體外生產(chǎn)重組蛋白有多個表達系統(tǒng),重組蛋白的預期用途對于表達系統(tǒng)的選擇和決定其優(yōu)先次序是很重要的。對于某些應用 (如功能解析或藥物篩選) 來說,保持蛋白的天然功能和特性是必需的; 但如果是當成免疫原來使用則關系不大。其他需要實際考慮的因素包括蛋白質產(chǎn)量、時間限制或生產(chǎn)成本。明確項目需求對于確保選擇合適的表達系統(tǒng)、克隆策略和所需產(chǎn)品的生產(chǎn)策略是至關重要的。實際上, 在缺少目標蛋白質或相似蛋白質歷史表達數(shù)據(jù)的情況下,要預測某個蛋白質表達實驗的結果是非常困難的。通常的做法是使用數(shù)個表達系統(tǒng), 一開始使用簡單的、性價比高的表達系統(tǒng),失敗后再使用更復雜的表達系統(tǒng)。45.蘇州近岸蛋白專注生物醫(yī)藥領域中的重組蛋白質。小鼠IL-1重組蛋白定制
CHO細胞即:中國倉鼠卵巢細胞(Chinese Hamster Ovary),它是基因工程疫苗研究中具有代表性的哺乳動物表達載體,是用來表達外源蛋白多也是成功的一類細胞。市場上超過70%的蛋白質藥物選擇的制造細胞就是CHO細胞。CHO細胞可以在外源表達的蛋白質上摻入復雜的聚糖,如N-連接聚糖。有助于蛋白質的折疊和細胞內(nèi)運輸。重組蛋白表達側重于大化每個分子中含有唾液酸的復雜聚糖的數(shù)量,CHO細胞糖基化之后,能增加對蛋白水解的抵抗力和延長體內(nèi)血清半衰期,所以CHO細胞成為用作重組蛋白的哺乳動物細胞系。國產(chǎn)BMP-3重組蛋白定制比較熱門的重組蛋白主要為重組細胞因子。
目前有超過180種重組蛋白藥物被用作藥物。重組蛋白藥物是為急需新療法的患者服務的一類重要藥物。在許多疾病領域有**性的選擇,重組蛋白藥物現(xiàn)在是整個保健行業(yè)的一個重要組成部分。近一半的重組蛋白藥物為單克隆抗體,其余可按功能細分如下: 替換缺失或有缺陷的蛋白質;增加已經(jīng)存在的蛋白質數(shù)量;抑制病原體,如細菌或病毒;其他分子的載體(大部分仍在開發(fā)中)。我國重組蛋白藥物目前共有20多家企業(yè)已上市 ,包括長春金賽、通化東寶、三生制藥、甘李藥業(yè)、恒瑞醫(yī)藥、安科生物等。
常見的重組蛋白藥物:生長因子viii,幫助血友病患者形成血塊;非格司汀和sargramostim(造血骨髓因子),促進放療或移植后白細胞計數(shù);胰島素,用于糖尿??;IGF1,用于某些生長問題;干擾素(阿爾法),用于乙型和丙型肝炎、生殖器疣、某些白血病和其他疾??;干擾素(β),用于多發(fā)性硬化癥;干擾素(伽瑪),用于慢性肉芽腫?。话准毎樗?2,殺死病變細胞;生長因子,用于生長因子缺乏癥;組織纖溶酶原actin劑(t-PA),溶解血凝塊,預防心臟病發(fā)作,減輕其嚴重程度。選擇重組蛋白定制需謹慎。
為了保證重組蛋白良好的穩(wěn)定性和生物學活性,通常加8%(質量比體積)的海藻糖和甘露醇作為凍干保護劑。海藻糖是一種以兩個葡萄糖分子通過 α,α,1,1-糖苷鍵連接的二糖。海藻糖是一種非還原糖,不與氨基酸或蛋白質發(fā)生反應。它本身不存在于哺乳動物體內(nèi),但哺乳動物體內(nèi)卻存在分解海藻糖的酶,且海藻糖作為一種小分子的半抗原,哺乳動物對其免疫反應性很低。這使得海藻糖對live實驗或異種移植等實驗的干擾極小。海藻糖不僅可以防止蛋白在脫水狀態(tài)下改變其結構,更能在高溫、低溫、高滲透壓的條件下保留蛋白的生物學活性。目前,海藻糖以其高效的蛋白保護性能與相對低廉的價格漸漸代替 BSA,是免疫實驗產(chǎn)品和蛋白類產(chǎn)品添加劑的新寵。怎么才能讓重組蛋白保持良好的穩(wěn)定性和生物學活性呢?無動物源性TNF-alpha重組蛋白
重組蛋白的表達系統(tǒng)有多種。小鼠IL-1重組蛋白定制
重組蛋白含與不含 CF 有什么區(qū)別?CF,是 Carrier Free 的意思。一般來說,為了對重組蛋白的結構及活性進行保護,生產(chǎn)廠家會在蛋白產(chǎn)品中添加牛血清白蛋白(BSA)作為載體蛋白。但考慮到 BSA 會對某些實驗造成影響,廠家又研發(fā)出不含載體蛋白(BSA)的產(chǎn)品,即 Carrier Free 蛋白。客戶如何選擇呢?在用途上,一般情況下,我們建議使用含有 BSA 的重組蛋白用于細胞或組織培養(yǎng),或作為 ELISA 標準品。相對而言,當 BSA 可能會干擾實驗時,比如體內(nèi)實驗、蛋白標記等,則推薦使用 CF 蛋白。另外,如果實驗平臺有特殊要求,也應根據(jù)要求選擇不含 BSA 的蛋白。小鼠IL-1重組蛋白定制
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