外泌體的來源與特征：外泌體是一種存在于細(xì)胞外的多囊泡體，通過細(xì)胞內(nèi)吞泡膜向內(nèi)凹陷形成，其大小均一，直徑為40-100nm，密度為1.10-1.18g/mL。外泌體可由間充質(zhì)干細(xì)胞、淋巴細(xì)胞和腫細(xì)胞細(xì)胞等多種類型細(xì)胞主動分泌釋放。外泌體內(nèi)主要含有核酸、蛋白質(zhì)和脂質(zhì)等，可作為疾病診斷標(biāo)記物、調(diào)控靶細(xì)胞功能、參與細(xì)胞生物學(xué)活動等。例如：含有miR-140-5p的滑膜間充質(zhì)干細(xì)胞來源外泌體(SMSC-Exo影響軟骨組織再生；骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞來源外泌體攜帶的miR-196a可調(diào)節(jié)成骨細(xì)胞分化促進(jìn)大鼠顱骨缺損的骨再生。外泌體作為核酸的藥物遞送載體。外泌體發(fā)揮功能：將細(xì)胞或組織中多余的或者有害的分子排除，這為研究生物標(biāo)志物提供了可能。干細(xì)胞外泌體提取

外泌體的提取分離方法：1、超濾離心：由于外泌體是一個大小約幾十納米的囊狀小體，大于一般蛋白質(zhì)，利用不同截留相對分子質(zhì)量(MWCO)的超濾膜對樣品進(jìn)行選擇性分離，便可獲得外泌體。超濾離心法簡單高效，且不影響外泌體的生物活性，是提取細(xì)胞外泌體的一種新方法。2、磁珠免疫法：外泌體表面有其特異性標(biāo)記物（如CD63、CD9蛋白），用包被抗標(biāo)記物抗體的磁珠與外泌體囊泡孵育后結(jié)合，即可將外泌體吸附并分離出來。磁珠法具有特異性高、操作簡便、不影響外泌體形態(tài)完整等優(yōu)點，但是效率低，外泌體生物活性易受pH和鹽濃度影響，不利于下游實驗，難以普遍普及。乳液提取試劑盒步驟外泌體發(fā)揮功能方式：細(xì)胞-細(xì)胞之間的通訊，譬如抗原遞呈，這是發(fā)揮功能的主要方式。

磁珠免疫法分離外泌體：將針對目的抗原的抗體通過生物素-鏈霉親和素連接到磁珠表面，然后將磁珠與樣品共孵育，使外泌體特異性結(jié)合到磁珠上形成磁珠-外泌體復(fù)合物，再用蒸餾水或者PBS沖洗，結(jié)尾用甘氨酸-Tris-HCl溶液洗脫獲得外泌體。該方法相對于ELISA的好處主要是，珠粒提供了更大的表面積來捕獲外泌體，從而提高了分離效率。此外，使用磁珠時，樣品起始體積沒有上限，而基于微孔板的ELISA分析的較大樣品體積為100μL，且ELISA洗脫雜質(zhì)時容易造成孔間交叉污染。當(dāng)將磁珠法與金標(biāo)準(zhǔn)外泌體分離方法進(jìn)行比較時，磁珠法可分離出更純凈的外泌體，特異性高、速度更快，并且不需要昂貴的儀器。另外，與其他分離方法相比，磁珠法不影響外泌體形態(tài)。但是采用磁珠法時，外泌體生物活性易受PH和鹽濃度影響。

外泌體的提取、純化和鑒定：每一個外泌體研究者較初都要為外泌體的分離提取而煩惱。選擇的分離方式是利用超速離心的方式分離外泌體，并且可以選用梯度密度離心法得到純度更高的外泌體。另外利用外泌體自身的物理化學(xué)性質(zhì)所研發(fā)的各種市售的外泌體分離提取試劑盒也能達(dá)到分離效果。提取的外泌體的鑒定方式主要是通過形態(tài)學(xué)（電子顯微鏡技術(shù)）、粒子大小以及標(biāo)志蛋白等方式實現(xiàn)的。近來的研究發(fā)現(xiàn)外泌體在比較多生理病理上起著重要的作用，如免疫中抗原呈遞、瘤子的生長與遷移、組織損傷的修復(fù)等。不同細(xì)胞分泌的外泌體具有不用的組成成分和功能，可作為疾病診斷的生物標(biāo)志物。外泌體具有脂質(zhì)雙層膜結(jié)構(gòu)，能比較好的保護(hù)其包被的物質(zhì)，且能靶向特定細(xì)胞或組織，因此是一種比較好靶向給藥系統(tǒng)。外泌體膜蛋白可以被蛋白酶剪切，剪切的碎片可以作為配體與細(xì)胞膜上的受體結(jié)合，從而活躍細(xì)胞內(nèi)的信號通路。

外泌體的提取分離方法：1、PEG-base沉淀法：聚乙二醇（PEG）可與疏水性蛋白和脂質(zhì)分子結(jié)合共沉淀，早先應(yīng)用于從血清等樣本中收集病毒，現(xiàn)在也被用來沉淀外泌體，其原理可能與競爭性結(jié)合游離水分子有關(guān)。利用PEG沉淀外泌體存在不少問題：比如純度和回收率低，雜蛋白較多（假陽性），顆粒大小不均一，產(chǎn)生難以去除的聚合物，機(jī)械力或者吐溫-20等化學(xué)添加物將會破壞外泌體等，因此發(fā)表文章時易受質(zhì)疑。2、試劑盒提?。航鼛啄陙恚袌錾弦殉霈F(xiàn)各種商業(yè)化的外泌體提取試劑盒，有的是通過特殊設(shè)計的過濾器過濾掉雜質(zhì)成分，有的則采用空間排阻色譜法(SEC)進(jìn)行分離純化，也有的則利用化合物沉淀將法外泌體沉淀出來。選擇的分離方式是利用超速離心的方式分離外泌體，并且可以選用梯度密度離心法得到純度更高的外泌體。牛奶提取試劑盒應(yīng)用

外泌體的作用是消除廢物并介導(dǎo)大腦活動，從而阻止神經(jīng)退行性疾病的發(fā)病機(jī)理。干細(xì)胞外泌體提取

外泌體的脂質(zhì)和蛋白質(zhì)組成可以影響它們的藥代動力學(xué)特性，它們的天然成分可能在提高生物利用度和減少不良反應(yīng)方面發(fā)揮作用。除了它們的診療潛力，外泌體也有幫助疾病診斷的潛力。它們已經(jīng)在所有的生物液體中被報道，并且通過生物液體取樣(液體活組織檢查)可以比較容易地獲得外泌體的復(fù)雜貨物的組成?；谕饷隗w的液體活檢在病癥和其他疾病的診斷和確定預(yù)后方面具有潛在的應(yīng)用價值。疾病的進(jìn)展和對診療的反應(yīng)也可以通過外泌體的多組分分析來確定。干細(xì)胞外泌體提取

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