重組蛋白疫苗是采用基因工程技術(shù),將病毒的目的抗原基因構(gòu)建在表達(dá)載體上,將已構(gòu)建的表達(dá)蛋白載體轉(zhuǎn)化到細(xì)菌、酵母或哺乳動(dòng)物或昆蟲(chóng)細(xì)胞中,在一定的誘導(dǎo)條件下,表達(dá)出大量的抗原蛋白,再經(jīng)提純并添加佐劑而制成疫苗。重組蛋白疫苗主要有三個(gè)優(yōu)勢(shì):不養(yǎng)活病毒,無(wú)需擔(dān)心病毒外泄,對(duì)生產(chǎn)車間的生物安全等級(jí)要求低;利用轉(zhuǎn)基因技術(shù)生產(chǎn)病毒S蛋白上的RBD蛋白,能實(shí)現(xiàn)高產(chǎn)量、高純度、低成本;重組蛋白疫苗只含RBD蛋白,純度高,安全性更好。重組蛋白在多種細(xì)胞培養(yǎng)中的應(yīng)用。普欣BDNF重組蛋白怎么樣
重組人胰島素是上市的重組蛋白藥物,用于1型和2型糖尿病,經(jīng)過(guò)30多年的發(fā)展,目前胰島素已從一代動(dòng)物源性胰島素發(fā)展到第四代長(zhǎng)效胰島素類似物。目前重組蛋白藥物主要包含:1. 多肽類------重組人胰島素、胰島素類似物、重組人生長(zhǎng)因子和重組人促卵泡成熟因子等。2. 細(xì)胞因子-----重組人促卵泡成熟因子、重組人干擾素α、β、γ、重組人粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞刺激因子、重組人白細(xì)胞介素2、11、重組人表皮生長(zhǎng)因子、重組人成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因等。3. 重組酶----重組人尿激酶原、重組人α葡萄糖苷酶制劑等,以及其它如重組人骨形成蛋白2和重組水蛭素等多個(gè)細(xì)分領(lǐng)域。國(guó)產(chǎn)PD-L1重組蛋白普欣生物是國(guó)內(nèi)外多家著名生物試劑公司和臨床診斷公司的重組蛋白OEM供應(yīng)商。
不同細(xì)胞研究中添加的重組蛋白有所不同。人胚胎干(ES)細(xì)胞研究中的重組蛋白主要有,細(xì)胞培養(yǎng)用人重組actin A,bFGF,IGF-II等,細(xì)胞分化用BMP-4,EGF和HGF。間充質(zhì)干(MSC)細(xì)胞研究中的重組蛋白主要有,間充質(zhì)干(MSC)細(xì)胞培養(yǎng)和自我更新的生長(zhǎng)因子:LIF,bFGF,EGF,HGF,PDGF和Wnt3,MSC分化的生長(zhǎng)因子或細(xì)胞因子:BMP-2與TGF-β1。神經(jīng)干細(xì)胞(NSC)研究中的重組蛋白主要有,重組EGF,重組bFGF,和重組VEGF,用于神經(jīng)干細(xì)胞的擴(kuò)增。此外,包括BDNF在內(nèi)的多幾種神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子例如BDNF,CNTF,和GDNF也可適用于相關(guān)研究。
在重組蛋白生產(chǎn)中,酵母表達(dá)系統(tǒng)與大腸桿菌表達(dá)有所不同,大腸桿菌表達(dá)只需將質(zhì)粒/載體轉(zhuǎn)入到宿主菌體內(nèi),其載體攜帶復(fù)制原點(diǎn)隨著宿主染色體的復(fù)制而復(fù)制,可以穩(wěn)定存在。而酵母表達(dá)相對(duì)復(fù)雜,設(shè)計(jì)的質(zhì)粒/載體均不帶有酵母自身復(fù)制原點(diǎn),因此如果直接導(dǎo)入到宿主菌中,不能穩(wěn)定存在。所以必須將質(zhì)粒/載體線性化,以同源重組的方式與宿主菌的染色體進(jìn)行整合,這樣外源基因才能夠穩(wěn)定存在,而且同源重組一旦形成會(huì)很穩(wěn)定,在通過(guò)后期的篩選排除沒(méi)有整合成功的質(zhì)粒/載體和宿主菌,挑選整合成功并能夠高表達(dá)的重組轉(zhuǎn)化子,某種程度上與哺乳動(dòng)物穩(wěn)定細(xì)胞系構(gòu)建原理類似。外企的重組蛋白藥物占據(jù)了全球?qū)⒔?0%的醫(yī)藥市場(chǎng)份額。
在昆蟲(chóng)細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)中,昆蟲(chóng)細(xì)胞需要桿狀病毒作為重組蛋白表達(dá)的中間體。桿狀病毒是一組不同的DNA病毒,能夠侵染各種昆蟲(chóng)細(xì)胞。它們就像一個(gè)穿梭機(jī),將目標(biāo)基因?qū)虢o定的宿主細(xì)胞。加州親筆多核多角體病毒(AcMNPV) 在利用桿狀病毒這方面表現(xiàn)出突出的特征。簡(jiǎn)單地說(shuō),將編碼感興趣蛋白質(zhì)的基因插入一個(gè)主要載體,然后將其克隆到一個(gè)名為Bacmid的次要載體上。Bacmid被轉(zhuǎn)移到一株細(xì)菌(通常是大腸桿菌)中進(jìn)行初步病毒生產(chǎn)和組裝,以獲得一代桿狀病毒(P1)。P1病毒在昆蟲(chóng)細(xì)胞中被擴(kuò)增(例如sf9)以獲得合適的滴度(P2),然后P2病毒被用于侵染相同或不同的昆蟲(chóng)細(xì)胞系(例如High-five)以實(shí)現(xiàn)重組蛋白表達(dá)。重組蛋白包括各類受體、細(xì)胞因子、生長(zhǎng)因子、轉(zhuǎn)錄因子、激素、酶、毒性蛋白、病毒抗原等。小鼠IL-2重組蛋白
重組蛋白生物科研試劑總體市場(chǎng)逐年遞增。普欣BDNF重組蛋白怎么樣
蛋白的溶解性與很多因素有關(guān),其中比較重要的是pH值和離子強(qiáng)度。購(gòu)買(mǎi)的重組蛋白按照說(shuō)明上所標(biāo)明的溶解液來(lái)溶解。如果您所用的溶解液的pH值和離子強(qiáng)度與說(shuō)明書(shū)中所標(biāo)明的不符,很多時(shí)候會(huì)造成細(xì)胞因子或重組蛋白不能完全溶解或者根本無(wú)法溶解,這樣所配得的細(xì)胞因子或重組蛋白必然活性不夠或喪失。重組蛋白溶解時(shí)一定要溶解到指定的濃度,高于或低于該濃度范圍,都可能會(huì)導(dǎo)致重組蛋白不穩(wěn)定,出現(xiàn)活性下降的現(xiàn)象。另外,重組蛋白在溶解時(shí),一定不能用渦旋儀進(jìn)行快速振蕩,以免出現(xiàn)蛋白鏈斷裂。重組蛋白的凍干粉是非常容易溶解的,一般用移液器的吸頭輕輕吹幾下,即可使細(xì)胞因子或重組蛋白完全溶解。普欣BDNF重組蛋白怎么樣
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