外泌體介導中流耐藥性:中流細胞來源的外泌體中某些miRNAs和non-codingRNAs(lncRNA)的變化在中流化療抗藥性的發(fā)生中起重要作用。Qu等研究發(fā)現(xiàn)lncRNA可以通過競爭性結合miR-34/miR-449,促進晚期腎細胞ai細胞中的跨膜受體酪氨酸激酶anexelekto(AXL)和tyrosine[1]proteinkinaseMet(c-MET)表達,引發(fā)舒尼替尼耐藥。而外泌體能夠將這一lncRNA運輸至舒尼替尼敏感的ai細胞,從而傳播舒尼替尼的抗性。外泌體中的miR21能夠抑制卵巢ai細胞凋亡,并通過結合肌動蛋白絲相關蛋白凋亡酶激huo因子(apoptoticproteaseactivatingfactor1,APAF1)使得卵巢ai細胞產生對紫杉醇的抗藥性。細胞表面受體表達不同,外泌體對受體細胞的影響可能不同,可能誘導細胞存活,也可能誘導凋亡或免疫調節(jié)等。血細胞提取試劑盒廠家
外泌體運輸?shù)幕蝾愃幬镆部梢允莔iRNA,miRNA是一類非編碼的內源性RNA,主要用于調節(jié)轉錄后的基因表達。miRNA主要通過與mRNA的未翻譯的區(qū)域(UTRs)結合起到抑制基因表達和降解mRNA的作用。與siRNA不同,miRNA抑制mRNA的表達不需要完美的堿基配對,因此每種miRNA可以抑制多種蛋白質的表達,而每種siRNA只針對一種蛋白質。miRNA的運載也存在著種種挑戰(zhàn):miRNA體內穩(wěn)定性差、生物分布不理想、易被體內酶降解以及容易引起副反應等。越來越多的研究表明外泌體也是體內運載miRNA的優(yōu)良載體,并且利用外泌體運輸miRNA的zhiliao方法已經在許多疾病模型中得以應用。外泌體檢測技術外泌體不只可作為疾病診斷的生物標志,而且可作為天然的藥物傳遞載體。
外泌體的生物發(fā)生途徑主要包括三個關鍵的檢查點:ILV的形成,阻止MVEs的降解以及MVEs和細胞膜的融合,這三個檢查點都包含在內體相關的囊泡運輸過程中。RABGTPase定位到特定膜結構的表面,通過招募效應因子來調節(jié)相應膜結構的囊泡運輸,例如,在內體溶酶體運輸網(wǎng)絡中,RAB5調節(jié)早期內體的形成及相互融合;內體膜上RAB5到RAB7的轉換調節(jié)早期向晚期內體的轉變;RAB7調節(jié)晚期內體/MVEs與溶酶體的融合來降解ILVs;RAB27調節(jié)MVEs與細胞膜的對接和融合來釋放ILVs形成外泌體。內吞的膜蛋白,特別是受體酪氨酸激酶家族的表皮生長因子受體,定位到內體和MVEs,通過MVEs和溶酶體融合來進入溶酶體降解,此過程受多種RABGTPases和ESCRT復合體的調控。
除運輸藥物進行疾病zhiliao之外,外泌體還能進行免疫zhiliao,外泌體免疫zhiliao和載藥zhiliao。進行免疫調節(jié)時,外泌體通常運載TGF-β1、粒細胞-巨噬細胞集落刺激因子(GM-CSF)或MAGE抗原等物質。在這些研究中,分泌外泌體的母代細胞往往選用具有很好抗原遞呈(antigenpresentation)能力的樹突細胞或者中流細胞。Cao等采用鼠B淋巴瘤細胞作為母代細胞,通過熱處理的方式使淋巴瘤細胞分泌的外泌體含有更多的熱休克蛋白(HSP60和HSP90)和其他一些刺激免疫的分子,如主要組織相容性復合物(MHC-I和MHC[1]II)以及CD40、CD86等,與未熱處理的鼠B淋巴瘤細胞分泌的外泌體相比,熱處理后分泌的外泌體可以增強對T細胞的激huo能力,從而增強這種基于外泌體的疫苗的抗中流能力。外泌體的檢測和提取還遇到一個困難即:對各種外泌體的分類。
研究采用蔗糖密度梯度離心聯(lián)合2次PEG6000沉淀,極大地降低了外泌體的提取成本,且獲得的外泌體不僅表達外泌體公認的標志蛋白分子,同時也表達胎盤特異性蛋白分子,證明通過這種方法獲得的外泌體是胎盤來源外泌體。通過蔗糖密度梯度離心后得到的外泌體沉淀經蛋白質SDS-PAGE膠電泳,銀染后可見各蛋白分子條帶清晰可見,動態(tài)光散射分析粒徑,結果顯示獲得的外泌體顆粒粒徑大部分分布于28-91nm之間,與文獻報道外泌體顆粒大小相一致。胎盤外泌體經過PKH67熒光染料染色后,與細胞共孵育,熒光顯微鏡下觀察外泌體具備進入細胞的活性,進一步驗證了我們應用此種改良的分離方法可有效的獲得胎盤來源的外泌體。本研究通過蔗糖密度梯度離心聯(lián)合2次PEG6000沉淀成功分離得到母體血清中胎盤來源外泌體,并從蛋白標志分子、電鏡、粒徑及分布、進入細胞活性四方面對其進行了鑒定,為研究妊娠期間胎盤外泌體在正常妊娠及胎盤源性并發(fā)癥中的作用奠定了基礎。外泌體可以作為生物標志物來對疾病進行檢測。廣州外泌體WB
外泌體及活性蛋白能直接穿透皮膚間隙,快速直達基底層起效。血細胞提取試劑盒廠家
瘤轉移是病癥致死的首要原因。長久以來,對瘤轉移機理的研究一直聚焦于瘤與機體之間的相互作用。然而在近年來,由于外泌體被發(fā)現(xiàn)可以作為包括瘤在內細胞之間信息傳遞的一種新方式,瘤轉移研究領域再度變得火熱起來。我所(瘤轉移的預警和預防研究所)以謝曉東博士為首的外泌體研究小組一直致力于研究瘤轉移與外泌體之間的聯(lián)系,已取得一系列成果。外泌體是指包含了復雜RNA和蛋白質的小膜泡(30-150nm),現(xiàn)今,其特指直徑在40-100nm的盤狀囊泡。多種細胞在正常及病理狀態(tài)下均可分泌外泌體。其主要來源于細胞內內溶酶體微粒內陷形成的多囊泡體,經多囊泡體外膜與細胞膜融合后釋放到胞外基質中。血細胞提取試劑盒廠家