原遞呈,這是發(fā)揮功能的主要方式。

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外泌體(Exosomes)是細(xì)胞分泌到胞外的一種囊泡(ExtracellularVesicles,EVs),其大小為30-150nm,具有雙層膜結(jié)構(gòu)和茶托狀形態(tài),含有豐富的內(nèi)含物(包括核酸、蛋白和脂質(zhì)等),參與細(xì)胞間的分子傳遞。外泌體普遍存在于細(xì)胞培養(yǎng)上清以及各種體液中,包括血液、唾液、尿液、乳汁等,同時(shí)也存在于組織樣本中,如腦組織、肌肉組織、脂肪組織等。腦組織分離方法簡(jiǎn)述:將腦組織剪成薄片,放入離心管中加上消化液進(jìn)行消化,經(jīng)水浴、反復(fù)輕輕上下顛倒,再用移液間斷緩慢吹吸至消化結(jié)束。隨后加入培養(yǎng)基于消化液中,混勻,置于冰上。再進(jìn)行一系列的差速超速離心過程,包括除雜、濾膜過濾、超離等。結(jié)尾用PBS重懸外泌體,用重懸后的外泌體進(jìn)行下面的透射電鏡(TEM)、納米粒徑追蹤分子(NTA)和markerWB鑒定。外泌體的提取分離方法:PEG-base沉淀法。宇玫博生物科技有限公司

外泌體是其中一類小囊泡,直徑為30~150nm,密度1.10~1.18g/ml。杭州胸水外泌體

當(dāng)外泌體在1980年初次被發(fā)現(xiàn)后,其被認(rèn)為是細(xì)胞排泄廢物的一種方式,如今隨著大量對(duì)其生物來源、其物質(zhì)構(gòu)成及運(yùn)輸、細(xì)胞間信號(hào)的傳導(dǎo)以及在體液中的分布的研究發(fā)現(xiàn)外泌體具有多種多樣的功能。外泌體的功能取決于其所來源的細(xì)胞類型,其可參與到機(jī)體免疫應(yīng)答、抗原提呈、細(xì)胞遷移、細(xì)胞分化、肉瘤侵襲等方方面面。有研究表明肉瘤來源的外泌體參與到肉瘤細(xì)胞與基底細(xì)胞的遺傳信息的交換,從而導(dǎo)致大量新生血管的生成,促進(jìn)了肉瘤的生長(zhǎng)與侵襲。杭州胸水外泌體

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