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人IL-1重組蛋白定制

來(lái)源: 發(fā)布時(shí)間:2022-07-07

CHO細(xì)胞即:中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞(Chinese Hamster Ovary),它是基因工程疫苗研究中具有代表性的哺乳動(dòng)物表達(dá)載體,是用來(lái)表達(dá)外源蛋白多也是成功的一類(lèi)細(xì)胞。市場(chǎng)上超過(guò)70%的蛋白質(zhì)藥物選擇的制造細(xì)胞就是CHO細(xì)胞。CHO細(xì)胞可以在外源表達(dá)的蛋白質(zhì)上摻入復(fù)雜的聚糖,如N-連接聚糖。有助于蛋白質(zhì)的折疊和細(xì)胞內(nèi)運(yùn)輸。重組蛋白表達(dá)側(cè)重于大化每個(gè)分子中含有唾液酸的復(fù)雜聚糖的數(shù)量,CHO細(xì)胞糖基化之后,能增加對(duì)蛋白水解的抵抗力和延長(zhǎng)體內(nèi)血清半衰期,所以CHO細(xì)胞成為用作重組蛋白的哺乳動(dòng)物細(xì)胞系。重組蛋白疫苗有著天然的優(yōu)勢(shì)。人IL-1重組蛋白定制

在昆蟲(chóng)細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)中,昆蟲(chóng)細(xì)胞需要桿狀病毒作為重組蛋白表達(dá)的中間體。桿狀病毒是一組不同的DNA病毒,能夠侵染各種昆蟲(chóng)細(xì)胞。它們就像一個(gè)穿梭機(jī),將目標(biāo)基因?qū)虢o定的宿主細(xì)胞。加州親筆多核多角體病毒(AcMNPV) 在利用桿狀病毒這方面表現(xiàn)出突出的特征。簡(jiǎn)單地說(shuō),將編碼感興趣蛋白質(zhì)的基因插入一個(gè)主要載體,然后將其克隆到一個(gè)名為Bacmid的次要載體上。Bacmid被轉(zhuǎn)移到一株細(xì)菌(通常是大腸桿菌)中進(jìn)行初步病毒生產(chǎn)和組裝,以獲得一代桿狀病毒(P1)。P1病毒在昆蟲(chóng)細(xì)胞中被擴(kuò)增(例如sf9)以獲得合適的滴度(P2),然后P2病毒被用于侵染相同或不同的昆蟲(chóng)細(xì)胞系(例如High-five)以實(shí)現(xiàn)重組蛋白表達(dá)。GMP級(jí)IL-9重組蛋白重組蛋白生物科研試劑總體市場(chǎng)逐年遞增。

重組蛋白是由操縱的基因——重組基因編碼的蛋白質(zhì),由特定的重組表達(dá)系統(tǒng)產(chǎn)生(見(jiàn)蛋白表達(dá)系統(tǒng))。重組基因是一種新的基因組合,由一個(gè)或多個(gè)DNA的片段或基因從不同的分子或其他物種插入。與天然蛋白相比,重組蛋白產(chǎn)量大,生產(chǎn)相對(duì)容易。重組蛋白在研究細(xì)胞因子和生長(zhǎng)因子、酶和激酶研究以及補(bǔ)體系統(tǒng)功能等生物學(xué)過(guò)程中發(fā)揮著重要作用。此外,重組蛋白被認(rèn)為是一種高效的藥物,不會(huì)產(chǎn)生脫靶的副作用,比小分子的開(kāi)發(fā)時(shí)間更短(見(jiàn)重組蛋白藥物)。

不同表達(dá)系統(tǒng)所生成的重組蛋白間有何主要區(qū)別?以賽默飛為例,Thermo Fisher Scientific? 所提供的重組蛋白產(chǎn)品通常在大腸桿菌,昆蟲(chóng)細(xì)胞或哺乳動(dòng)物細(xì)胞等不同的表達(dá)系統(tǒng)中產(chǎn)生。不同表達(dá)系統(tǒng)之間產(chǎn)生的重組蛋白的主要差別在于這些蛋白所攜帶的翻譯后修飾,如糖基化修飾。在大腸桿菌中生成的重組蛋白未經(jīng)糖基化。在昆蟲(chóng)細(xì)胞中產(chǎn)生的重組蛋白通常經(jīng)有部分糖基化,但不含半乳糖和唾液脫鹽酸,糖鏈也無(wú)復(fù)雜分支。在哺乳動(dòng)物細(xì)胞中生成的重組蛋白會(huì)發(fā)生附帶完全的糖基化修飾。備注:Mimic? Sf9 昆蟲(chóng)細(xì)胞(來(lái)源于sf9昆蟲(chóng)細(xì)胞系,經(jīng)改造可穩(wěn)定表達(dá)多種哺乳動(dòng)物糖基轉(zhuǎn)移酶)可產(chǎn)生用于表達(dá)帶末端唾液酸和半乳糖的復(fù)雜的N-糖鏈。重組蛋白的應(yīng)用顯著增長(zhǎng),用于重組蛋白表達(dá)和純化的技術(shù)和產(chǎn)品也得以增長(zhǎng)。

功能性ELISA是一類(lèi)以ELISA形式進(jìn)行的、基于體外配體結(jié)合的分析法。該方法用于檢測(cè)目的蛋白與其天然結(jié)合物配體之間(如生長(zhǎng)因子與其受體)的結(jié)合能力。如果在該檢測(cè)中生長(zhǎng)因子能夠與其天然受體相結(jié)合,則該生長(zhǎng)因子很可能是具有功能的。ED50為OD值讀取過(guò)程中能夠提供50%信號(hào)強(qiáng)度的生長(zhǎng)因子濃度(在包被了受體的平板上)。重組蛋白使用了基于細(xì)胞的檢測(cè)分析或功能性ELISA分析對(duì)其生物學(xué)活性進(jìn)行了檢測(cè),產(chǎn)品頁(yè)上會(huì)提供相應(yīng)的ED50值。也有些重組蛋白沒(méi)有提供生物活性數(shù)據(jù)。在大多數(shù)情況下,這表明沒(méi)有進(jìn)行生物活性測(cè)試,但它并不一定意味著蛋白是沒(méi)有活性的。在沒(méi)有生物活性數(shù)據(jù)的情況下,這些蛋白可用做蛋白質(zhì)分子量標(biāo)準(zhǔn),蛋白免疫印記陽(yáng)性對(duì)照(如果是全長(zhǎng)的重組蛋白)或免疫原。其它可能的用途是配體結(jié)合試驗(yàn)或ELISA的標(biāo)準(zhǔn)品。多肽類(lèi)激素藥是重組蛋白藥物中的明星產(chǎn)品。義翹神州IL-7重組蛋白

中國(guó)的重組蛋白藥物市場(chǎng),前景廣闊。人IL-1重組蛋白定制

常見(jiàn)的重組蛋白藥物:生長(zhǎng)因子viii,幫助血友病患者形成血塊;非格司汀和sargramostim(造血骨髓因子),促進(jìn)放療或移植后白細(xì)胞計(jì)數(shù);胰島素,用于糖尿病;IGF1,用于某些生長(zhǎng)問(wèn)題;干擾素(阿爾法),用于乙型和丙型肝炎、生殖器疣、某些白血病和其他疾?。桓蓴_素(β),用于多發(fā)性硬化癥;干擾素(伽瑪),用于慢性肉芽腫病;白細(xì)胞介素-2,殺死病變細(xì)胞;生長(zhǎng)因子,用于生長(zhǎng)因子缺乏癥;組織纖溶酶原actin劑(t-PA),溶解血凝塊,預(yù)防心臟病發(fā)作,減輕其嚴(yán)重程度。人IL-1重組蛋白定制

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