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細胞上清外泌體circRNA測序

來源: 發(fā)布時間:2023-07-02

與干細胞不同的是:干細胞外泌體對受損的微環(huán)境不響應,但它可以通過改變細胞外基質,改變受體細胞的轉錄組和蛋白質組,來調節(jié)細胞凋亡,生長,增殖和分化途徑。因此,干細胞外泌體具有減少細胞凋亡、減輕炎癥反應、促進血管生成、抑制纖維化、提高組織修復潛力等重要生物學功能,在調控組織再生方面存在良好的臨床應用前景。干細胞外泌體的優(yōu)點,體積?。杭{米級粒子,大小約為細胞的1/200,因此能很好地被人體所利用。免疫反應程度低:外泌體不是細胞,只作為載具,外膜的表層上呈現(xiàn)較少的抗原,免疫系統(tǒng)難識別,對人體影響小。可穿透血腦障壁:體積小加上脂質外膜的特性,使其可以通過血腦障壁,抵達腦部組織。蛋白質分子在外泌體信號傳遞過程中起到了非常重要的作用。細胞上清外泌體circRNA測序

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外泌體本身的惰性相當高,但它們與細胞膜融合可將所攜帶的物質和信號傳遞到受體細胞并改變其生物學功能,因此,外泌體是納米藥物遞送或基因治理的潛在載體。外泌體作為功能性小RNA和蛋白質的天然載體也引起了藥物遞送領域的極大興趣,因為它可以利用這些囊泡治理性遞送各種核糖核酸分子、肽和合成藥物。外泌體作為疾病診斷標志物的潛在應用依賴于基于外泌體的藥物遞送系統(tǒng)的技術突破,要將其用于臨床治理,外泌體的大規(guī)模工業(yè)化生產(chǎn)還面臨很大的挑戰(zhàn)。首先,對外泌體的具體合成機制、功能了解并不是非常詳細。其次,現(xiàn)在缺乏經(jīng)濟有效的外泌體分離技術。血漿血清提取試劑盒生產(chǎn)廠家在細胞外基質中,外泌體膜蛋白可被蛋白酶剪切,碎片作為配體與細胞膜上的受體結合,喚醒細胞內(nèi)的信號通路。

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Knepper等通過對透射電鏡得到的200個囊泡進行粒徑分析,結果表明尿液中外泌體的粒徑分布約為35~40nm,磷脂雙分子層厚度約為直徑的1/5~1/10。透射電鏡結合免疫金標記法能夠得到外泌體表面特征分子的信息,有助于揭示外泌體的產(chǎn)生機制與來源。動態(tài)光散射(dynamiclightscattering,DLS)和納米顆粒跟蹤分析(nanoparticletrackinganaly[1]sis,NTA)都是利用光學手段獲得囊泡粒徑分布的方法。兩者的不同之處在于動態(tài)光散射通過檢測散射光的強度計算得到顆粒粒徑,而納米顆粒跟蹤分析通過追蹤單個粒子的運動軌跡計算得到樣品濃度、粒徑分布等信息。

外泌體調控毛發(fā)根部的囊干細胞的機能,延長毛發(fā)根部的囊生長期,同時活化處于靜止期的毛發(fā)根部的囊,使其提前進入新的生長周期,實現(xiàn)了毛發(fā)的再次生長。骨衰老小鼠注射外泌體試驗證明:年輕血液中的外泌體同樣使衰老的組織重新煥發(fā)生機。來源于脂肪組織中的干細胞分泌一些信號分子和生長因子,可以促使控制毛發(fā)根部的囊生長周期的毛發(fā)根部的囊干細胞進行分化,向上遷移生成表皮細胞和皮脂腺,向下遷移生成毛母細胞。毛發(fā)根部的囊的生長周期決定毛發(fā)的生長周期,而毛發(fā)根部的囊干細胞的機能決定了毛發(fā)根部的囊的活躍程度,外泌體靶向調控毛發(fā)根部的囊干細胞的功能。外泌體的提取的方式:密度梯度離心法。

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外泌體在神經(jīng)系統(tǒng)中與神經(jīng)回路的控制相關,同時各種神經(jīng)退行性疾病的致病蛋白還可以通過外泌體釋放到細胞外并傳遞到其他細胞,與病情發(fā)展密切相關。病細胞釋放的外泌體含有許多與血管新生和免疫逃逸相關的分子,構建適合病細胞生長的微環(huán)境,促進病細胞的發(fā)展。另外,病細胞來源的外泌體上粘著分子的表達形式?jīng)Q定著癥狀向身體部位的轉移途徑。近,有報告指出脂肪細胞釋放的外泌體對肝臟的遺傳基因表達有控制作用。許多病毒利用外泌體的產(chǎn)生路徑傳播細胞,受病毒傳播的細菌和寄生蟲通過外泌體控制其他受細胞傳播的細菌、寄生蟲的活動。泌體是細胞內(nèi)源性的小囊泡,由大多數(shù)細胞分泌。血漿血清提取試劑盒生產(chǎn)廠家

干細胞外泌體有減少細胞凋亡、促進血管生成、抑制纖維化等重要生物學功能,在調控組織再生方面有好的前景。細胞上清外泌體circRNA測序

研究采用蔗糖密度梯度離心聯(lián)合2次PEG6000沉淀,極大地降低了外泌體的提取成本,且獲得的外泌體不僅表達外泌體公認的標志蛋白分子,同時也表達胎盤特異性蛋白分子,證明通過這種方法獲得的外泌體是胎盤來源外泌體。通過蔗糖密度梯度離心后得到的外泌體沉淀經(jīng)蛋白質SDS-PAGE膠電泳,銀染后可見各蛋白分子條帶清晰可見,動態(tài)光散射分析粒徑,結果顯示獲得的外泌體顆粒粒徑大部分分布于28-91nm之間,與文獻報道外泌體顆粒大小相一致。胎盤外泌體經(jīng)過PKH67熒光染料染色后,與細胞共孵育,熒光顯微鏡下觀察外泌體具備進入細胞的活性,進一步驗證了我們應用此種改良的分離方法可有效的獲得胎盤來源的外泌體。本研究通過蔗糖密度梯度離心聯(lián)合2次PEG6000沉淀成功分離得到母體血清中胎盤來源外泌體,并從蛋白標志分子、電鏡、粒徑及分布、進入細胞活性四方面對其進行了鑒定,為研究妊娠期間胎盤外泌體在正常妊娠及胎盤源性并發(fā)癥中的作用奠定了基礎。細胞上清外泌體circRNA測序

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