不同表達(dá)系統(tǒng)所生成的重組蛋白間有何主要區(qū)別?以賽默飛為例,Thermo Fisher Scientific? 所提供的重組蛋白產(chǎn)品通常在大腸桿菌,昆蟲細(xì)胞或哺乳動(dòng)物細(xì)胞等不同的表達(dá)系統(tǒng)中產(chǎn)生。不同表達(dá)系統(tǒng)之間產(chǎn)生的重組蛋白的主要差別在于這些蛋白所攜帶的翻譯后修飾,如糖基化修飾。在大腸桿菌中生成的重組蛋白未經(jīng)糖基化。在昆蟲細(xì)胞中產(chǎn)生的重組蛋白通常經(jīng)有部分糖基化,但不含半乳糖和唾液脫鹽酸,糖鏈也無復(fù)雜分支。在哺乳動(dòng)物細(xì)胞中生成的重組蛋白會(huì)發(fā)生附帶完全的糖基化修飾。備注:Mimic? Sf9 昆蟲細(xì)胞(來源于sf9昆蟲細(xì)胞系,經(jīng)改造可穩(wěn)定表達(dá)多種哺乳動(dòng)物糖基轉(zhuǎn)移酶)可產(chǎn)生用于表達(dá)帶末端唾液酸和半乳糖的復(fù)雜的N-糖鏈。重組蛋白定制中的注意事項(xiàng)。大鼠BMP-2重組蛋白定制
如果一個(gè)實(shí)驗(yàn)周期長(zhǎng)于一周,或配制的細(xì)胞因子或重組蛋白一次用不完,我們就需對(duì)細(xì)胞因子或重組蛋白進(jìn)行長(zhǎng)期保存。千萬不能將重組蛋白凍干粉用推薦的溶液重懸后直接分裝凍存于-20℃至-80℃。塑料管壁對(duì)多數(shù)蛋白均有很好的吸附作用,也就是說溶液中的蛋白很容易粘附在管壁。直接分裝凍存,則溶液中的大部分細(xì)胞因子或重組蛋白均會(huì)粘附到管壁上,導(dǎo)致溶液中實(shí)際溶解的細(xì)胞因子或重組蛋白的濃度大為降低,表現(xiàn)為細(xì)胞因子或重組蛋白活性的下降。正確的方法是:將已重懸的細(xì)胞因子或蛋白用含載體蛋白,如0.1% BSA(牛血清白蛋白),10% FBS(胎牛血清),5% HSA(人血清白蛋白)的溶液將重懸液進(jìn)一步稀釋,然后分裝凍存于-20℃至-80℃,即常規(guī)冰箱的冷凍室或超低溫冰箱中。無動(dòng)物源性BMP-8重組蛋白定制如何長(zhǎng)期保存重組蛋白?
由于重組蛋白通常在不同的表達(dá)系統(tǒng)中生產(chǎn),容易受到各種因素的影響進(jìn)而引起蛋白質(zhì)的性質(zhì)出現(xiàn)差異,因此為了保證獲得高質(zhì)量,穩(wěn)定的結(jié)果,在藥物分析、新藥研發(fā)、細(xì)胞 therapy等應(yīng)用中優(yōu)先選擇GMP(Good Manufacturing Practice, 良好生產(chǎn)規(guī)范)級(jí)重組蛋白。GMP要求企業(yè)從原料、人員、設(shè)施設(shè)備、生產(chǎn)過程、包裝運(yùn)輸和質(zhì)量控制等方面達(dá)到法規(guī)相關(guān)要求,形成一套可操作的作業(yè)規(guī)范。GMP級(jí)重組蛋白具有以下幾個(gè)優(yōu)點(diǎn):詳實(shí)的產(chǎn)品信息;嚴(yán)格的質(zhì)量管理體系;批次間穩(wěn)定性高;無外源動(dòng)物源性。
如果說明書上沒有具體的說明,如何重溶(Reconstitute)凍干的重組蛋白?我們建議采用以下方式:(1)將試劑瓶和重溶緩沖液平衡至室溫。(2)短暫離心試劑瓶以確保在小瓶底部收集所有凍干物。(3)加入推薦的重溶緩沖液,達(dá)到產(chǎn)品說明上推薦的濃度。避免劇烈振蕩或移液器吹打,這可能導(dǎo)致蛋白質(zhì)變性。(4)使試劑瓶在室溫下重溶15-30分鐘,可使用360度搖床或手動(dòng)輕輕上下顛倒。(5)每管體積不小于10μL分裝,并按產(chǎn)品說明書上的指示儲(chǔ)存。(6)如果小瓶?jī)?nèi)呈現(xiàn)薄片或顆粒,則在室溫下將產(chǎn)品混合幾小時(shí),然后在4℃過夜。溶解后的重組蛋白如何保存?
重組蛋白的活性低是讓科研工作者十分頭疼的難題,買來的重組蛋白活性低怎么辦?除了重組蛋白自身存在質(zhì)量問題外,它可能只是需要一個(gè)“搭檔”。在某些重組蛋白在使用時(shí),需要加入交聯(lián)抗體,進(jìn)行交聯(lián)(Cross-linking)反應(yīng)后才能表現(xiàn)出高活性,發(fā)揮出功能。其原理是,交聯(lián)反應(yīng)能夠?qū)⒅亟M蛋白的受體相互拉近,因?yàn)槊總€(gè)標(biāo)簽抗體含有兩個(gè)抗原結(jié)合臂,從而能夠使兩個(gè)含標(biāo)簽蛋白 - 受體復(fù)合物拉近,進(jìn)而指數(shù)級(jí)放大下游信號(hào),提升刺激的效率(表現(xiàn)為更低的 ED50 值)。眾所周知,在同一實(shí)驗(yàn)中 ED50 越低表明著活性越高。重組蛋白的生物學(xué)活性定義。普欣IL-5重組蛋白
比較熱門的重組蛋白主要為重組細(xì)胞因子。大鼠BMP-2重組蛋白定制
重組蛋白疫苗是采用基因工程技術(shù),將病毒的目的抗原基因構(gòu)建在表達(dá)載體上,將已構(gòu)建的表達(dá)蛋白載體轉(zhuǎn)化到細(xì)菌、酵母或哺乳動(dòng)物或昆蟲細(xì)胞中,在一定的誘導(dǎo)條件下,表達(dá)出大量的抗原蛋白,再經(jīng)提純并添加佐劑而制成疫苗。重組蛋白疫苗主要有三個(gè)優(yōu)勢(shì):不養(yǎng)活病毒,無需擔(dān)心病毒外泄,對(duì)生產(chǎn)車間的生物安全等級(jí)要求低;利用轉(zhuǎn)基因技術(shù)生產(chǎn)病毒S蛋白上的RBD蛋白,能實(shí)現(xiàn)高產(chǎn)量、高純度、低成本;重組蛋白疫苗只含RBD蛋白,純度高,安全性更好。大鼠BMP-2重組蛋白定制
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