昆蟲細胞是多種重組蛋白的多功能表達宿主。其較強的折疊能力和較高的培養(yǎng)密度使其成為表達細胞內(nèi)復雜蛋白和病毒蛋白的理想選擇。2007年,由昆蟲細胞系以病毒樣顆粒(VLPs)的形式生產(chǎn)的病毒疫苗Cervarix被批準用于人類。除了在疫苗開發(fā)方面的潛力外,昆蟲細胞產(chǎn)生的高活性蛋白還應(yīng)用于生物物理學和生物化學的各個學科,如結(jié)構(gòu)解釋、藥物設(shè)計、測定方法建立和診斷試劑開發(fā)等等。許多生物廠家利用昆蟲細胞進行重組蛋白產(chǎn)品開發(fā)和承包研究項目。高純度、高活性、低內(nèi)毒素,高批次間一致性是選購重組蛋白的重點。小鼠BMP-3重組蛋白
重組蛋白具有極高的經(jīng)濟價值和科研價值,但是在哺乳動物細胞中使用穩(wěn)定轉(zhuǎn)染方法將會消耗大量的時間,而傳統(tǒng)的瞬時轉(zhuǎn)染方法,在產(chǎn)量上也難以令人滿意。所以重組蛋白大規(guī)模的瞬時表達技術(shù)是近年來的一個研究熱點,已有報道能放大到 100L反應(yīng)器中生產(chǎn)重組蛋白,產(chǎn)量(分泌型蛋白)可達 1-10mg/L。不過該方法技術(shù)條件要求高,如質(zhì)粒的純度、轉(zhuǎn)染的效率等。哺乳動物細胞表達系統(tǒng)中,重組蛋白的表達水平與許多 因素相關(guān),如轉(zhuǎn)錄和翻譯調(diào)控元件、RNA剪接過程、mRNA穩(wěn) 定性、基因在染色體上的整合位點、重組蛋白對細胞的毒性作 用以及宿主細胞的遺傳特性等。BMP-7重組蛋白定制多肽類激素藥是重組蛋白藥物中的明星產(chǎn)品。
為了保證重組蛋白良好的穩(wěn)定性和生物學活性,通常加8%(質(zhì)量比體積)的海藻糖和甘露醇作為凍干保護劑。海藻糖是一種以兩個葡萄糖分子通過 α,α,1,1-糖苷鍵連接的二糖。海藻糖是一種非還原糖,不與氨基酸或蛋白質(zhì)發(fā)生反應(yīng)。它本身不存在于哺乳動物體內(nèi),但哺乳動物體內(nèi)卻存在分解海藻糖的酶,且海藻糖作為一種小分子的半抗原,哺乳動物對其免疫反應(yīng)性很低。這使得海藻糖對live實驗或異種移植等實驗的干擾極小。海藻糖不僅可以防止蛋白在脫水狀態(tài)下改變其結(jié)構(gòu),更能在高溫、低溫、高滲透壓的條件下保留蛋白的生物學活性。目前,海藻糖以其高效的蛋白保護性能與相對低廉的價格漸漸代替 BSA,是免疫實驗產(chǎn)品和蛋白類產(chǎn)品添加劑的新寵。
重組蛋白的細菌表達系統(tǒng)有各種各樣的載體和宿主菌可供選擇,大部分工程菌的增殖時間短,不僅便于快速評價實驗結(jié)果,而且降低了技術(shù)和設(shè)備無菌要求的嚴格性。無害大腸桿菌是腸道正常微生物群的一部分與生物體為共生關(guān)系,可以通過產(chǎn)生維生素K 2使機體受益,并防止病原菌在腸道增殖。大腸桿菌是用于重組蛋白生產(chǎn)的宿主菌,它不僅具有遺傳背景清楚、培養(yǎng)操作簡單、轉(zhuǎn)化和轉(zhuǎn)導效率高、生長繁殖快、成本低廉,可以快速大規(guī)模地生產(chǎn)目的蛋白等優(yōu)點,而且其表達外源基因產(chǎn)物的水平遠高于其它基因表達系統(tǒng),表達的目的蛋白量甚至能超過細菌總蛋白量的30%,對小分子蛋白的生產(chǎn)具有極大的優(yōu)勢,因此大腸桿菌是目前應(yīng)用多的重組蛋白質(zhì)表達系統(tǒng)。重組蛋白疫苗有著天然的優(yōu)勢。
功能性ELISA是一類以ELISA形式進行的、基于體外配體結(jié)合的分析法。該方法用于檢測目的蛋白與其天然結(jié)合物配體之間(如生長因子與其受體)的結(jié)合能力。如果在該檢測中生長因子能夠與其天然受體相結(jié)合,則該生長因子很可能是具有功能的。ED50為OD值讀取過程中能夠提供50%信號強度的生長因子濃度(在包被了受體的平板上)。重組蛋白使用了基于細胞的檢測分析或功能性ELISA分析對其生物學活性進行了檢測,產(chǎn)品頁上會提供相應(yīng)的ED50值。也有些重組蛋白沒有提供生物活性數(shù)據(jù)。在大多數(shù)情況下,這表明沒有進行生物活性測試,但它并不一定意味著蛋白是沒有活性的。在沒有生物活性數(shù)據(jù)的情況下,這些蛋白可用做蛋白質(zhì)分子量標準,蛋白免疫印記陽性對照(如果是全長的重組蛋白)或免疫原。其它可能的用途是配體結(jié)合試驗或ELISA的標準品。R&D Systems是全球重組蛋白生產(chǎn)的前列。R&DSystemsIGF-II重組蛋白怎么樣
重組蛋白的生物活性接近于天然蛋白質(zhì),因此在生物制藥領(lǐng)域應(yīng)用廣泛。小鼠BMP-3重組蛋白
蛋白的溶解性與很多因素有關(guān),其中比較重要的是pH值和離子強度。購買的重組蛋白按照說明上所標明的溶解液來溶解。如果您所用的溶解液的pH值和離子強度與說明書中所標明的不符,很多時候會造成細胞因子或重組蛋白不能完全溶解或者根本無法溶解,這樣所配得的細胞因子或重組蛋白必然活性不夠或喪失。重組蛋白溶解時一定要溶解到指定的濃度,高于或低于該濃度范圍,都可能會導致重組蛋白不穩(wěn)定,出現(xiàn)活性下降的現(xiàn)象。另外,重組蛋白在溶解時,一定不能用渦旋儀進行快速振蕩,以免出現(xiàn)蛋白鏈斷裂。重組蛋白的凍干粉是非常容易溶解的,一般用移液器的吸頭輕輕吹幾下,即可使細胞因子或重組蛋白完全溶解。小鼠BMP-3重組蛋白
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