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在科研實驗中,重組蛋白的生物學(xué)活性通常以ED50來表示。在大多數(shù)情況下,研究人員一般基于各類指示性細(xì)胞——如某些原代細(xì)胞或細(xì)胞系——來開展生物分析。常用的生物分析法包括細(xì)胞增殖分析,細(xì)胞趨化性分析,細(xì)胞因子生成分析和細(xì)胞毒性分析。通常以ED50來表示某一細(xì)胞因子的生物活性,該值表示能夠誘發(fā)50%大效應(yīng)的細(xì)胞因子濃度。這一表示效價的方法適用于那些劑量效應(yīng)曲線為S形的細(xì)胞因子。ED50被定義為處于max反應(yīng)50%水平的細(xì)胞因子濃度。這一表示現(xiàn)效價的方法適用于那些劑量效應(yīng)曲線為S形的細(xì)胞因子。將ng/mL單位的ED50活性值(注意:如當(dāng)前為pg/mL,請先換算為ng/mL)轉(zhuǎn)換為(注意:如需當(dāng)前單位為pg/mL,請先換算為ng/mL)單位/毫克(unit/mg)特定活性值的公式為(當(dāng)ED50表示為處于一個范圍區(qū)間時,選擇此范圍的中點值):1 x 10E6/ED50* (ng/mL) = 以單位/毫克(Units/mg蛋白)表示為單位的特定蛋白特定活性。什么是重組蛋白?如何產(chǎn)生?GMP級BMP-2重組蛋白定制
購買的重組蛋白單位一般是 μg,重組蛋白檢測結(jié)果和用量常用單位是 U/mL 或 IU/mL。U是什么?和IU之間有什么差別?它們又是怎么與 μg 進(jìn)行換算的呢?首先,U 是蛋白活性單位,用于計量蛋白本身的生物學(xué)活性。活性單位指在適條件下,單位時間內(nèi)產(chǎn)生單位生物學(xué)效應(yīng)的蛋白量。以酶為例,1961年,國際生物化學(xué)學(xué)會酶學(xué)委員會提出采用統(tǒng)一的「國際單位」(IU)來表示酶的活力,在合適條件下,每分鐘內(nèi)催化 1 微摩爾(μmol)底物轉(zhuǎn)化為產(chǎn)物或轉(zhuǎn)化底物中 1 微摩爾的有關(guān)基團(tuán)所需的酶量。即 1 IU=1 U=1 μmol/min。IU 與 μg之間的換算,要引入比活性的概念。比活性是指單位質(zhì)量蛋白的生物學(xué)活性單位,通常用 U/μg 或 μmol/min/μg 表示。以酶為例,在合適條件下,如果 1 μg 酶可以在 1 分鐘內(nèi)催化 1μmol 的底物,那么其比活性就是 1U/μg。比活性是重組蛋白的一項重要指標(biāo)。進(jìn)行比活性項目的檢測,不僅可以反映產(chǎn)品生產(chǎn)工藝的穩(wěn)定情況,而且可以比較不同表達(dá)體系、不同生產(chǎn)廠家生產(chǎn)同一產(chǎn)品的品質(zhì)情況。比活性高說明產(chǎn)品的生產(chǎn)工藝更先進(jìn)、純度更高、質(zhì)量更優(yōu)。GMP級BMP-2重組蛋白定制進(jìn)口重組蛋白質(zhì)量好,能保證實驗結(jié)果。
單克隆抗體是一類重組蛋白,不論是科研還是醫(yī)療中,都有很大應(yīng)用。突出的表達(dá)重組單克隆抗體的宿主細(xì)胞系是CHO、NS0、SP2/0、HEK293和PER.C6。然而,大多數(shù)文獻(xiàn)都是關(guān)于CHO細(xì)胞的,該細(xì)胞仍然是現(xiàn)今工業(yè)生產(chǎn)重組蛋白藥物的主力,占到了70%(Jayapal等人,2007)。CHO細(xì)胞是于1986年一個被批準(zhǔn)的重組生物制藥的表達(dá)系統(tǒng)(組織型纖溶酶原actin物;t-PA)。從那時起,CHO細(xì)胞就是是重組蛋白表達(dá)的選擇。盡管有其他哺乳動物表達(dá)系統(tǒng)可用,CHO細(xì)胞仍然是優(yōu)化重組蛋白表達(dá)研究的中心。
重組蛋白是由操縱的基因——重組基因編碼的蛋白質(zhì),由特定的重組表達(dá)系統(tǒng)產(chǎn)生(見蛋白表達(dá)系統(tǒng))。重組基因是一種新的基因組合,由一個或多個DNA的片段或基因從不同的分子或其他物種插入。與天然蛋白相比,重組蛋白產(chǎn)量大,生產(chǎn)相對容易。重組蛋白在研究細(xì)胞因子和生長因子、酶和激酶研究以及補體系統(tǒng)功能等生物學(xué)過程中發(fā)揮著重要作用。此外,重組蛋白被認(rèn)為是一種高效的藥物,不會產(chǎn)生脫靶的副作用,比小分子的開發(fā)時間更短(見重組蛋白藥物)。重組蛋白藥物的發(fā)展動態(tài)。
在生物學(xué)研究和蛋白質(zhì)功能研究中,常用的方法之一是重組融合蛋白,簡稱融合蛋白。重組融合蛋白是由兩個或兩個以上原為不同蛋白質(zhì)編碼的基因組合而成的。由融合基因翻譯而來的包含單個或多個多肽的重組融合蛋白獲得了來自每個原蛋白的功能特性。融合蛋白有三個重要的用途:幫助純化克隆基因,報告表達(dá)水平,作為組織化學(xué)標(biāo)簽,使蛋白質(zhì)在細(xì)胞、組織或有機體中的位置可視化。在重組蛋白純化中,重組融合蛋白法通常用于親和層析,在親和層析中,將易于純化的蛋白與研究人員希望研究的蛋白相連接。許多蛋白質(zhì)和多肽已被用作融合標(biāo)簽,包括谷胱甘肽- s -轉(zhuǎn)移酶(gst標(biāo)簽)、麥芽糖結(jié)合蛋白(mbp標(biāo)簽)、多組氨酸(his標(biāo)簽)、人類生長因子、泛素和抗體表位。此外,β-半乳糖苷酶、熒光素酶和綠色熒光蛋白(GFP)通常作為部分蛋白表達(dá)和定位的報告因子。進(jìn)口重組蛋白品牌有哪些?義翹神州bFGF重組蛋白
重組蛋白的應(yīng)用顯著增長,用于重組蛋白表達(dá)和純化的技術(shù)和產(chǎn)品也得以增長。GMP級BMP-2重組蛋白定制
生產(chǎn)重組蛋白的酵母表達(dá)系統(tǒng)兼有原核和高等真核系統(tǒng)的優(yōu)點,培養(yǎng)條件簡單、生長速度快、表達(dá)水平高、操作簡便、成本低廉,蛋白翻譯后能進(jìn)行正確加工、修飾,合理的空間折疊,使得蛋白的可溶性得到提高,是較優(yōu)的重組真核生物蛋白生產(chǎn)制備工具。其中畢赤酵母表達(dá)系統(tǒng)應(yīng)用較多,與其他表達(dá)系統(tǒng)相比,其較強的AOX1(醇氧化酶)、3-磷酸甘油醛脫氫酶、FLD1(醛脫氫酶)等啟動子、蛋白穩(wěn)定持久表達(dá)、表達(dá)效率高、可分泌表達(dá)蛋白、雜蛋白少、翻譯后修飾等優(yōu)點使其成為酵母表達(dá)重組蛋白的優(yōu)先選擇。GMP級BMP-2重組蛋白定制
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