根據(jù)內(nèi)侵量的不同,可以產(chǎn)生不同尺寸、不同含量的ILV。LSEs產(chǎn)生的MVBs具有確定的ILV聚集(未來(lái)的外泌體)。MVBs可以與自噬體融合,較終其內(nèi)容物在溶酶體中降解。降解產(chǎn)物可被細(xì)胞回收利用。MVBs也可以直接與溶酶體融合降解。不遵循這一軌跡的MVBs可通過(guò)細(xì)胞骨架和微管網(wǎng)絡(luò)轉(zhuǎn)運(yùn)至質(zhì)膜,借助mvb-??康鞍淄?吭谫|(zhì)膜的腔側(cè)。隨后胞吐導(dǎo)致具有與質(zhì)膜相似的脂質(zhì)雙分子層方向的外泌體的釋放。有幾種蛋白參與了外泌體的生物發(fā)生,包括RabGTPases、ESCRT蛋白,以及其他也被用作外泌體標(biāo)記的蛋白(CD9、CD81、CD63、flotillin、TSG101、神經(jīng)酰胺和Alix)。利用外泌體自身的物理化學(xué)性質(zhì)所研發(fā)的各種市售的外泌體分離提取試劑盒也能達(dá)到分離效果。研究所外泌體提取試劑盒報(bào)價(jià)
外泌體的提取、純化和鑒定:每一個(gè)外泌體研究者較初都要為外泌體的分離提取而煩惱。選擇的分離方式是利用超速離心的方式分離外泌體,并且可以選用梯度密度離心法得到純度更高的外泌體。另外利用外泌體自身的物理化學(xué)性質(zhì)所研發(fā)的各種市售的外泌體分離提取試劑盒也能達(dá)到分離效果。提取的外泌體的鑒定方式主要是通過(guò)形態(tài)學(xué)、粒子大小以及標(biāo)志蛋白等方式實(shí)現(xiàn)的。近來(lái)的研究發(fā)現(xiàn)外泌體在比較多生理病理上起著重要的作用,如免疫中抗原呈遞、瘤子的生長(zhǎng)與遷移、組織損傷的修復(fù)等。不同細(xì)胞分泌的外泌體具有不用的組成成分和功能,可作為疾病診斷的生物標(biāo)志物。外泌體具有脂質(zhì)雙層膜結(jié)構(gòu),能比較好的保護(hù)其包被的物質(zhì),且能靶向特定細(xì)胞或組織,因此是一種比較好靶向給藥系統(tǒng)。外泌體提取蛋白方法外泌體可以包含不同類型的細(xì)胞表面蛋白、細(xì)胞內(nèi)蛋白、RNA、DNA、氨基酸和代謝物。
AFC自動(dòng)收集器是將qEV分離法這一過(guò)程自動(dòng)化的儀器,將用來(lái)收集外泌體樣本的微量離心管放置在AFC的中間轉(zhuǎn)盤內(nèi),根據(jù)稱重精確測(cè)量流體體積,可精確的測(cè)量到樣品中每一個(gè)液滴的重量并精確測(cè)量總重量。將在空隙體積之前從qEV柱洗脫的流體收集到AFC轉(zhuǎn)盤的單獨(dú)中心孔中并送至廢液桶,避免將不需要的空隙部分收集到微量離心管中。在提取期間,當(dāng)達(dá)到設(shè)定的提取體積后,轉(zhuǎn)盤會(huì)自動(dòng)旋轉(zhuǎn)到下一個(gè)微量離心管繼續(xù)收集,到收集完成后自動(dòng)停止。微滴式數(shù)字PCR技術(shù)不佳有效提高了核酸分子的擴(kuò)增效率,而且由于采用微滴計(jì)數(shù)的方法進(jìn)行定量,可以不依賴與RT-PCR的熒光信號(hào)和Ct值,對(duì)所測(cè)樣品中的核酸分子進(jìn)行一定定量。
外泌體遞送藥物的優(yōu)勢(shì):許多新的候選藥物(例如蛋白質(zhì)和核酸)在體內(nèi)環(huán)境中高度不穩(wěn)定,對(duì)診療結(jié)果的效果提出了重大挑戰(zhàn)。鑒于與許多當(dāng)前的納米微粒遞送系統(tǒng)相關(guān)的問(wèn)題,外泌體作為“自然的遞送系統(tǒng)”允許遞送這些生物分子。由于外泌體體積小和其本身就是細(xì)胞產(chǎn)物,通過(guò)外泌體遞送藥物可以避免巨噬細(xì)胞的吞噬作用或降解,還可以在體內(nèi)長(zhǎng)時(shí)間循環(huán),保持效果。其中,外泌體能夠穿過(guò)血腦屏障以將特定藥物輸送到中樞的神經(jīng)系統(tǒng)是外泌體遞送藥物的一個(gè)明顯優(yōu)勢(shì)。外泌體膜中有跨膜蛋白PGRL、LAMP1、LAMP2。外泌體產(chǎn)生相關(guān)的重要分子:Ral、ARF6、PLD2、RAB家族。
NTA技術(shù)已被作為外泌體表征手段之一,相較于其他表征方式NTA技術(shù)的樣本處理更簡(jiǎn)單、更能保證外泌體原始狀態(tài)、檢測(cè)速度更快。大致方法是:將分離的外泌體樣本注入納米顆粒追蹤分析儀,用激光光束穿過(guò)樣本,激光在腔室內(nèi)與顆粒相互作用時(shí)會(huì)發(fā)生散射,通過(guò)裝有攝像頭的顯微鏡收集散射光,捕捉外泌體的布朗運(yùn)動(dòng),實(shí)現(xiàn)顆粒可視化。然后使用Stokes-Einstein方程來(lái)測(cè)量粒子的平均速度,繼而估算粒子的大小。NTA能夠測(cè)量粒徑10-1000nm之間的顆粒,包含了外泌體50-150nm的徑粒范圍,但是NTA鑒定需要大于0.5毫升的樣品體積以及優(yōu)化的數(shù)據(jù)收集和分析參數(shù),另外,NTA比較難區(qū)分與外泌體具有相似布朗運(yùn)動(dòng)的蛋白質(zhì)聚集體,因此無(wú)法排除其他物質(zhì)的干擾。采用電子顯微鏡檢測(cè)外泌體時(shí)對(duì)樣品的預(yù)處理和制備要求較高,外泌體的提取方法和品質(zhì)會(huì)對(duì)電鏡結(jié)果造成影響。血清外泌體和血漿外泌體
外泌體通過(guò)內(nèi)體途徑分泌到細(xì)胞外空間,并將各種生物活性分子(貨物)轉(zhuǎn)運(yùn)至靶細(xì)胞。研究所外泌體提取試劑盒報(bào)價(jià)
密度梯度離心法根據(jù)在蔗糖、碘海醇或碘克沙醇等惰性溶液中的浮力密度將外泌體分成特定的層,目前普遍應(yīng)用的是蔗糖,這種方法可以成功地將亞細(xì)胞成分(例如過(guò)氧化物酶體,線粒體和核內(nèi)體)分離到密度梯度溶液中的不同層中。樣品被放置在梯度的頂部,當(dāng)施加離心力時(shí),樣品中的顆粒以獨(dú)特的速率通過(guò)梯度,該梯度以從上到下的密度增加。樣品中的外泌體將在1.13-1.19g/ml的密度范圍富集,隨后可以通過(guò)分餾收集,密度梯度超速離心對(duì)從蛋白質(zhì)聚集體和非膜顆粒中分離出外泌體非常有效。此方法獲得的外泌體純度較高,但步驟繁瑣、費(fèi)時(shí)且會(huì)造成外泌體損失。免疫印跡或蛋白質(zhì)印跡是分析外泌體較常用的方法之一,其原理是外泌體上特異性抗原與抗體結(jié)合。研究所外泌體提取試劑盒報(bào)價(jià)
上海宇玫博生物科技有限公司正式組建于2015-10-16,將通過(guò)提供以外泌體提取試劑盒,外泌體,外泌體檢測(cè),外泌體提取等服務(wù)于于一體的組合服務(wù)。旗下Umibio在醫(yī)藥健康行業(yè)擁有一定的地位,品牌價(jià)值持續(xù)增長(zhǎng),有望成為行業(yè)中的佼佼者。我們?cè)诎l(fā)展業(yè)務(wù)的同時(shí),進(jìn)一步推動(dòng)了品牌價(jià)值完善。隨著業(yè)務(wù)能力的增長(zhǎng),以及品牌價(jià)值的提升,也逐漸形成醫(yī)藥健康綜合一體化能力。上海宇玫博生物科技有限公司業(yè)務(wù)范圍涉及一般項(xiàng)目:技術(shù)服務(wù)、技術(shù)開(kāi)發(fā)、技術(shù)咨詢、技術(shù)交流、技術(shù)轉(zhuǎn)讓、技術(shù)推廣;生物基材料技術(shù)研發(fā);生物基材料銷售;五金產(chǎn)品批發(fā);電子元器件批發(fā);計(jì)算機(jī)軟硬件及輔助設(shè)備批發(fā);工藝美術(shù)品及收藏品批發(fā)(象牙及其制品除外);化工產(chǎn)品銷售(不含許可類化工產(chǎn)品);實(shí)驗(yàn)分析儀器銷售;環(huán)境保護(hù)設(shè)備銷售;電力電子元器件銷售;電子產(chǎn)品銷售;機(jī)械設(shè)備銷售;儀器儀表銷售;辦公用品銷售;塑料制品銷售;橡膠制品銷售;勞動(dòng)保護(hù)用品銷售。(除依法須經(jīng)批準(zhǔn)的項(xiàng)目外,憑營(yíng)業(yè)執(zhí)照依法自主開(kāi)展經(jīng)營(yíng)活動(dòng))許可項(xiàng)目:貨物進(jìn)出口;技術(shù)進(jìn)出口。(依法須經(jīng)批準(zhǔn)的項(xiàng)目,經(jīng)相關(guān)部門批準(zhǔn)后方可開(kāi)展經(jīng)營(yíng)活動(dòng),具體經(jīng)營(yíng)項(xiàng)目以相關(guān)部門批準(zhǔn)文件或許可證件為準(zhǔn))等多個(gè)環(huán)節(jié),在國(guó)內(nèi)醫(yī)藥健康行業(yè)擁有綜合優(yōu)勢(shì)。在外泌體提取試劑盒,外泌體,外泌體檢測(cè),外泌體提取等領(lǐng)域完成了眾多可靠項(xiàng)目。