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外泌體的研究

來源: 發(fā)布時間:2023-05-09

外泌體作為疾病診斷的標志物具有其獨特優(yōu)勢:(1)與正常細胞相比,病變細胞產生的外泌體在分泌量和內容物方面存在明顯差異。病變的細胞和組織能夠產生更多外泌體。(2)由于特殊的生成方式,外泌體的組成不同于來源細胞。其內包含的一些特異性蛋白質能夠揭示外泌體的起源、結構和運輸方式,有利于深入了解外泌體的產生機制。(3)病變細胞分泌的外泌體通過胞吐的過程進入血液、尿液等體液,囊泡狀結構能夠保護外泌體內部生物分子不受體液中蛋白酶、磷酸酶、核酸酶等干擾,有利于保持其結構完整和生物活性,通過對此類體液進行分析可以實現疾病的無創(chuàng)或微創(chuàng)檢測。外泌體膜中有膜轉運融合蛋白annexins、RAN、GTPases。外泌體的研究

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一方面,外泌體可以通過調控細胞的惡性轉化如細胞增殖、遷移和侵襲,促進HCC的發(fā)生和發(fā)展。另一方面,惡性瘤細胞分泌的外泌體可以協(xié)同其他瘤細胞一起,調控瘤微環(huán)境,以利于HCC發(fā)展。人HCC細胞外泌體中含有的一系列miRNAs,會減弱其他HCC細胞中TGF-β通路上的蛋白表達,促進HCC細胞的生長。HCC細胞外泌體還會誘導非致瘤性肝細胞發(fā)生細胞遷移和侵襲,具有運動能力的HCC通過釋放外泌體誘導肝細胞分泌MMP-2和MMP-9,增強HCC細胞的侵襲能力。經HCC中分離到的CD90+外泌體處理的內皮細胞會表達更多的VEGF和VEGFR1,促進血管生成;同時誘導ICAM-1表達促進細胞轉移。還有研究表明外泌體參與HCC缺氧脅迫和藥物耐受的調控。細胞外泌體提取試劑盒銷售外泌體可以直接進入受體細胞影響細胞功能。

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常規(guī)生物學實驗中,實時定量PCR技術(RT-PCR)普遍用于microRNA的檢測實踐中,但外泌體樣品中的microRNA豐度極低,普通RT-PCR技術的靈敏度已經不能夠滿足。第三代微滴式數字PCR——ddPCR技術,成為外泌體microRNA檢測的選擇技術。微滴式數字PCR(DropletdigitalPCR),又成為“油包水PCR”,在傳統(tǒng)的PCR擴增前對樣品進行微滴化處理,即將含有核酸分子的反應體系分成成千上萬個納升級的微滴,其中每個微滴或不含待檢核酸靶分子,或者含有一個至數個待檢核酸靶分子。經PCR擴增后,逐個對每個微滴進行檢測,有熒光信號的微滴判讀為1,沒有熒光信號的微滴判讀為0,根據泊松分布原理及陽性微滴的個數與比例即可得出靶分子的起始拷貝數或濃度。

外泌體攜帶的與疾病進展緊密關聯的分子標志物可用于疾病進展的監(jiān)視、檢測和診斷,是一種潛在的非侵入性生物標志物。由于外泌體本身可以作為抗原提呈小泡,且有較長的循環(huán)半衰期,可用于免疫學相關研究,同時,源自ai細胞的外泌體可以被工程化,發(fā)揮免疫刺激作用,可作為中流疫苗應用于ai癥的免疫zhiliao。此外,外泌體穩(wěn)定而廣fan地分布在qi官和組織中,具有低免疫原性、高耐受性等特點,且良好的膜滲透性可使其通過血腦屏障,因此可用作組織和qi官特異藥物輸送系統(tǒng),兼有高輸送效率和低副作用。因此,外泌體適合用作藥物載體遞送zhiliao劑(如阿霉素或姜黃素),zhiliao性miRNA、siRNA等核酸和蛋白質,運送至靶位點后實現靶向zhiliao。有望在外泌體和微囊泡生理功能的分析研究上起重大貢獻。

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外泌體及活性蛋白能直接穿透皮膚間隙,快速直達基底層起效;富含100+多種胞外基質蛋白、胞外基質酶以及細胞黏附分子;能夠有效促進皮膚成纖維細胞(HDFs)中I型膠原蛋白、成纖維蛋白,促進皮膚有效快速再生(Rejuvenation);能夠有效促進皮膚成纖維細胞(HDFs)彈性蛋白生成,保持皮膚飽滿和彈性;有效降低皮膚成纖維細胞(HDFs)中膠原蛋白酶(MMP-1)的生成從而防止皮膚間質中IIIIII型膠原蛋白被降解;富含活性物質能夠促進皮膚有些血管的修復與重建再生。外泌體可以包含不同類型的細胞表面蛋白、細胞內蛋白、RNA、DNA、氨基酸和代謝物。干細胞外泌體

外泌體作為核酸分子的藥物載體主要用于基因治理。外泌體的研究

近年來,外泌體的捕獲技術越來越多,微流體系也被用于外泌體提取,此方法能根據其物理和生化特性同時分離外泌體。采用這種方法獲得的樣品純度高,且可及時獲取外泌體用于疾病的相關檢測。在初次注射時外泌體粘附在微流控設備的內表面,并在隨后的PBS注射中沖洗掉。此方法采用的設備復雜,所需的樣本量取決于流動通道的長度。另外,樣品量的注入速率比較低,因此,對于大樣品量,將需要較長的處理時間。外泌體在包括瘤子在內的各種疾病的發(fā)病機理中具有重要的功能。目前,研究人員已開發(fā)了多種方法來分離外泌體,離心技術仍然是常用方法,其他方法,例如過濾、磁珠分離和色譜法等,也顯示出獨特的優(yōu)勢,但目前仍然沒有一種公認有效的提取方法,研究人員應針對不同來源的樣本以及不同的下游分析選取較適宜的提取方案。外泌體的研究

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