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小鼠重組蛋白

來源: 發(fā)布時(shí)間:2022-06-11

不同細(xì)胞研究中添加的重組蛋白有所不同。人胚胎干(ES)細(xì)胞研究中的重組蛋白主要有,細(xì)胞培養(yǎng)用人重組actin A,bFGF,IGF-II等,細(xì)胞分化用BMP-4,EGF和HGF。間充質(zhì)干(MSC)細(xì)胞研究中的重組蛋白主要有,間充質(zhì)干(MSC)細(xì)胞培養(yǎng)和自我更新的生長(zhǎng)因子:LIF,bFGF,EGF,HGF,PDGF和Wnt3,MSC分化的生長(zhǎng)因子或細(xì)胞因子:BMP-2與TGF-β1。神經(jīng)干細(xì)胞(NSC)研究中的重組蛋白主要有,重組EGF,重組bFGF,和重組VEGF,用于神經(jīng)干細(xì)胞的擴(kuò)增。此外,包括BDNF在內(nèi)的多幾種神經(jīng)營養(yǎng)因子例如BDNF,CNTF,和GDNF也可適用于相關(guān)研究。購買的重組蛋白如何保存?小鼠重組蛋白

量化生產(chǎn)的重組蛋白種類有限,如果購買不到所需蛋白,則需要重組蛋白定制服務(wù)。對(duì)于特定的應(yīng)用,使用正確的蛋白表達(dá)系統(tǒng)是實(shí)驗(yàn)成功的因素。以義翹神州為例,義翹神州的重組蛋白表達(dá)服務(wù),擁有多年的重組蛋白表達(dá)經(jīng)驗(yàn),提供從基因合成、載體構(gòu)建到蛋白表達(dá)及純化的一站式服務(wù)。擁有多種重組蛋白表達(dá)系統(tǒng),包括原核生物蛋白表達(dá)系統(tǒng)、酵母蛋白表達(dá)系統(tǒng)、昆蟲細(xì)胞蛋白表達(dá)系統(tǒng)(桿狀病毒)、哺乳動(dòng)物細(xì)胞蛋白表達(dá)系統(tǒng)。具備多種純化體系,為蛋白表達(dá)與純化方面提供多種選擇。自公司成立以來,已成功表達(dá)約6000 個(gè)毫克至克級(jí)的不同種屬的重組蛋白。每年1000個(gè)新蛋白的研制和生產(chǎn)能力以及快速解決研發(fā)和生產(chǎn)問題的能力。擁有近百個(gè)2L 到1000L 不同體積的發(fā)酵罐和超過30 種重組蛋白純化體系,可以滿足高通量及大規(guī)模的重組蛋白表達(dá)需求。無動(dòng)物源性Wnt-4重組蛋白重組蛋白的表達(dá)系統(tǒng)有多種。

客戶購買的重組蛋白一般為裝在塑料管中的凍干粉,凍干粉在運(yùn)輸過程中可能會(huì)因顛簸而漂散并粘貼于管壁或管蓋上,所以在打開塑料瓶蓋前,需將凍干粉通過離心收集到管底,以便用很小體積的液體即可將凍干粉完全溶解。那么應(yīng)該用多少轉(zhuǎn)速、多長(zhǎng)時(shí)間離心試劑管,才能達(dá)到良好的收集效果?答:有些小型高速離心機(jī)(多為進(jìn)口品牌)的面板上有一個(gè)Spin鍵,按了此鍵后,離心機(jī)會(huì)自動(dòng)快速上升到速度(10000rpm或12000rpm),上升后速度即刻下降,直至停止旋轉(zhuǎn),整個(gè)過程大約30s。這個(gè)Spin鍵足以很好的將細(xì)胞因子或蛋白收集到管底。但有些實(shí)驗(yàn)室沒有這樣的高速離心機(jī),只有轉(zhuǎn)速為4000-4500rpm的離心機(jī)。這種情況下,需3000-3500rpm離心5min,也能達(dá)到類似的效果。

單克隆抗體是一類重組蛋白,不論是科研還是醫(yī)療中,都有很大應(yīng)用。突出的表達(dá)重組單克隆抗體的宿主細(xì)胞系是CHO、NS0、SP2/0、HEK293和PER.C6。然而,大多數(shù)文獻(xiàn)都是關(guān)于CHO細(xì)胞的,該細(xì)胞仍然是現(xiàn)今工業(yè)生產(chǎn)重組蛋白藥物的主力,占到了70%(Jayapal等人,2007)。CHO細(xì)胞是于1986年一個(gè)被批準(zhǔn)的重組生物制藥的表達(dá)系統(tǒng)(組織型纖溶酶原actin物;t-PA)。從那時(shí)起,CHO細(xì)胞就是是重組蛋白表達(dá)的選擇。盡管有其他哺乳動(dòng)物表達(dá)系統(tǒng)可用,CHO細(xì)胞仍然是優(yōu)化重組蛋白表達(dá)研究的中心。不同表達(dá)系統(tǒng)所生成的重組蛋白間有何主要區(qū)別?

在昆蟲細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)中,昆蟲細(xì)胞需要桿狀病毒作為重組蛋白表達(dá)的中間體。桿狀病毒是一組不同的DNA病毒,能夠侵染各種昆蟲細(xì)胞。它們就像一個(gè)穿梭機(jī),將目標(biāo)基因?qū)虢o定的宿主細(xì)胞。加州親筆多核多角體病毒(AcMNPV) 在利用桿狀病毒這方面表現(xiàn)出突出的特征。簡(jiǎn)單地說,將編碼感興趣蛋白質(zhì)的基因插入一個(gè)主要載體,然后將其克隆到一個(gè)名為Bacmid的次要載體上。Bacmid被轉(zhuǎn)移到一株細(xì)菌(通常是大腸桿菌)中進(jìn)行初步病毒生產(chǎn)和組裝,以獲得一代桿狀病毒(P1)。P1病毒在昆蟲細(xì)胞中被擴(kuò)增(例如sf9)以獲得合適的滴度(P2),然后P2病毒被用于侵染相同或不同的昆蟲細(xì)胞系(例如High-five)以實(shí)現(xiàn)重組蛋白表達(dá)。進(jìn)口重組蛋白品牌有哪些?GMP級(jí)BMP-9重組蛋白

選擇高品質(zhì)重組蛋白和生長(zhǎng)因子。小鼠重組蛋白

市場(chǎng)上重組蛋白通常以凍干形式售賣,這是因?yàn)榈鞍踪|(zhì)對(duì)熱敏感,凍干能使蛋白質(zhì)在存儲(chǔ)過程中保持活性,延長(zhǎng)保存時(shí)間,同時(shí)也能降低運(yùn)輸成本。但是凍干對(duì)蛋白質(zhì)的活性會(huì)有一定的影響,可能造成蛋白質(zhì)部分失活、聚集和其它變性等。這個(gè)時(shí)候,就需要通過加入保護(hù)劑(穩(wěn)定劑,添加劑,輔料)和控制凍干的各種條件來盡可能降低這些負(fù)面的影響,盡可能的保護(hù)蛋白的活性。常見的保護(hù)劑或穩(wěn)定劑包括糖類,多元醇,聚合物,表面活性劑,某些蛋白和氨基酸等。小鼠重組蛋白

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