在當(dāng)代準(zhǔn)確醫(yī)療的大趨勢(shì)下,外泌體的發(fā)現(xiàn)和研究為肺病的早期診斷和醫(yī)治提供了嶄新的方向。外泌體在液體活檢中的巨大潛力可以為肺病患者的早期發(fā)現(xiàn)和早期診療提供可靠依據(jù)。根據(jù)種瘤來源的外泌體在肺病的發(fā)發(fā)展和侵襲轉(zhuǎn)移過程中的作用及相關(guān)機(jī)制的研究,臨床醫(yī)療人員可以針對(duì)不同的患者制定合適的醫(yī)治方案,以達(dá)到改善肺病患者生存率,延長(zhǎng)肺病患者生存時(shí)間的目的。但是,針對(duì)外泌體的研究還存在諸多的問題有待廣大研究者解決,如:外泌體的純化及標(biāo)記方法、如何尋找外泌體的靶基因、外泌體的作用機(jī)制及信號(hào)通路等??偠灾饷隗w的研究有著廣闊的前景,基于外泌體與肺病的研究,有望研發(fā)出能夠應(yīng)用于肺病臨床診斷和醫(yī)治的有效措施,造福更多的患者。應(yīng)用Tim4的外泌體強(qiáng)結(jié)合能力,可用ELISA或FACS高靈敏度定性檢測(cè)、定量分析外泌體。外周血提取試劑盒
目前市面上開發(fā)的外泌體提取試劑盒,是根據(jù)外泌體表面由類似于細(xì)胞膜的脂質(zhì)雙分子層具有一定疏水性這一特性,用試劑捆綁水分子,從而可通過常規(guī)離心收集沉淀獲取外泌體。這種快速提取外泌體的方法雖簡(jiǎn)便快捷、樣本需求少、對(duì)設(shè)備要求低,但與差速離心方法類似,其分離得到的沉淀包含其他細(xì)胞分泌的囊泡,且血清中含有大量血清蛋白分子,成分復(fù)雜,很可能摻雜一些未知的疏水大分子物質(zhì)。Sabapatha等曾根據(jù)來源于胎盤的外泌體表面特異表達(dá)這一特性,使用耦合到磁珠的抗抗體,采用磁珠分選方法分離血漿中胎盤來源外泌體。此法可以提取的胎盤外泌體量少,不適用于大規(guī)模提取制備,且免疫磁珠價(jià)格昂貴,不利于提取技術(shù)的普及。細(xì)胞外泌體提取試劑盒生產(chǎn)廠家在抗原呈遞細(xì)胞中的外泌體發(fā)揮作用的報(bào)道后,人們對(duì)外泌體的興趣增強(qiáng)。
幾乎所有的細(xì)胞都可以在自發(fā)或在一定刺激條件下產(chǎn)生外泌體,不同的細(xì)胞產(chǎn)生的外泌體具有不同的功能,這些外泌體參與了一系列生理和病理過程,如ai癥發(fā)生與發(fā)展、抗原呈遞、免疫調(diào)節(jié)、組織愈合等。來自血細(xì)胞(包括血小板、白細(xì)胞和紅細(xì)胞)的外泌體具有參與凝血、提供促血管生成因子、誘導(dǎo)血管生成等生理功能;妊娠期外泌體能夠影響局部血管生成、調(diào)節(jié)分化、激huo免疫、促進(jìn)胚胎發(fā)育;肝臟細(xì)胞產(chǎn)生的外泌體有利于維護(hù)肝臟內(nèi)穩(wěn)態(tài)。由此可見,正常細(xì)胞產(chǎn)生的外泌體對(duì)維持機(jī)體的正常生命活動(dòng)起重要作用。
由于特殊的結(jié)構(gòu)和循環(huán)方式,外泌體作為藥物運(yùn)輸?shù)妮d體具有獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)。例如外泌體的尺寸分布能夠增強(qiáng)滲透滯留效應(yīng),從而有選擇性地深入中流組織;其外層磷脂雙分子層可以保護(hù)內(nèi)容物不受各種生物酶的影響,維持各種生物分子的活性;外泌體普遍存在于各種體液和組織中,其體積小,結(jié)構(gòu)、組成與細(xì)胞膜類似,導(dǎo)致外泌體可以在避開免疫系統(tǒng)監(jiān)督的同時(shí)深入組織內(nèi)部,有較好的生物相容性;當(dāng)采用內(nèi)源外泌體時(shí),能明顯降低其他藥物載體可能引起的有害免疫反應(yīng);除此之外,某些細(xì)胞來源或經(jīng)特殊修飾過的外泌體具有良好的特異性,可以與特定的qi官或組織結(jié)合。外泌體具有良好的生物兼容性、穩(wěn)定性和內(nèi)在靶向性,使其在藥物遞送方向大有潛力。
結(jié)果表明,PS親和法可以檢測(cè)到許多目前為止都無法檢測(cè)的外泌體蛋白質(zhì)和RNA。應(yīng)用Tim4的外泌體強(qiáng)結(jié)合能力,可用ELISA或FACS高靈敏度定性檢測(cè)、定量分析外泌體。以前無法用超速離心法提取的微囊泡,也通過運(yùn)用PS親和法實(shí)現(xiàn)高純度提取。本指導(dǎo)書中對(duì)該技術(shù)進(jìn)行詳細(xì)說明,這項(xiàng)技術(shù)的有用性今后將受到世界各方評(píng)價(jià),有望在外泌體和微囊泡生理功能的分析研究上起重大貢獻(xiàn)。外泌體的檢測(cè)和提取還遇到一個(gè)困難即:對(duì)各種外泌體的分類。研究人員尚未統(tǒng)一定義以何種方法提取的細(xì)胞外囊泡可以稱之為外泌體,給實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的分析和重復(fù)性確認(rèn)帶來困難。近年,隨著國(guó)際細(xì)胞外囊泡協(xié)會(huì)的成立、世界性研究者研討會(huì)的舉辦,提案MISEV指南作為國(guó)際標(biāo)準(zhǔn),計(jì)劃或已經(jīng)開始進(jìn)行EV研究的科學(xué)家請(qǐng)務(wù)必閱讀這些方針。外泌體在組織修復(fù)領(lǐng)域均起著重要的作用,并且可以作為很好靶向給藥系統(tǒng)。方法外泌體提取
干細(xì)胞外泌體可用于中風(fēng)的治理,改善神經(jīng)預(yù)后,增加血管與神經(jīng)生成。外周血提取試劑盒
外泌體可以調(diào)控星狀細(xì)胞(HSC)活化,并參與HSC細(xì)胞遷移的進(jìn)程。活化的HSC來源的外泌體中,CCN2表達(dá)升高,Twist1和miR-214表達(dá)被抑制,這些外泌體還能誘導(dǎo)靜止的HSC細(xì)胞表達(dá)CCN2。此外,Twist1可以誘導(dǎo)miR-214表達(dá)從而抑制CCN2的表達(dá)。CCL4處理的外泌體和外泌體SK1/S1P會(huì)誘導(dǎo)HSC遷移。MSC分泌的外泌體可以有效減緩肝纖維化過程,這可能成為肝纖維化治理的靶點(diǎn)。研究顯示,CP-MSC來源的外泌體miR-125b可以抑制Hedgehog信號(hào)通路的活化,抑制纖維化;而HUC-MSC分泌的外泌體可以逆轉(zhuǎn)細(xì)胞形態(tài)和TGF-β1誘導(dǎo)的EMT進(jìn)程,減弱肝纖維化。外周血提取試劑盒
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