蛋白質(zhì)生物學不僅包含研究內(nèi)容,也包含了研究所需的工具。即基于蛋白質(zhì)結構及功能的研究,和利用抗體、蛋白及多肽等作為純化、檢測和分析生物系統(tǒng)的工具。有些蛋白分析方法(如western blotting和ELISA等)已作為實驗室的常規(guī)實驗方法使用了多年。其它方法如定量蛋白質(zhì)譜的實驗方法則是相對較新的實驗技術,并且正在快速發(fā)展中。針對重組蛋白純化,賽默飛提供種類豐富的標簽選擇,包括6xHis, GST, DYKDDDDK (FLAG), c-myc, 和 HA。還提供一系列磁珠和樹脂等純化產(chǎn)品,磁珠、磁性瓊脂糖、散裝樹脂、離心柱或試劑盒,F(xiàn)PLC層析柱,96孔過濾板等,用于從大腸桿菌、酵母、昆蟲或哺乳動物表達系統(tǒng)中純化從微克(μg)到低千克(kg)級重組蛋白??蓾M足大多實驗的需求,包括高通量篩選、批量處理、中試和工藝純化等。重組蛋白疫苗有著天然的優(yōu)勢。GMP級BDNF重組蛋白定制
購買的重組蛋白單位一般是 μg,重組蛋白檢測結果和用量常用單位是 U/mL 或 IU/mL。U是什么?和IU之間有什么差別?它們又是怎么與 μg 進行換算的呢?首先,U 是蛋白活性單位,用于計量蛋白本身的生物學活性。活性單位指在適條件下,單位時間內(nèi)產(chǎn)生單位生物學效應的蛋白量。以酶為例,1961年,國際生物化學學會酶學委員會提出采用統(tǒng)一的「國際單位」(IU)來表示酶的活力,在合適條件下,每分鐘內(nèi)催化 1 微摩爾(μmol)底物轉化為產(chǎn)物或轉化底物中 1 微摩爾的有關基團所需的酶量。即 1 IU=1 U=1 μmol/min。IU 與 μg之間的換算,要引入比活性的概念。比活性是指單位質(zhì)量蛋白的生物學活性單位,通常用 U/μg 或 μmol/min/μg 表示。以酶為例,在合適條件下,如果 1 μg 酶可以在 1 分鐘內(nèi)催化 1μmol 的底物,那么其比活性就是 1U/μg。比活性是重組蛋白的一項重要指標。進行比活性項目的檢測,不僅可以反映產(chǎn)品生產(chǎn)工藝的穩(wěn)定情況,而且可以比較不同表達體系、不同生產(chǎn)廠家生產(chǎn)同一產(chǎn)品的品質(zhì)情況。比活性高說明產(chǎn)品的生產(chǎn)工藝更先進、純度更高、質(zhì)量更優(yōu)。小鼠EGF重組蛋白定制重組蛋白是生物醫(yī)藥行業(yè)研發(fā)及生產(chǎn)中的關鍵生物試劑。
重組蛋白的細菌表達系統(tǒng)有各種各樣的載體和宿主菌可供選擇,大部分工程菌的增殖時間短,不僅便于快速評價實驗結果,而且降低了技術和設備無菌要求的嚴格性。無害大腸桿菌是腸道正常微生物群的一部分與生物體為共生關系,可以通過產(chǎn)生維生素K 2使機體受益,并防止病原菌在腸道增殖。大腸桿菌是用于重組蛋白生產(chǎn)的宿主菌,它不僅具有遺傳背景清楚、培養(yǎng)操作簡單、轉化和轉導效率高、生長繁殖快、成本低廉,可以快速大規(guī)模地生產(chǎn)目的蛋白等優(yōu)點,而且其表達外源基因產(chǎn)物的水平遠高于其它基因表達系統(tǒng),表達的目的蛋白量甚至能超過細菌總蛋白量的30%,對小分子蛋白的生產(chǎn)具有極大的優(yōu)勢,因此大腸桿菌是目前應用多的重組蛋白質(zhì)表達系統(tǒng)。
單克隆抗體是一類重組蛋白,不論是科研還是醫(yī)療中,都有很大應用。突出的表達重組單克隆抗體的宿主細胞系是CHO、NS0、SP2/0、HEK293和PER.C6。然而,大多數(shù)文獻都是關于CHO細胞的,該細胞仍然是現(xiàn)今工業(yè)生產(chǎn)重組蛋白藥物的主力,占到了70%(Jayapal等人,2007)。CHO細胞是于1986年一個被批準的重組生物制藥的表達系統(tǒng)(組織型纖溶酶原actin物;t-PA)。從那時起,CHO細胞就是是重組蛋白表達的選擇。盡管有其他哺乳動物表達系統(tǒng)可用,CHO細胞仍然是優(yōu)化重組蛋白表達研究的中心。重組蛋白的生物活性接近于天然蛋白質(zhì),因此在生物制藥領域應用廣泛。
昆蟲細胞是多種重組蛋白的多功能表達宿主。其較強的折疊能力和較高的培養(yǎng)密度使其成為表達細胞內(nèi)復雜蛋白和病毒蛋白的理想選擇。2007年,由昆蟲細胞系以病毒樣顆粒(VLPs)的形式生產(chǎn)的病毒疫苗Cervarix被批準用于人類。除了在疫苗開發(fā)方面的潛力外,昆蟲細胞產(chǎn)生的高活性蛋白還應用于生物物理學和生物化學的各個學科,如結構解釋、藥物設計、測定方法建立和診斷試劑開發(fā)等等。許多生物廠家利用昆蟲細胞進行重組蛋白產(chǎn)品開發(fā)和承包研究項目。重組蛋白包括各類受體、細胞因子、生長因子、轉錄因子、激素、酶、毒性蛋白、病毒抗原等。小鼠PDGF重組蛋白
重組蛋白生物科研試劑總體市場逐年遞增。GMP級BDNF重組蛋白定制
由于重組蛋白通常在不同的表達系統(tǒng)中生產(chǎn),容易受到各種因素的影響進而引起蛋白質(zhì)的性質(zhì)出現(xiàn)差異,因此為了保證獲得高質(zhì)量,穩(wěn)定的結果,在藥物分析、新藥研發(fā)、細胞 therapy等應用中優(yōu)先選擇GMP(Good Manufacturing Practice, 良好生產(chǎn)規(guī)范)級重組蛋白。GMP要求企業(yè)從原料、人員、設施設備、生產(chǎn)過程、包裝運輸和質(zhì)量控制等方面達到法規(guī)相關要求,形成一套可操作的作業(yè)規(guī)范。GMP級重組蛋白具有以下幾個優(yōu)點:詳實的產(chǎn)品信息;嚴格的質(zhì)量管理體系;批次間穩(wěn)定性高;無外源動物源性。GMP級BDNF重組蛋白定制
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