重組蛋白的細(xì)菌表達(dá)系統(tǒng)有各種各樣的載體和宿主菌可供選擇，大部分工程菌的增殖時(shí)間短,不僅便于快速評價(jià)實(shí)驗(yàn)結(jié)果，而且降低了技術(shù)和設(shè)備無菌要求的嚴(yán)格性。無害大腸桿菌是腸道正常微生物群的一部分與生物體為共生關(guān)系，可以通過產(chǎn)生維生素K 2使機(jī)體受益，并防止病原菌在腸道增殖。大腸桿菌是用于重組蛋白生產(chǎn)的宿主菌,它不僅具有遺傳背景清楚、培養(yǎng)操作簡單、轉(zhuǎn)化和轉(zhuǎn)導(dǎo)效率高、生長繁殖快、成本低廉,可以快速大規(guī)模地生產(chǎn)目的蛋白等優(yōu)點(diǎn),而且其表達(dá)外源基因產(chǎn)物的水平遠(yuǎn)高于其它基因表達(dá)系統(tǒng),表達(dá)的目的蛋白量甚至能超過細(xì)菌總蛋白量的30%，對小分子蛋白的生產(chǎn)具有極大的優(yōu)勢，因此大腸桿菌是目前應(yīng)用多的重組蛋白質(zhì)表達(dá)系統(tǒng)。重組蛋白包括各類受體、細(xì)胞因子、生長因子、轉(zhuǎn)錄因子、激素、酶、毒性蛋白、病毒抗原等。國產(chǎn)IL-1重組蛋白定制

在昆蟲細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)中，昆蟲細(xì)胞需要桿狀病毒作為重組蛋白表達(dá)的中間體。桿狀病毒是一組不同的DNA病毒，能夠侵染各種昆蟲細(xì)胞。它們就像一個(gè)穿梭機(jī)，將目標(biāo)基因?qū)虢o定的宿主細(xì)胞。加州親筆多核多角體病毒(AcMNPV) 在利用桿狀病毒這方面表現(xiàn)出突出的特征。簡單地說，將編碼感興趣蛋白質(zhì)的基因插入一個(gè)主要載體，然后將其克隆到一個(gè)名為Bacmid的次要載體上。Bacmid被轉(zhuǎn)移到一株細(xì)菌(通常是大腸桿菌)中進(jìn)行初步病毒生產(chǎn)和組裝，以獲得一代桿狀病毒(P1)。P1病毒在昆蟲細(xì)胞中被擴(kuò)增(例如sf9)以獲得合適的滴度(P2)，然后P2病毒被用于侵染相同或不同的昆蟲細(xì)胞系(例如High-five)以實(shí)現(xiàn)重組蛋白表達(dá)。GMP級TNF-alpha重組蛋白重組蛋白的生物學(xué)活性定義。

常見的重組蛋白藥物：生長因子viii，幫助血友病患者形成血塊；非格司汀和sargramostim(造血骨髓因子)，促進(jìn)放療或移植后白細(xì)胞計(jì)數(shù)；胰島素，用于糖尿?。籌GF1，用于某些生長問題；干擾素(阿爾法)，用于乙型和丙型肝炎、生殖器疣、某些白血病和其他疾??；干擾素(β)，用于多發(fā)性硬化癥；干擾素(伽瑪)，用于慢性肉芽腫??；白細(xì)胞介素-2，殺死病變細(xì)胞；生長因子，用于生長因子缺乏癥；組織纖溶酶原actin劑(t-PA)，溶解血凝塊，預(yù)防心臟病發(fā)作，減輕其嚴(yán)重程度。

不同細(xì)胞研究中添加的重組蛋白有所不同。人胚胎干（ES）細(xì)胞研究中的重組蛋白主要有，細(xì)胞培養(yǎng)用人重組actin A，bFGF，IGF-II等，細(xì)胞分化用BMP-4，EGF和HGF。間充質(zhì)干（MSC）細(xì)胞研究中的重組蛋白主要有，間充質(zhì)干（MSC）細(xì)胞培養(yǎng)和自我更新的生長因子：LIF，bFGF，EGF，HGF，PDGF和Wnt3，MSC分化的生長因子或細(xì)胞因子：BMP-2與TGF-β1。神經(jīng)干細(xì)胞（NSC）研究中的重組蛋白主要有，重組EGF，重組bFGF，和重組VEGF，用于神經(jīng)干細(xì)胞的擴(kuò)增。此外，包括BDNF在內(nèi)的多幾種神經(jīng)營養(yǎng)因子例如BDNF，CNTF，和GDNF也可適用于相關(guān)研究。國產(chǎn)重組蛋白種類多，性價(jià)比高。

不同表達(dá)系統(tǒng)所生成的重組蛋白間有何主要區(qū)別？以賽默飛為例，Thermo Fisher Scientific? 所提供的重組蛋白產(chǎn)品通常在大腸桿菌，昆蟲細(xì)胞或哺乳動物細(xì)胞等不同的表達(dá)系統(tǒng)中產(chǎn)生。不同表達(dá)系統(tǒng)之間產(chǎn)生的重組蛋白的主要差別在于這些蛋白所攜帶的翻譯后修飾，如糖基化修飾。在大腸桿菌中生成的重組蛋白未經(jīng)糖基化。在昆蟲細(xì)胞中產(chǎn)生的重組蛋白通常經(jīng)有部分糖基化，但不含半乳糖和唾液脫鹽酸，糖鏈也無復(fù)雜分支。在哺乳動物細(xì)胞中生成的重組蛋白會發(fā)生附帶完全的糖基化修飾。備注：Mimic? Sf9 昆蟲細(xì)胞（來源于sf9昆蟲細(xì)胞系，經(jīng)改造可穩(wěn)定表達(dá)多種哺乳動物糖基轉(zhuǎn)移酶）可產(chǎn)生用于表達(dá)帶末端唾液酸和半乳糖的復(fù)雜的N-糖鏈。選擇高品質(zhì)重組蛋白和生長因子。VEGF重組蛋白定制

如何長期保存重組蛋白？國產(chǎn)IL-1重組蛋白定制

如果說明書上沒有具體的說明，如何重溶（Reconstitute）凍干的重組蛋白？我們建議采用以下方式：（1）將試劑瓶和重溶緩沖液平衡至室溫。（2）短暫離心試劑瓶以確保在小瓶底部收集所有凍干物。（3）加入推薦的重溶緩沖液，達(dá)到產(chǎn)品說明上推薦的濃度。避免劇烈振蕩或移液器吹打，這可能導(dǎo)致蛋白質(zhì)變性。（4）使試劑瓶在室溫下重溶15-30分鐘，可使用360度搖床或手動輕輕上下顛倒。（5）每管體積不小于10μL分裝，并按產(chǎn)品說明書上的指示儲存。（6）如果小瓶內(nèi)呈現(xiàn)薄片或顆粒，則在室溫下將產(chǎn)品混合幾小時(shí)，然后在4℃過夜。國產(chǎn)IL-1重組蛋白定制

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