昆蟲細胞是多種重組蛋白的多功能表達宿主。其較強的折疊能力和較高的培養(yǎng)密度使其成為表達細胞內(nèi)復(fù)雜蛋白和病毒蛋白的理想選擇。2007年,由昆蟲細胞系以病毒樣顆粒(VLPs)的形式生產(chǎn)的病毒疫苗Cervarix被批準(zhǔn)用于人類。除了在疫苗開發(fā)方面的潛力外,昆蟲細胞產(chǎn)生的高活性蛋白還應(yīng)用于生物物理學(xué)和生物化學(xué)的各個學(xué)科,如結(jié)構(gòu)解釋、藥物設(shè)計、測定方法建立和診斷試劑開發(fā)等等。許多生物廠家利用昆蟲細胞進行重組蛋白產(chǎn)品開發(fā)和承包研究項目。R&D Systems是全球重組蛋白生產(chǎn)的前列。國產(chǎn)TNF-alpha重組蛋白
重組蛋白的活性低是讓科研工作者十分頭疼的難題,買來的重組蛋白活性低怎么辦?除了重組蛋白自身存在質(zhì)量問題外,它可能只是需要一個“搭檔”。在某些重組蛋白在使用時,需要加入交聯(lián)抗體,進行交聯(lián)(Cross-linking)反應(yīng)后才能表現(xiàn)出高活性,發(fā)揮出功能。其原理是,交聯(lián)反應(yīng)能夠?qū)⒅亟M蛋白的受體相互拉近,因為每個標(biāo)簽抗體含有兩個抗原結(jié)合臂,從而能夠使兩個含標(biāo)簽蛋白 - 受體復(fù)合物拉近,進而指數(shù)級放大下游信號,提升刺激的效率(表現(xiàn)為更低的 ED50 值)。眾所周知,在同一實驗中 ED50 越低表明著活性越高。人BMP-9重組蛋白重組蛋白的保存和運輸條件。
功能性ELISA是一類以ELISA形式進行的、基于體外配體結(jié)合的分析法。該方法用于檢測目的蛋白與其天然結(jié)合物配體之間(如生長因子與其受體)的結(jié)合能力。如果在該檢測中生長因子能夠與其天然受體相結(jié)合,則該生長因子很可能是具有功能的。ED50為OD值讀取過程中能夠提供50%信號強度的生長因子濃度(在包被了受體的平板上)。重組蛋白使用了基于細胞的檢測分析或功能性ELISA分析對其生物學(xué)活性進行了檢測,產(chǎn)品頁上會提供相應(yīng)的ED50值。也有些重組蛋白沒有提供生物活性數(shù)據(jù)。在大多數(shù)情況下,這表明沒有進行生物活性測試,但它并不一定意味著蛋白是沒有活性的。在沒有生物活性數(shù)據(jù)的情況下,這些蛋白可用做蛋白質(zhì)分子量標(biāo)準(zhǔn),蛋白免疫印記陽性對照(如果是全長的重組蛋白)或免疫原。其它可能的用途是配體結(jié)合試驗或ELISA的標(biāo)準(zhǔn)品。
R&D Systems作為全球免疫學(xué)和細胞生物學(xué)產(chǎn)品的生產(chǎn)商,1976年創(chuàng)立于美國明尼蘇達州,至今已為學(xué)術(shù)界服務(wù)近40年。其母公司Bio-Techne(原Techne公司)于1983年在美國NASDAQ上市。目前,R&D Systems擁有近30,000種產(chǎn)品,95%以上由自己研發(fā)生產(chǎn)。其產(chǎn)品包括重組蛋白、細胞因子、ELISA試劑盒、生長因子、趨化因子、抗體、Animal-Free?蛋白、Luminex 液相芯片、多因子檢測固相芯片、流式細胞分析與細胞篩選、干細胞及細胞培養(yǎng)等;覆蓋發(fā)育、糖生物、內(nèi)分泌、免疫、神經(jīng)學(xué)、蛋白酶、信號傳導(dǎo)等學(xué)科研究領(lǐng)域;且每年有近2,000種新產(chǎn)品不斷問世,以滿足不同科研工作者的研究需要。進口重組蛋白品牌有哪些?
重組蛋白的許多生產(chǎn)廠家都是不限制產(chǎn)品使用期限的,不規(guī)定重組蛋白和抗體產(chǎn)品的失效期或生產(chǎn)日期。在適當(dāng)?shù)拇鎯l件下,重組蛋白和抗體可以保持活性穩(wěn)定多年。這些條件包括以凍干粉形式存儲蛋白,以大于 0.1 mg/mL 的蛋白濃度存儲冷凍的產(chǎn)品(-20 °C 或 -80 °C)以及限制凍融循環(huán)的次數(shù)。但是,廠家常規(guī)質(zhì)量控制測試可確保所有產(chǎn)品在銷售時都具有可接受的生物活性。在實驗室的正常條件下使用時,我們保證產(chǎn)品達到或超過我們提供的技術(shù)參數(shù)。由于無法控制終端用戶的存儲條件,通常,保質(zhì)期為自購買之日起 6-12 個月。若有特殊要求,請參見各產(chǎn)品說明書。多肽類激素藥是重組蛋白藥物中的明星產(chǎn)品。bFGF重組蛋白定制
重組蛋白與重組融合蛋白的區(qū)別。國產(chǎn)TNF-alpha重組蛋白
購買的重組蛋白單位一般是 μg,重組蛋白檢測結(jié)果和用量常用單位是 U/mL 或 IU/mL。U是什么?和IU之間有什么差別?它們又是怎么與 μg 進行換算的呢?首先,U 是蛋白活性單位,用于計量蛋白本身的生物學(xué)活性?;钚詥挝恢冈谶m條件下,單位時間內(nèi)產(chǎn)生單位生物學(xué)效應(yīng)的蛋白量。以酶為例,1961年,國際生物化學(xué)學(xué)會酶學(xué)委員會提出采用統(tǒng)一的「國際單位」(IU)來表示酶的活力,在合適條件下,每分鐘內(nèi)催化 1 微摩爾(μmol)底物轉(zhuǎn)化為產(chǎn)物或轉(zhuǎn)化底物中 1 微摩爾的有關(guān)基團所需的酶量。即 1 IU=1 U=1 μmol/min。IU 與 μg之間的換算,要引入比活性的概念。比活性是指單位質(zhì)量蛋白的生物學(xué)活性單位,通常用 U/μg 或 μmol/min/μg 表示。以酶為例,在合適條件下,如果 1 μg 酶可以在 1 分鐘內(nèi)催化 1μmol 的底物,那么其比活性就是 1U/μg。比活性是重組蛋白的一項重要指標(biāo)。進行比活性項目的檢測,不僅可以反映產(chǎn)品生產(chǎn)工藝的穩(wěn)定情況,而且可以比較不同表達體系、不同生產(chǎn)廠家生產(chǎn)同一產(chǎn)品的品質(zhì)情況。比活性高說明產(chǎn)品的生產(chǎn)工藝更先進、純度更高、質(zhì)量更優(yōu)。國產(chǎn)TNF-alpha重組蛋白
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