不同細(xì)胞研究中添加的重組蛋白有所不同。人胚胎干(ES)細(xì)胞研究中的重組蛋白主要有,細(xì)胞培養(yǎng)用人重組actin A,bFGF,IGF-II等,細(xì)胞分化用BMP-4,EGF和HGF。間充質(zhì)干(MSC)細(xì)胞研究中的重組蛋白主要有,間充質(zhì)干(MSC)細(xì)胞培養(yǎng)和自我更新的生長因子:LIF,bFGF,EGF,HGF,PDGF和Wnt3,MSC分化的生長因子或細(xì)胞因子:BMP-2與TGF-β1。神經(jīng)干細(xì)胞(NSC)研究中的重組蛋白主要有,重組EGF,重組bFGF,和重組VEGF,用于神經(jīng)干細(xì)胞的擴(kuò)增。此外,包括BDNF在內(nèi)的多幾種神經(jīng)營養(yǎng)因子例如BDNF,CNTF,和GDNF也可適用于相關(guān)研究。重組蛋白定制中的注意事項。普欣VEGF重組蛋白
蛋白質(zhì)生物學(xué)不僅包含研究內(nèi)容,也包含了研究所需的工具。即基于蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)及功能的研究,和利用抗體、蛋白及多肽等作為純化、檢測和分析生物系統(tǒng)的工具。有些蛋白分析方法(如western blotting和ELISA等)已作為實驗室的常規(guī)實驗方法使用了多年。其它方法如定量蛋白質(zhì)譜的實驗方法則是相對較新的實驗技術(shù),并且正在快速發(fā)展中。針對重組蛋白純化,賽默飛提供種類豐富的標(biāo)簽選擇,包括6xHis, GST, DYKDDDDK (FLAG), c-myc, 和 HA。還提供一系列磁珠和樹脂等純化產(chǎn)品,磁珠、磁性瓊脂糖、散裝樹脂、離心柱或試劑盒,F(xiàn)PLC層析柱,96孔過濾板等,用于從大腸桿菌、酵母、昆蟲或哺乳動物表達(dá)系統(tǒng)中純化從微克(μg)到低千克(kg)級重組蛋白??蓾M足大多實驗的需求,包括高通量篩選、批量處理、中試和工藝純化等。小鼠BDNF重組蛋白溶解后的重組蛋白如何保存?
近年來,用于重組蛋白表達(dá)和純化的技術(shù)和產(chǎn)品迅速增長。自從親和標(biāo)簽融合技術(shù)出現(xiàn)以來,多種多樣的短肽或蛋白親和標(biāo)簽極大地方便了外源表達(dá)重組蛋白的分離與蛋白質(zhì)復(fù)合體的純化,已成為蛋白質(zhì)研究領(lǐng)域不可或缺的工具。多聚組氨酸標(biāo)簽(His-tag)是目前高通量蛋白純化普遍使用的親和標(biāo)簽,His 標(biāo)簽融合蛋白的固定化金屬離子親和層析(immobilized metal-ion affinity chromatography, IMAC)被作為主要的蛋白純化方法。從重組蛋白的表達(dá)優(yōu)化,到小量誘導(dǎo)純化,再到中試、大規(guī)模生產(chǎn)需要眾多繁瑣、大量的工作??焖佟⒖煽?、高效的自動化分離分析技術(shù)可極大地提高效率,降低時間、人員成本。
對于臨床使用的 GMP 級蛋白,批次間一致性是重要的指標(biāo)之一。其次,要符合 GMP 要求的質(zhì)量管理體系,至少,所選供應(yīng)商應(yīng)通過 ISO 9001: 2008/2015 相關(guān)認(rèn)證的質(zhì)量管理體系(QMS),質(zhì)量管理體系是經(jīng)過認(rèn)證的符合相關(guān)政策的大量的文件和記錄管理系統(tǒng)以及生產(chǎn)過程的可追溯性。而后,要挑選無動物源性的重組蛋白,相較于普通實驗條件生產(chǎn)的重組蛋白,Animal-free 重組蛋白具有如下突出的優(yōu)勢:不會引入瘋牛病病毒或者其它未知病原體;不會引起異種免疫排斥和過敏反應(yīng);不會因微量動物活性成分引發(fā)副作用。國產(chǎn)重組蛋白品牌有哪些?
購買的重組蛋白單位一般是 μg,重組蛋白檢測結(jié)果和用量常用單位是 U/mL 或 IU/mL。U是什么?和IU之間有什么差別?它們又是怎么與 μg 進(jìn)行換算的呢?首先,U 是蛋白活性單位,用于計量蛋白本身的生物學(xué)活性?;钚詥挝恢冈谶m條件下,單位時間內(nèi)產(chǎn)生單位生物學(xué)效應(yīng)的蛋白量。以酶為例,1961年,國際生物化學(xué)學(xué)會酶學(xué)委員會提出采用統(tǒng)一的「國際單位」(IU)來表示酶的活力,在合適條件下,每分鐘內(nèi)催化 1 微摩爾(μmol)底物轉(zhuǎn)化為產(chǎn)物或轉(zhuǎn)化底物中 1 微摩爾的有關(guān)基團(tuán)所需的酶量。即 1 IU=1 U=1 μmol/min。IU 與 μg之間的換算,要引入比活性的概念。比活性是指單位質(zhì)量蛋白的生物學(xué)活性單位,通常用 U/μg 或 μmol/min/μg 表示。以酶為例,在合適條件下,如果 1 μg 酶可以在 1 分鐘內(nèi)催化 1μmol 的底物,那么其比活性就是 1U/μg。比活性是重組蛋白的一項重要指標(biāo)。進(jìn)行比活性項目的檢測,不僅可以反映產(chǎn)品生產(chǎn)工藝的穩(wěn)定情況,而且可以比較不同表達(dá)體系、不同生產(chǎn)廠家生產(chǎn)同一產(chǎn)品的品質(zhì)情況。比活性高說明產(chǎn)品的生產(chǎn)工藝更先進(jìn)、純度更高、質(zhì)量更優(yōu)。嚴(yán)格的質(zhì)量控制系統(tǒng), 才能保證重組蛋白產(chǎn)品的生物活化與一致性。大鼠PDGF重組蛋白定制
重組蛋白包括各類受體、細(xì)胞因子、生長因子、轉(zhuǎn)錄因子、激素、酶、毒性蛋白、病毒抗原等。普欣VEGF重組蛋白
重組蛋白的細(xì)菌表達(dá)系統(tǒng)有各種各樣的載體和宿主菌可供選擇,大部分工程菌的增殖時間短,不僅便于快速評價實驗結(jié)果,而且降低了技術(shù)和設(shè)備無菌要求的嚴(yán)格性。無害大腸桿菌是腸道正常微生物群的一部分與生物體為共生關(guān)系,可以通過產(chǎn)生維生素K 2使機(jī)體受益,并防止病原菌在腸道增殖。大腸桿菌是用于重組蛋白生產(chǎn)的宿主菌,它不僅具有遺傳背景清楚、培養(yǎng)操作簡單、轉(zhuǎn)化和轉(zhuǎn)導(dǎo)效率高、生長繁殖快、成本低廉,可以快速大規(guī)模地生產(chǎn)目的蛋白等優(yōu)點,而且其表達(dá)外源基因產(chǎn)物的水平遠(yuǎn)高于其它基因表達(dá)系統(tǒng),表達(dá)的目的蛋白量甚至能超過細(xì)菌總蛋白量的30%,對小分子蛋白的生產(chǎn)具有極大的優(yōu)勢,因此大腸桿菌是目前應(yīng)用多的重組蛋白質(zhì)表達(dá)系統(tǒng)。普欣VEGF重組蛋白
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