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腦脊液外泌體提取

來(lái)源: 發(fā)布時(shí)間:2023-05-02

外泌體遞送藥物的優(yōu)勢(shì):許多新的候選藥物(例如蛋白質(zhì)和核酸)在體內(nèi)環(huán)境中高度不穩(wěn)定,對(duì)診療結(jié)果的效果提出了重大挑戰(zhàn)。鑒于與許多當(dāng)前的納米微粒遞送系統(tǒng)相關(guān)的問(wèn)題,外泌體作為“自然的遞送系統(tǒng)”允許遞送這些生物分子。由于外泌體體積小和其本身就是細(xì)胞產(chǎn)物,通過(guò)外泌體遞送藥物可以避免巨噬細(xì)胞的吞噬作用或降解,還可以在體內(nèi)長(zhǎng)時(shí)間循環(huán),保持效果。其中,外泌體能夠穿過(guò)血腦屏障以將特定藥物輸送到中樞的神經(jīng)系統(tǒng)是外泌體遞送藥物的一個(gè)明顯優(yōu)勢(shì)。外泌體膜中有跨膜蛋白PGRL、LAMP1、LAMP2。活內(nèi)的外泌體動(dòng)態(tài)(哪個(gè)外泌體遷移至何處)也會(huì)成為今后需要努力研究的重要課題。腦脊液外泌體提取

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外泌體的來(lái)源與特征:外泌體是一種存在于細(xì)胞外的多囊泡體,通過(guò)細(xì)胞內(nèi)吞泡膜向內(nèi)凹陷形成,其大小均一,直徑為40-100nm,密度為1.10-1.18g/mL。外泌體可由間充質(zhì)干細(xì)胞、淋巴細(xì)胞和腫細(xì)胞細(xì)胞等多種類(lèi)型細(xì)胞主動(dòng)分泌釋放。外泌體內(nèi)主要含有核酸、蛋白質(zhì)和脂質(zhì)等,可作為疾病診斷標(biāo)記物、調(diào)控靶細(xì)胞功能、參與細(xì)胞生物學(xué)活動(dòng)等。例如:含有miR-140-5p的滑膜間充質(zhì)干細(xì)胞來(lái)源外泌體(SMSC-Exo影響軟骨組織再生;骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞來(lái)源外泌體攜帶的miR-196a可調(diào)節(jié)成骨細(xì)胞分化促進(jìn)大鼠顱骨缺損的骨再生。外泌體顯示出了在診療各種疾?。ㄈ缧募〔『蜕窠?jīng)?。┓矫娴臐摿?。提取試劑盒價(jià)錢(qián)膜受體的識(shí)別是外泌體細(xì)胞反應(yīng)的基礎(chǔ),它可能活躍受體并隨后導(dǎo)致相關(guān)信號(hào)通路的活躍。

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免疫印跡或蛋白質(zhì)印跡是分析外泌體較常用的方法之一,其原理是外泌體上特異性抗原與抗體結(jié)合。首先對(duì)樣品進(jìn)行處理將囊泡裂解并將蛋白質(zhì)變性,變性后,通過(guò)SDS-PAGE分離蛋白質(zhì),然后將其轉(zhuǎn)移到硝酸纖維素膜或聚偏二氟乙烯(PVDF)膜上并暴露于針對(duì)目的抗原的抗體中??贵w特異性識(shí)別膜表面上的抗原,然后將膜暴露于第二抗體中。通過(guò)二抗的熒光標(biāo)簽或與二抗偶聯(lián)的辣根過(guò)氧化物酶或堿性磷酸酶基團(tuán)進(jìn)行檢測(cè)。常用的標(biāo)記蛋白為CD63、CD81、TSG101和ALIX等。但是此方法的特異性和重復(fù)性會(huì)受到所用抗體質(zhì)量的限制。外泌體的直徑比微泡的要小,后者直徑為100nm-1μm。

外泌體在神經(jīng)系統(tǒng)中與神經(jīng)回路的控制相關(guān),同時(shí)各種神經(jīng)退行性疾病的致病蛋白還可以通過(guò)外泌體釋放到細(xì)胞外并傳遞到其他細(xì)胞,與病情發(fā)展密切相關(guān)。病細(xì)胞釋放的外泌體含有許多與血管新生和免疫逃逸相關(guān)的分子,構(gòu)建適合病細(xì)胞生長(zhǎng)的微環(huán)境,促進(jìn)病細(xì)胞的發(fā)展。另外,病細(xì)胞來(lái)源的外泌體上粘著分子的表達(dá)形式?jīng)Q定著癥狀向身體部位的轉(zhuǎn)移途徑。近,有報(bào)告指出脂肪細(xì)胞釋放的外泌體對(duì)肝臟的遺傳基因表達(dá)有控制作用。許多病毒利用外泌體的產(chǎn)生路徑傳播細(xì)胞,受病毒傳播的細(xì)菌和寄生蟲(chóng)通過(guò)外泌體控制其他受細(xì)胞傳播的細(xì)菌、寄生蟲(chóng)的活動(dòng)。外泌體并作為癥狀早期診斷技術(shù),應(yīng)用于與癥狀進(jìn)展相關(guān)的研究。

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外泌體中常見(jiàn)的細(xì)胞質(zhì)蛋白是Rabs蛋白,是鳥(niǎo)苷酸三磷酸酶家族的一種。它可以調(diào)節(jié)外泌體膜與受體細(xì)胞的融合,有文獻(xiàn)報(bào)道稱(chēng)RAB4,RAB5和RAB11主要出現(xiàn)在早期以及回收的核內(nèi)體中,RAB7和RAB9主要出現(xiàn)在晚期的核內(nèi)體。現(xiàn)有大量的研究發(fā)現(xiàn)外泌體中含有40種RAB蛋白。除了RAB蛋白,外泌體中富含具有外泌體膜交換以及融合作用的膜聯(lián)蛋白(包括膜聯(lián)蛋白1、2、4、5、6、7、11等)。外泌體膜上富含參與外泌體運(yùn)輸?shù)乃目缒さ鞍准易澹–D63,CD81和CD9))、熱休克蛋白家族((HSP60,HSP70,HSPA5,CCT2和HSP90以及一些細(xì)胞特異性的蛋白包括A33(結(jié)腸上皮細(xì)胞來(lái)源)、MHC-Ⅱ(抗原提呈細(xì)胞來(lái)源)、CD86(抗原提呈細(xì)胞來(lái)源)以及乳凝集素(不成熟的樹(shù)突狀細(xì)胞)。外泌體發(fā)揮功能:將細(xì)胞或組織中多余的或者有害的分子排除,這為研究生物標(biāo)志物提供了可能。外泌體提純方法中,超速離心法和聚合物沉淀法(市售試劑盒)混入多種雜質(zhì)。外泌體提取試劑盒品牌

外泌體是各種細(xì)胞外泌的直徑在30-100nm之間的膜囊泡。腦脊液外泌體提取

在Rameshwar等的研究中,采用轉(zhuǎn)染間充質(zhì)干細(xì)胞的方法,使外泌體載有anti-miR-9。在進(jìn)行間充質(zhì)細(xì)胞和多形性成角質(zhì)細(xì)胞瘤(GBM)細(xì)胞間anti-miR-9傳遞的實(shí)驗(yàn)時(shí),發(fā)現(xiàn)兩種細(xì)胞不僅可以通過(guò)縫隙連接介導(dǎo)的細(xì)胞間通訊(GJIC)也可以通過(guò)外泌體傳遞anti-miR-9。且anti-miR-9降低兩種GBM細(xì)胞(U87和T98G)對(duì)中流藥物替莫唑胺(TMZ)的抵抗能力的功能主要由外泌體傳遞的anti-miR-9實(shí)現(xiàn),而非經(jīng)GJIC傳遞的anti-miR-9,顯示出外泌體在運(yùn)載miRNA進(jìn)行基因zhiliao時(shí)的潛力。利用外泌體進(jìn)行GBM的zhiliao不只停留在體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)上,也已經(jīng)有相關(guān)的體內(nèi)zhiliao報(bào)道。腦脊液外泌體提取

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