量化生產(chǎn)的重組蛋白種類有限,如果購買不到所需蛋白,則需要重組蛋白定制服務(wù)。對于特定的應(yīng)用,使用正確的蛋白表達(dá)系統(tǒng)是實驗成功的因素。以義翹神州為例,義翹神州的重組蛋白表達(dá)服務(wù),擁有多年的重組蛋白表達(dá)經(jīng)驗,提供從基因合成、載體構(gòu)建到蛋白表達(dá)及純化的一站式服務(wù)。擁有多種重組蛋白表達(dá)系統(tǒng),包括原核生物蛋白表達(dá)系統(tǒng)、酵母蛋白表達(dá)系統(tǒng)、昆蟲細(xì)胞蛋白表達(dá)系統(tǒng)(桿狀病毒)、哺乳動物細(xì)胞蛋白表達(dá)系統(tǒng)。具備多種純化體系,為蛋白表達(dá)與純化方面提供多種選擇。自公司成立以來,已成功表達(dá)約6000 個毫克至克級的不同種屬的重組蛋白。每年1000個新蛋白的研制和生產(chǎn)能力以及快速解決研發(fā)和生產(chǎn)問題的能力。擁有近百個2L 到1000L 不同體積的發(fā)酵罐和超過30 種重組蛋白純化體系,可以滿足高通量及大規(guī)模的重組蛋白表達(dá)需求。重組蛋白在多種細(xì)胞培養(yǎng)中的應(yīng)用。R&DSystemsBMP-3重組蛋白
在中國,根據(jù)Frost & Sullivan、中商產(chǎn)業(yè)研究院整理數(shù)據(jù)表明,重組蛋白生物科研試劑總體市場從2016年的5億元增長到2021年的12億元,預(yù)計2022年市場規(guī)模將達(dá)到14億元。由于行業(yè)特性,生物研發(fā)企業(yè)和科研機構(gòu)對重組蛋白和抗體的需求種類很多,一方面要求重組蛋白具備接近天然蛋白活性和修飾的特點,另一方面又對供貨時間和能力具有較高的要求。為滿足客戶需求,重組蛋白生物科研試劑的供應(yīng)商需要建立相應(yīng)的試劑研發(fā)生產(chǎn)技術(shù)平臺和質(zhì)量控制技術(shù)平臺,有合格的高技術(shù)人才儲備,還要具備較強的資金實力。小鼠EGF重組蛋白定制選擇合適的重組蛋白表達(dá)系統(tǒng),至關(guān)重要。
重組蛋白溶液在低濃度的冰凍條件下凍存時通常不是很穩(wěn)定。在凍融過程中,溶液中的某些蛋白會粘附在容器壁上,如果蛋白的起始濃度較低,則上述原因可能會導(dǎo)致造成蛋白濃度的進(jìn)一步下降。因此,重組蛋白溶液中要添加載體蛋白用于減少此類損失。常用的載體蛋白包括牛血清白蛋白(BSA),人血清白蛋白(HSA)或胎牛血清(FBS)。這些載體蛋白通常的使用濃度是在0.1%。依根據(jù)經(jīng)驗數(shù)據(jù),如果重組蛋白的濃度低于0.5 mg/mL,則推薦加入一些載體蛋白。常見國產(chǎn)重組蛋白品牌:北京義翹神州,武漢普健生物,上海普欣生物,近岸蛋白質(zhì)科技,武漢華美生物,北京百普賽斯生物等。常見進(jìn)口重組蛋白品牌:R&D Systems,PeproTech,ProSpec,Gibco等。
重組蛋白疫苗是采用基因工程技術(shù),將病毒的目的抗原基因構(gòu)建在表達(dá)載體上,將已構(gòu)建的表達(dá)蛋白載體轉(zhuǎn)化到細(xì)菌、酵母或哺乳動物或昆蟲細(xì)胞中,在一定的誘導(dǎo)條件下,表達(dá)出大量的抗原蛋白,再經(jīng)提純并添加佐劑而制成疫苗。重組蛋白疫苗主要有三個優(yōu)勢:不養(yǎng)活病毒,無需擔(dān)心病毒外泄,對生產(chǎn)車間的生物安全等級要求低;利用轉(zhuǎn)基因技術(shù)生產(chǎn)病毒S蛋白上的RBD蛋白,能實現(xiàn)高產(chǎn)量、高純度、低成本;重組蛋白疫苗只含RBD蛋白,純度高,安全性更好。嚴(yán)格的質(zhì)量控制系統(tǒng), 才能保證重組蛋白產(chǎn)品的生物活化與一致性。
客戶購買的重組蛋白一般為裝在塑料管中的凍干粉,凍干粉在運輸過程中可能會因顛簸而漂散并粘貼于管壁或管蓋上,所以在打開塑料瓶蓋前,需將凍干粉通過離心收集到管底,以便用很小體積的液體即可將凍干粉完全溶解。那么應(yīng)該用多少轉(zhuǎn)速、多長時間離心試劑管,才能達(dá)到良好的收集效果?答:有些小型高速離心機(多為進(jìn)口品牌)的面板上有一個Spin鍵,按了此鍵后,離心機會自動快速上升到速度(10000rpm或12000rpm),上升后速度即刻下降,直至停止旋轉(zhuǎn),整個過程大約30s。這個Spin鍵足以很好的將細(xì)胞因子或蛋白收集到管底。但有些實驗室沒有這樣的高速離心機,只有轉(zhuǎn)速為4000-4500rpm的離心機。這種情況下,需3000-3500rpm離心5min,也能達(dá)到類似的效果。重組蛋白藥物在醫(yī)學(xué)中作用顯著。無動物源性BMP-8重組蛋白
重組蛋白干粉如何重溶?R&DSystemsBMP-3重組蛋白
CHO細(xì)胞即:中國倉鼠卵巢細(xì)胞(Chinese Hamster Ovary),它是基因工程疫苗研究中具有代表性的哺乳動物表達(dá)載體,是用來表達(dá)外源蛋白多也是成功的一類細(xì)胞。市場上超過70%的蛋白質(zhì)藥物選擇的制造細(xì)胞就是CHO細(xì)胞。CHO細(xì)胞可以在外源表達(dá)的蛋白質(zhì)上摻入復(fù)雜的聚糖,如N-連接聚糖。有助于蛋白質(zhì)的折疊和細(xì)胞內(nèi)運輸。重組蛋白表達(dá)側(cè)重于大化每個分子中含有唾液酸的復(fù)雜聚糖的數(shù)量,CHO細(xì)胞糖基化之后,能增加對蛋白水解的抵抗力和延長體內(nèi)血清半衰期,所以CHO細(xì)胞成為用作重組蛋白的哺乳動物細(xì)胞系。R&DSystemsBMP-3重組蛋白
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