生產(chǎn)重組蛋白的酵母表達系統(tǒng)兼有原核和高等真核系統(tǒng)的優(yōu)點,培養(yǎng)條件簡單、生長速度快、表達水平高、操作簡便、成本低廉,蛋白翻譯后能進行正確加工、修飾,合理的空間折疊,使得蛋白的可溶性得到提高,是較優(yōu)的重組真核生物蛋白生產(chǎn)制備工具。其中畢赤酵母表達系統(tǒng)應用較多,與其他表達系統(tǒng)相比,其較強的AOX1(醇氧化酶)、3-磷酸甘油醛脫氫酶、FLD1(醛脫氫酶)等啟動子、蛋白穩(wěn)定持久表達、表達效率高、可分泌表達蛋白、雜蛋白少、翻譯后修飾等優(yōu)點使其成為酵母表達重組蛋白的優(yōu)先選擇。重組蛋白的應用顯著增長,用于重組蛋白表達和純化的技術和產(chǎn)品也得以增長。進口BMP-2重組蛋白定制
重組蛋白具有極高的經(jīng)濟價值和科研價值,但是在哺乳動物細胞中使用穩(wěn)定轉(zhuǎn)染方法將會消耗大量的時間,而傳統(tǒng)的瞬時轉(zhuǎn)染方法,在產(chǎn)量上也難以令人滿意。所以重組蛋白大規(guī)模的瞬時表達技術是近年來的一個研究熱點,已有報道能放大到 100L反應器中生產(chǎn)重組蛋白,產(chǎn)量(分泌型蛋白)可達 1-10mg/L。不過該方法技術條件要求高,如質(zhì)粒的純度、轉(zhuǎn)染的效率等。哺乳動物細胞表達系統(tǒng)中,重組蛋白的表達水平與許多 因素相關,如轉(zhuǎn)錄和翻譯調(diào)控元件、RNA剪接過程、mRNA穩(wěn) 定性、基因在染色體上的整合位點、重組蛋白對細胞的毒性作 用以及宿主細胞的遺傳特性等。進口BMP-6重組蛋白高純度、高活性、低內(nèi)毒素,高批次間一致性是選購重組蛋白的重點。
為了保證重組蛋白良好的穩(wěn)定性和生物學活性,通常加8%(質(zhì)量比體積)的海藻糖和甘露醇作為凍干保護劑。海藻糖是一種以兩個葡萄糖分子通過 α,α,1,1-糖苷鍵連接的二糖。海藻糖是一種非還原糖,不與氨基酸或蛋白質(zhì)發(fā)生反應。它本身不存在于哺乳動物體內(nèi),但哺乳動物體內(nèi)卻存在分解海藻糖的酶,且海藻糖作為一種小分子的半抗原,哺乳動物對其免疫反應性很低。這使得海藻糖對live實驗或異種移植等實驗的干擾極小。海藻糖不僅可以防止蛋白在脫水狀態(tài)下改變其結(jié)構(gòu),更能在高溫、低溫、高滲透壓的條件下保留蛋白的生物學活性。目前,海藻糖以其高效的蛋白保護性能與相對低廉的價格漸漸代替 BSA,是免疫實驗產(chǎn)品和蛋白類產(chǎn)品添加劑的新寵。
哺乳動物蛋白表達系統(tǒng)在生產(chǎn)重組蛋白中的應用中,優(yōu)勢明顯。具體表現(xiàn)為以下方面,能實現(xiàn)翻譯后修飾及正確的蛋白折疊復性:哺乳動物為真核細胞,細胞器可以對蛋白正確折疊加工。表達水平高:載體可在哺乳動物細胞中高表達重組蛋白,表達量可高達1-3g/L。蛋白表達高效穩(wěn)定:高效啟動子控制,穩(wěn)定表達,并可以選擇多種表達,如瞬時表達、穩(wěn)定細胞株表達、營養(yǎng)缺陷型細胞株表達(DHFR/GS)、大規(guī)模懸浮細胞表達等。適合大規(guī)模蛋白表達:常用的哺乳動物表達宿主細胞(HEK293和CHO),使用懸浮細胞培養(yǎng),可以在一個月內(nèi)可產(chǎn)生數(shù)克級蛋白。45.蘇州近岸蛋白專注生物醫(yī)藥領域中的重組蛋白質(zhì)。
常見的重組蛋白藥物:生長因子viii,幫助血友病患者形成血塊;非格司汀和sargramostim(造血骨髓因子),促進放療或移植后白細胞計數(shù);胰島素,用于糖尿?。籌GF1,用于某些生長問題;干擾素(阿爾法),用于乙型和丙型肝炎、生殖器疣、某些白血病和其他疾??;干擾素(β),用于多發(fā)性硬化癥;干擾素(伽瑪),用于慢性肉芽腫??;白細胞介素-2,殺死病變細胞;生長因子,用于生長因子缺乏癥;組織纖溶酶原actin劑(t-PA),溶解血凝塊,預防心臟病發(fā)作,減輕其嚴重程度。重組蛋白干粉如何重溶?進口BMP-2重組蛋白定制
重組蛋白,可用于細胞生長和分化、細胞信號轉(zhuǎn)導以及涉及疾病發(fā)作和進展的研究。進口BMP-2重組蛋白定制
功能性ELISA是一類以ELISA形式進行的、基于體外配體結(jié)合的分析法。該方法用于檢測目的蛋白與其天然結(jié)合物配體之間(如生長因子與其受體)的結(jié)合能力。如果在該檢測中生長因子能夠與其天然受體相結(jié)合,則該生長因子很可能是具有功能的。ED50為OD值讀取過程中能夠提供50%信號強度的生長因子濃度(在包被了受體的平板上)。重組蛋白使用了基于細胞的檢測分析或功能性ELISA分析對其生物學活性進行了檢測,產(chǎn)品頁上會提供相應的ED50值。也有些重組蛋白沒有提供生物活性數(shù)據(jù)。在大多數(shù)情況下,這表明沒有進行生物活性測試,但它并不一定意味著蛋白是沒有活性的。在沒有生物活性數(shù)據(jù)的情況下,這些蛋白可用做蛋白質(zhì)分子量標準,蛋白免疫印記陽性對照(如果是全長的重組蛋白)或免疫原。其它可能的用途是配體結(jié)合試驗或ELISA的標準品。進口BMP-2重組蛋白定制
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