細胞外小泡通過充當脂肪組織、肝臟、骨骼肌和免疫細胞之間的細胞間通訊方式,在肥胖及其代謝并發(fā)癥的發(fā)展中發(fā)揮作用。外泌體可能在外周胰島素敏感性的調(diào)節(jié)中起作用,外周胰島素敏感性是T2D發(fā)病機理的主要組成部分。外泌體似乎通過至少兩種不同的機制來調(diào)節(jié)胰島素敏感性,即通過調(diào)節(jié)炎癥或通過與胰島素反應(yīng)性部位的直接相互作用。后者可通過與主要胰島素信號分子(例如磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/Akt信號通路)相互作用而影響胰島素信號通路而直接或間接發(fā)生。與對照組相比,糖尿病患者的血漿EV含量更高,并且與對照組相比,糖尿病小鼠的血漿外泌體數(shù)量也更高。然而,確定外泌體的作用及其在肝/腸軸通訊中的潛在作用將需要對它們的組成有更好的了解,特別是飲食是否會改變腸源性外泌體的含量,因此就胰島素反應(yīng)而言它們的生物學功能尚未研究。外泌體較有用的特性之一是它們穿過屏障(如細胞質(zhì)膜和血/腦屏障)的能力。植物外泌體提取試劑盒應(yīng)用
外泌體的臨床應(yīng)用:間充質(zhì)干細胞是目前較普遍使用的細胞類型,它具有自我更新,多向分化、分泌細胞因子和細胞外囊泡體、免疫調(diào)節(jié)、來源普遍等特點,在流感病毒的臨床診療中取得了良好的成果。間充質(zhì)干細胞來源外泌體與間充質(zhì)干細胞有著相似的功能,包括修復與再生組織、阻止炎癥反應(yīng)及調(diào)節(jié)機體免疫,但外泌體相對于間充質(zhì)干細胞又有許多優(yōu)勢。首先,間充質(zhì)干細胞來源外泌體更穩(wěn)定,更好保存,易于管理和控制,可以人為改變其內(nèi)容物的種類和數(shù)量。其次,它們沒有活細胞,不會像間充質(zhì)干細胞那樣可能會過多增殖而放大療效或者病變導致疾病加重;另外,它有可能避免某些針對間充質(zhì)干細胞的調(diào)控問題,間充質(zhì)干細胞來源外泌體有代替間充質(zhì)干細胞的趨勢。姝美薈v肌外泌體通過臨床數(shù)據(jù)分析顯示外泌體整合素可作為預(yù)測腫細胞轉(zhuǎn)移的部位傾向性的診斷指標。
外泌體的提取主要包括以下幾種方式。一是超速離心法,這是目前外泌體提取較常用的方法。此種方法得到的外泌體量多,但是純度不足,電鏡鑒定時發(fā)現(xiàn)外泌體聚集成塊,由于微泡和外泌體沒有非常統(tǒng)一的鑒定標準,也有一些研究認為此種方法得到的是微泡不是外泌體。二是過濾離心,這種操作簡單、省時,不影響外泌體的生物活性,但同樣存在純度不足的問題。三是密度梯度離心法,用此種方法分離到的外泌體純度高,但是前期準備工作繁雜,耗時,量少。
近年來,外泌體的捕獲技術(shù)越來越多,微流體系也被用于外泌體提取,此方法能根據(jù)其物理和生化特性同時分離外泌體。采用這種方法獲得的樣品純度高,且可及時獲取外泌體用于疾病的相關(guān)檢測。在初次注射時外泌體粘附在微流控設(shè)備的內(nèi)表面,并在隨后的PBS注射中沖洗掉。此方法采用的設(shè)備復雜,所需的樣本量取決于流動通道的長度。另外,樣品量的注入速率比較低,因此,對于大樣品量,將需要較長的處理時間。外泌體在包括瘤子在內(nèi)的各種疾病的發(fā)病機理中具有重要的功能。目前,研究人員已經(jīng)開發(fā)了多種方法來分離外泌體,離心技術(shù)仍然是常用方法,其他方法,例如過濾、磁珠分離和色譜法等,也顯示出獨特的優(yōu)勢,但目前仍然沒有一種公認有效的提取方法,研究人員應(yīng)針對不同來源的樣本以及不同的下游分析選取較適宜的提取方案。外泌體可通過其攜帶的蛋白質(zhì)、核酸、脂類等來調(diào)節(jié)受體細胞的生物學活性。
外泌體的相關(guān)成分:1、外泌體的膜同細胞一樣,是磷脂雙分子層。2、外泌體膜含有MHC-1/2蛋白,能綁定特異性的肽鏈。3、外泌體膜中有跨膜蛋白PGRL、LAMP1、LAMP2。4、外泌體膜中有膜轉(zhuǎn)運融合蛋白annexins、RAN、GTPases。5、外泌體膜上有脂質(zhì)筏Chol、ceramide、SM、PC,限制膜流動,參與包括跨膜信號轉(zhuǎn)導、物質(zhì)內(nèi)吞、脂質(zhì)及蛋白定向分選的多種功能。6、外泌體中含有核酸,包括miRNA、DNA、lncRNA、mRNA;同時還有一些蛋白、脂類也能被包裹到外泌體中。7、與外泌體產(chǎn)生相關(guān)的重要分子:Ral、ARF6、PLD2、RAB家族。8、一些物質(zhì)進行外泌體中是特異性的:如hnRNPA2B1能結(jié)合lncRNA或miRNA特異性的序列(GGAG/CCCU),進行主動包埋。超速離心是目前分離外泌體的主要技術(shù)。外泌體的大?。和饷隗w的直徑約30-150nm。外泌體示蹤實驗
外泌體內(nèi)主要含有核酸、蛋白質(zhì)和脂質(zhì)等,可作為疾病診斷標記物、調(diào)控靶細胞功能、參與細胞生物學活動等。植物外泌體提取試劑盒應(yīng)用
密度梯度離心法根據(jù)在蔗糖、碘海醇或碘克沙醇等惰性溶液中的浮力密度將外泌體分成特定的層,目前普遍應(yīng)用的是蔗糖,這種方法可以成功地將亞細胞成分(例如過氧化物酶體,線粒體和核內(nèi)體)分離到密度梯度溶液中的不同層中。樣品被放置在梯度的頂部,當施加離心力時,樣品中的顆粒以獨特的速率通過梯度,該梯度以從上到下的密度增加。樣品中的外泌體將在1.13-1.19g/ml的密度范圍富集,隨后可以通過分餾收集,密度梯度超速離心對從蛋白質(zhì)聚集體和非膜顆粒中分離出外泌體非常有效。此方法獲得的外泌體純度較高,但步驟繁瑣、費時且會造成外泌體損失。植物外泌體提取試劑盒應(yīng)用
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