蛋白質生物學不僅包含研究內容,也包含了研究所需的工具。即基于蛋白質結構及功能的研究,和利用抗體、蛋白及多肽等作為純化、檢測和分析生物系統(tǒng)的工具。有些蛋白分析方法(如western blotting和ELISA等)已作為實驗室的常規(guī)實驗方法使用了多年。其它方法如定量蛋白質譜的實驗方法則是相對較新的實驗技術,并且正在快速發(fā)展中。針對重組蛋白純化,賽默飛提供種類豐富的標簽選擇,包括6xHis, GST, DYKDDDDK (FLAG), c-myc, 和 HA。還提供一系列磁珠和樹脂等純化產品,磁珠、磁性瓊脂糖、散裝樹脂、離心柱或試劑盒,FPLC層析柱,96孔過濾板等,用于從大腸桿菌、酵母、昆蟲或哺乳動物表達系統(tǒng)中純化從微克(μg)到低千克(kg)級重組蛋白??蓾M足大多實驗的需求,包括高通量篩選、批量處理、中試和工藝純化等。重組蛋白定制中的注意事項。國產重組蛋白定制
哺乳動物蛋白表達系統(tǒng)在生產重組蛋白中的應用中,優(yōu)勢明顯。具體表現為以下方面,能實現翻譯后修飾及正確的蛋白折疊復性:哺乳動物為真核細胞,細胞器可以對蛋白正確折疊加工。表達水平高:載體可在哺乳動物細胞中高表達重組蛋白,表達量可高達1-3g/L。蛋白表達高效穩(wěn)定:高效啟動子控制,穩(wěn)定表達,并可以選擇多種表達,如瞬時表達、穩(wěn)定細胞株表達、營養(yǎng)缺陷型細胞株表達(DHFR/GS)、大規(guī)模懸浮細胞表達等。適合大規(guī)模蛋白表達:常用的哺乳動物表達宿主細胞(HEK293和CHO),使用懸浮細胞培養(yǎng),可以在一個月內可產生數克級蛋白。大鼠重組蛋白定制國產重組蛋白種類多,性價比高。
由于重組蛋白通常在不同的表達系統(tǒng)中生產,容易受到各種因素的影響進而引起蛋白質的性質出現差異,因此為了保證獲得高質量,穩(wěn)定的結果,在藥物分析、新藥研發(fā)、細胞 therapy等應用中優(yōu)先選擇GMP(Good Manufacturing Practice, 良好生產規(guī)范)級重組蛋白。GMP要求企業(yè)從原料、人員、設施設備、生產過程、包裝運輸和質量控制等方面達到法規(guī)相關要求,形成一套可操作的作業(yè)規(guī)范。GMP級重組蛋白具有以下幾個優(yōu)點:詳實的產品信息;嚴格的質量管理體系;批次間穩(wěn)定性高;無外源動物源性。
目前有超過180種重組蛋白藥物被用作藥物。重組蛋白藥物是為急需新療法的患者服務的一類重要藥物。在許多疾病領域有**性的選擇,重組蛋白藥物現在是整個保健行業(yè)的一個重要組成部分。近一半的重組蛋白藥物為單克隆抗體,其余可按功能細分如下: 替換缺失或有缺陷的蛋白質;增加已經存在的蛋白質數量;抑制病原體,如細菌或病毒;其他分子的載體(大部分仍在開發(fā)中)。我國重組蛋白藥物目前共有20多家企業(yè)已上市 ,包括長春金賽、通化東寶、三生制藥、甘李藥業(yè)、恒瑞醫(yī)藥、安科生物等。多肽類激素藥是重組蛋白藥物中的明星產品。
目前中國重組蛋白藥物主要有∶重組胰島素、重組干擾素、重組凝血因子、重組粒細胞集落刺激因子、酶替代重組蛋白藥物、重組生長因子等。市場上,生產銷售胰島素的主要企業(yè)有諾和諾德、禮來、賽諾菲、通化東寶、甘李藥業(yè)、聯(lián)邦制藥等,各公司在產品線上各有不同。通化東寶是生產上市重組人胰島素的國內公司,長久以來深耕二代胰島素市場,甘李藥業(yè)則選擇專注于三代胰島素市場,聯(lián)邦制藥是繼甘李藥業(yè)后第二家生產上市三代胰島素的國內公司。從國內市場競爭格局上來看,諾和諾德、賽諾菲及禮來三巨頭依舊占據主要地位,而通化東寶的二代胰島素目標市場在集中在基層領域。重組蛋白的保存和運輸條件。無動物源性IL-9重組蛋白定制
重組蛋白在多種細胞培養(yǎng)中的應用。國產重組蛋白定制
如果說明書上沒有具體的說明,如何重溶(Reconstitute)凍干的重組蛋白?我們建議采用以下方式:(1)將試劑瓶和重溶緩沖液平衡至室溫。(2)短暫離心試劑瓶以確保在小瓶底部收集所有凍干物。(3)加入推薦的重溶緩沖液,達到產品說明上推薦的濃度。避免劇烈振蕩或移液器吹打,這可能導致蛋白質變性。(4)使試劑瓶在室溫下重溶15-30分鐘,可使用360度搖床或手動輕輕上下顛倒。(5)每管體積不小于10μL分裝,并按產品說明書上的指示儲存。(6)如果小瓶內呈現薄片或顆粒,則在室溫下將產品混合幾小時,然后在4℃過夜。國產重組蛋白定制
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