為什么儲存在冰箱中的胎牛血清會出現沉淀?儲存在2-8℃時,血清中的各種蛋白(如冷凝集素、纖維蛋白原、玻粘連蛋白等)和脂蛋白可能聚集而形成沉淀或可見的混濁物。這些沉淀的產生不會影響血清的質量。推薦在-20℃儲存胎牛血清,避免反復凍融。如何避免沉淀物的產生?我們建議您在使用血清的時候,注意下列操作:?解凍血清時,請按照上述逐步解凍法(-20℃至4℃至室溫),若血清解凍時溫度變化太大(如-20℃至37℃),實驗顯示非常容易產生沉淀物。?解血清時,請隨時輕輕地將之搖晃均勻,使溫度及成分均一,減少沉淀的發(fā)生。?請勿將血清置于37℃太久。若在37℃放置太久,血清會變得混濁,同時血清中許多較不穩(wěn)定的成分也會因此受到損害,影響血清的質量。?血清的熱滅活非常容易造成沉淀物的增多,若非必要,無需做此步驟。?若必須做血清的熱滅活,請遵守56℃、30分鐘的原則,并且隨時搖晃均勻。溫度過高,時間過久或搖晃不均勻,都會造成沉淀物的增多。原則上血清添加量不要太多,通常分為5%、10%、20%幾檔。上海羊血清采購平臺
-20°C凍存。胎牛血清解凍后,應按單次習慣用量分裝,分裝后的血清仍-20°C凍存。若置于4°C的血清,應在一周內用完,用量頻率少推薦使用EvaCell免分裝50ml的規(guī)格哦血清和培養(yǎng)基的配制,應遵循“現用現配”原則,保證更好的細胞培養(yǎng)效果。配好的培養(yǎng)液,應于一周內用完。血清避免反復凍融,避免在4°C或更高溫度儲存過久,否則會破壞血清中有效活性成分和被污染,影響血清品質。血清融化注意:在水浴過程中,血清的平面要完全浸在水中。在融化過程中要慢慢搖動瓶身,使血清混勻,但搖動中盡量不要產生泡沫!胎牛血清使用說明血清從-20℃取出后,融化,按推薦體積加入到基礎培養(yǎng)基中,混勻,制備成新鮮完全培養(yǎng)基(整個操作需在無菌超凈臺中進行,注意無菌操作)。配制好的完全培養(yǎng)基推薦在4℃保存,應在1周內用完。海南動物血清訂購動物血清補償根底培養(yǎng)基中沒有或量缺少的營養(yǎng)成分。
不管是國產還是進口血清,都是不測的(無四環(huán)素胎牛血去除外)。國外,的使用很嚴格,用量也很少,每頭奶牛的產品包括血清都可以溯源的,因此可以做到胎牛血清中不含或含量極低;國內,的濫用已成了普遍現象,血清中殘留很高,對細胞培養(yǎng)極為不利,這是國產血清質量差的根本原因。血源市場上的血清血源主要分為中國、北美、南美和澳洲。1、國產血清質量差,這是公認的,主要原因并不是生產廠家的責任,而是天然環(huán)境差和的大量使用。國內環(huán)境污染嚴重,同時飼養(yǎng)過程中極其濫用,有毒有害物質會大量殘留在血清中,比較終不利于細胞的生長。2、南美血清,來源很多,如Bioind的巴拿馬、Gibco的烏拉圭、巴西等,這些血清由于采集血的不可控性,質量參差不齊,當然,相對于國內血清來說好的多。另外,國內銷售的南美血清大多顏色鮮紅,如Sera Pro、Bioind、Gibco、Hylone等品牌,但阿根廷的血清例外,這可能和各國的采集血、生產工藝有關。
內含量越低,級別越高,以胎牛血清為例:血清中內含量≤10EU/ml時,此血清為特級胎牛血清;血清中內含量﹥10EU/ml,≤25EU/ml時,此血清為優(yōu)級胎牛血清;血清中內含量≥25EU/ml時,此血清為標準級胎牛血清;不同廠家,不同批次的血清,內數值也可能有較大差異,因此很多血清廠家在名稱上已不注明級別。但使用者仍可通過檢測報告,自行甄別挑選,*胎牛血清,是由胎牛血漿去除纖維蛋白而形成的一種很復雜的混合物,含有各種血漿蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生長因子、、無機物等,其中大部分是已知的,小部分不清楚,這些物質對促進細胞生長或抑制生長活性是達到生理平衡的。其中不含細胞、纖維蛋白和凝血因子。*胎牛血清在細胞培養(yǎng)方面通常優(yōu)于其他類型的血清。由于胎牛從未接觸過外界,與新生牛和小牛血清相比,抗體含量明顯降低,抗體與培養(yǎng)細胞發(fā)生交叉反應的風險也較低,是理想的細胞生長補充劑。*為避免不同供體間的個體差異,能夠更好保證實驗數據的連續(xù)性和穩(wěn)定,應使用同批次血清所有的血清可能保留一些纖維蛋白原。
雞血清提取丁酰膽堿酯酶試驗以通過離心提純雞血清得到的膽堿酯酶,繼續(xù)進行農藥殘留相關敏感性檢驗,檢驗中同樣采用Ellman法。探究雞血清丁酰膽堿酯酶的酶學特性及其對有機磷和氨基甲酸酯類農藥的敏感性[8],為農藥殘留的快速檢驗提供新的敏感酶源。雖然很多報道指出,丁酰膽堿酯酶對農藥存在敏感性,但大多數試驗研究對象都為馬血清提取的丁酰膽堿酯酶,并沒有用雞血清進行比較,而李維[10]在試驗前期對多種動物血清內丁酰膽堿酯的農藥敏感性比較中發(fā)現,雞血清內丁酰膽堿酯的農藥敏感程度優(yōu)于其他試驗數據的禽畜類動物血清。并提供了體外丁酰膽堿酯酶對農藥敏感性的基礎研究結果,雞血清中丁酰膽堿酯酶的比較適反應活性為35℃,pH值8.0;對農藥的敏感測試反應中不存在過量底物的抑制效應,尤其對毒扁豆對堿性表現敏感試驗中發(fā)現相比于馬血清的丁酰膽堿酯酶,雞血清的丁酰膽堿酯酶對鹽酸多奈哌齊較為敏感。在通過試驗中5種農藥對2種酶活性抑制率的比較后發(fā)現,除了克百威外,雞血清中的丁酰膽堿酯酶對其他4種農藥的敏感性均高于馬血清中的丁酰膽堿酯酶。因而,雞血清中丁酰膽堿酯酶在含量豐富的同時對多種農藥的敏感程度還高,必然可以作為檢測源應用于酶抑制法檢驗中。采集血量達到采集血管容積的 1/3 為宜,不要超過 2/3。上海新生牛血清廠家
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胎牛血清在細胞培養(yǎng)中的作用:1.提供對維持細胞指數生長的,基礎培養(yǎng)基中沒有或量很少的營養(yǎng)物,以及主要的低分子營養(yǎng)物。2.提供結合蛋白,能識別維生素、脂類、金屬和其他等,能結合或調節(jié)它們所結合的物質活力。3.有些情況下結合蛋白質能與有毒金屬和熱原質結合,起到祛毒作用。4.是細胞貼壁、鋪展在塑料培養(yǎng)基質上所需因子來源。5.起酸堿度緩沖液作用。6.提供蛋白酶抑制劑,使在細胞傳代時使剩余胰蛋白酶失活,保護細胞不受傷害。7.參與細胞凍存。在細胞培養(yǎng)中,胎牛血清加入基礎培養(yǎng)基的濃度大多為5%~20%(比較常見為10%)的。具體到不同試驗,應依據文獻報,或細胞類型或基礎培養(yǎng)基的成分來確定相應濃度。胎牛血清應在-20℃儲存,運輸應干冰冷鏈運輸,避免反復凍融,確保血清中因子活性不受影響,保證血清優(yōu)良品質上海羊血清采購平臺
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