外泌體的提取主要包括以下幾種方式。一是超速離心法，這是目前外泌體提取較常用的方法。此種方法得到的外泌體量多，但是純度不足，電鏡鑒定時發(fā)現(xiàn)外泌體聚集成塊，由于微泡和外泌體沒有非常統(tǒng)一的鑒定標準，也有一些研究認為此種方法得到的是微泡不是外泌體。二是過濾離心，這種操作簡單、省時，不影響外泌體的生物活性，但同樣存在純度不足的問題。三是密度梯度離心法，用此種方法分離到的外泌體純度高，但是前期準備工作繁雜，耗時，量少。尚未完全發(fā)現(xiàn)調(diào)節(jié)外泌體細胞結合的途徑。外泌體的研究進展

Exosome，中文名外泌體，是一種能被大多數(shù)細胞分泌的微小膜泡，具有脂質(zhì)雙層膜結構，直徑大約40-100nm。盡管外泌體較初在1983年就被發(fā)現(xiàn)，但人們一直認為它只是一種細胞的廢棄物。然而較近幾年，人們發(fā)現(xiàn)這種微小膜泡中含有細胞特異的蛋白、脂質(zhì)和核酸，能作為信號分子傳遞給其他細胞從而改變其他細胞的功能。這些發(fā)現(xiàn)點燃了人們對細胞分泌膜泡的興趣。2015年，隨著精確醫(yī)學概念的提出，越來越多的人開始關注如何能做到疾病的精確診斷和診療。外泌體作為一個新型的研究熱點，由于它在體內(nèi)存在的普遍性和獲取的便捷性，已經(jīng)成為了疾病診斷診療的潛在有效方式，在精確醫(yī)學發(fā)展上有著光明的前景。外泌體的提取的方式：超速離心法。高純度外泌體外泌體產(chǎn)生于細胞中的多泡體。

外泌體的提取分離方法：1、PEG-base沉淀法：聚乙二醇可與疏水性蛋白和脂質(zhì)分子結合共沉淀，早先應用于從血清等樣本中收集病毒，現(xiàn)在也被用來沉淀外泌體，其原理可能與競爭性結合游離水分子有關。利用PEG沉淀外泌體存在不少問題：比如純度和回收率低，雜蛋白較多（假陽性），顆粒大小不均一，產(chǎn)生難以去除的聚合物，機械力或者吐溫-20等化學添加物將會破壞外泌體等，因此發(fā)表文章時易受質(zhì)疑。2、試劑盒提?。航鼛啄陙?，市場上已出現(xiàn)各種商業(yè)化的外泌體提取試劑盒，有的是通過特殊設計的過濾器過濾掉雜質(zhì)成分，有的則采用空間排阻色譜法(SEC)進行分離純化，也有的則利用化合物沉淀將法外泌體沉淀出來。

外泌體作為細胞間信使較早發(fā)現(xiàn)于體外培養(yǎng)的綿羊紅細胞上清液中，是直徑為30~150nm，密度為1.10~1.18g/ml的細胞外囊泡，攜帶豐富的遺傳信息，參與細胞信號轉(zhuǎn)導、細胞遷移、瘤子新生血管生長和瘤子微環(huán)境形成等過程。由于現(xiàn)存的分離技術是基于外泌體的大小、結構和膜蛋白的親和捕獲，比較難完全將其與其他囊泡和大分子蛋白質(zhì)復合體區(qū)分開，分離出的外泌體蛋白濃度通常會被高估，并且不同亞型外泌體之間可能會有不同蛋白質(zhì)特征，所以對分離的外泌體進行鑒定對于后期研究至關重要。需要開發(fā)大規(guī)模生產(chǎn)質(zhì)量可控的外泌體并快速純化外泌體的技術和策略。

外泌體的基本信息：1、外泌體的大?。和饷隗w的直徑約40-150nm。2、從研究上來講并不太嚴格區(qū)分外泌體或微泡。3、外泌體屬于胞外囊泡類，除了外泌體之外細胞還分泌微泡以及其它的膜囊泡。4、外泌體的直接比微泡的要小，后者直徑為100nm-1μm。5、外泌體的數(shù)量：人體中大約有1014個，近乎于平均每個細胞產(chǎn)生1000-10000個。6、外泌體的細胞源：人體中幾乎所有類型的細胞均能產(chǎn)生外泌體。7、外泌體具有異質(zhì)性，即使是同一種細胞分泌的外泌體都有可能具有比較大功能區(qū)別。8、外泌體的存在：外泌體幾乎存在于所有的組織、細胞間隙、體液中。9、外泌體產(chǎn)生于細胞中的多泡體。外泌體通過內(nèi)體途徑分泌到細胞外空間，并將各種生物活性分子（貨物）轉(zhuǎn)運至靶細胞。腦脊液提取試劑盒方法

外泌體的存在：外泌體幾乎存在于所有的組織、細胞間隙、體液中。外泌體的研究進展

流式細胞技術是細胞和小顆粒定性和定量表征的有效方法，其用于外泌體定量檢測的準確性也在不斷上升。將外泌體表面特異性標志物CD63、CD81等相應抗體進行標記，可用流式細胞儀檢測到陽性表達，從而實現(xiàn)對外泌體的定量。但流式細胞技術檢測時需要單顆粒懸浮液，當外泌體濃度高或分離過程中發(fā)生外泌體囊泡聚集時將導致一次觀察到多個顆粒，從而導致數(shù)據(jù)不準確。因此，為了通過流式細胞儀觀察，需要將外泌體通過免疫捕獲或共價結合固定在磁珠表面上，從而便于將外泌體囊泡暴露于已知或者預期在外泌體表面表達的抗原的熒光偶聯(lián)抗體中。在流式細胞術之前，可在落射熒光顯微鏡（EPI）下觀察與磁珠和熒光抗體偶聯(lián)的外泌體囊泡。當樣品通過流式細胞儀時采集熒光信號，不只可以對外泌體進行高通量分析，還可以基于抗原表達對外泌體進行定量或分類。外泌體的研究進展

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