重組蛋白的細菌表達系統(tǒng)有各種各樣的載體和宿主菌可供選擇,大部分工程菌的增殖時間短,不僅便于快速評價實驗結(jié)果,而且降低了技術和設備無菌要求的嚴格性。無害大腸桿菌是腸道正常微生物群的一部分與生物體為共生關系,可以通過產(chǎn)生維生素K 2使機體受益,并防止病原菌在腸道增殖。大腸桿菌是用于重組蛋白生產(chǎn)的宿主菌,它不僅具有遺傳背景清楚、培養(yǎng)操作簡單、轉(zhuǎn)化和轉(zhuǎn)導效率高、生長繁殖快、成本低廉,可以快速大規(guī)模地生產(chǎn)目的蛋白等優(yōu)點,而且其表達外源基因產(chǎn)物的水平遠高于其它基因表達系統(tǒng),表達的目的蛋白量甚至能超過細菌總蛋白量的30%,對小分子蛋白的生產(chǎn)具有極大的優(yōu)勢,因此大腸桿菌是目前應用多的重組蛋白質(zhì)表達系統(tǒng)。重組蛋白包括各類受體、細胞因子、生長因子、轉(zhuǎn)錄因子、激素、酶、毒性蛋白、病毒抗原等。國產(chǎn)IL-1重組蛋白定制
在昆蟲細胞表達系統(tǒng)中,昆蟲細胞需要桿狀病毒作為重組蛋白表達的中間體。桿狀病毒是一組不同的DNA病毒,能夠侵染各種昆蟲細胞。它們就像一個穿梭機,將目標基因?qū)虢o定的宿主細胞。加州親筆多核多角體病毒(AcMNPV) 在利用桿狀病毒這方面表現(xiàn)出突出的特征。簡單地說,將編碼感興趣蛋白質(zhì)的基因插入一個主要載體,然后將其克隆到一個名為Bacmid的次要載體上。Bacmid被轉(zhuǎn)移到一株細菌(通常是大腸桿菌)中進行初步病毒生產(chǎn)和組裝,以獲得一代桿狀病毒(P1)。P1病毒在昆蟲細胞中被擴增(例如sf9)以獲得合適的滴度(P2),然后P2病毒被用于侵染相同或不同的昆蟲細胞系(例如High-five)以實現(xiàn)重組蛋白表達。GMP級TNF-alpha重組蛋白重組蛋白的生物學活性定義。
常見的重組蛋白藥物:生長因子viii,幫助血友病患者形成血塊;非格司汀和sargramostim(造血骨髓因子),促進放療或移植后白細胞計數(shù);胰島素,用于糖尿?。籌GF1,用于某些生長問題;干擾素(阿爾法),用于乙型和丙型肝炎、生殖器疣、某些白血病和其他疾病;干擾素(β),用于多發(fā)性硬化癥;干擾素(伽瑪),用于慢性肉芽腫??;白細胞介素-2,殺死病變細胞;生長因子,用于生長因子缺乏癥;組織纖溶酶原actin劑(t-PA),溶解血凝塊,預防心臟病發(fā)作,減輕其嚴重程度。
不同細胞研究中添加的重組蛋白有所不同。人胚胎干(ES)細胞研究中的重組蛋白主要有,細胞培養(yǎng)用人重組actin A,bFGF,IGF-II等,細胞分化用BMP-4,EGF和HGF。間充質(zhì)干(MSC)細胞研究中的重組蛋白主要有,間充質(zhì)干(MSC)細胞培養(yǎng)和自我更新的生長因子:LIF,bFGF,EGF,HGF,PDGF和Wnt3,MSC分化的生長因子或細胞因子:BMP-2與TGF-β1。神經(jīng)干細胞(NSC)研究中的重組蛋白主要有,重組EGF,重組bFGF,和重組VEGF,用于神經(jīng)干細胞的擴增。此外,包括BDNF在內(nèi)的多幾種神經(jīng)營養(yǎng)因子例如BDNF,CNTF,和GDNF也可適用于相關研究。國產(chǎn)重組蛋白種類多,性價比高。
不同表達系統(tǒng)所生成的重組蛋白間有何主要區(qū)別?以賽默飛為例,Thermo Fisher Scientific? 所提供的重組蛋白產(chǎn)品通常在大腸桿菌,昆蟲細胞或哺乳動物細胞等不同的表達系統(tǒng)中產(chǎn)生。不同表達系統(tǒng)之間產(chǎn)生的重組蛋白的主要差別在于這些蛋白所攜帶的翻譯后修飾,如糖基化修飾。在大腸桿菌中生成的重組蛋白未經(jīng)糖基化。在昆蟲細胞中產(chǎn)生的重組蛋白通常經(jīng)有部分糖基化,但不含半乳糖和唾液脫鹽酸,糖鏈也無復雜分支。在哺乳動物細胞中生成的重組蛋白會發(fā)生附帶完全的糖基化修飾。備注:Mimic? Sf9 昆蟲細胞(來源于sf9昆蟲細胞系,經(jīng)改造可穩(wěn)定表達多種哺乳動物糖基轉(zhuǎn)移酶)可產(chǎn)生用于表達帶末端唾液酸和半乳糖的復雜的N-糖鏈。選擇高品質(zhì)重組蛋白和生長因子。VEGF重組蛋白定制
如何長期保存重組蛋白?國產(chǎn)IL-1重組蛋白定制
如果說明書上沒有具體的說明,如何重溶(Reconstitute)凍干的重組蛋白?我們建議采用以下方式:(1)將試劑瓶和重溶緩沖液平衡至室溫。(2)短暫離心試劑瓶以確保在小瓶底部收集所有凍干物。(3)加入推薦的重溶緩沖液,達到產(chǎn)品說明上推薦的濃度。避免劇烈振蕩或移液器吹打,這可能導致蛋白質(zhì)變性。(4)使試劑瓶在室溫下重溶15-30分鐘,可使用360度搖床或手動輕輕上下顛倒。(5)每管體積不小于10μL分裝,并按產(chǎn)品說明書上的指示儲存。(6)如果小瓶內(nèi)呈現(xiàn)薄片或顆粒,則在室溫下將產(chǎn)品混合幾小時,然后在4℃過夜。國產(chǎn)IL-1重組蛋白定制
上海研助寶生物醫(yī)藥有限公司坐落在中國(上海)自由貿(mào)易試驗區(qū)祖沖之路2288弄2號814室,是一家專業(yè)的非臨床診斷用生物試劑、實驗室儀器的銷售,從事計算機科技、網(wǎng)絡科技、化工科技、新材料科技、能源科技、生物醫(yī)藥科技、環(huán)??萍碱I域內(nèi)的技術開發(fā)、技術咨詢、技術服務、技術轉(zhuǎn)讓,廣告的設計、制作、代理、發(fā)布,專利代理,從事貨物及技術的進出口業(yè)務。公司。目前我公司在職員工以90后為主,是一個有活力有能力有創(chuàng)新精神的團隊。公司以誠信為本,業(yè)務領域涵蓋試劑,儀器,耗材,試劑盒,我們本著對客戶負責,對員工負責,更是對公司發(fā)展負責的態(tài)度,爭取做到讓每位客戶滿意。公司深耕試劑,儀器,耗材,試劑盒,正積蓄著更大的能量,向更廣闊的空間、更寬泛的領域拓展。