重組蛋白的細菌表達系統(tǒng)有各種各樣的載體和宿主菌可供選擇,大部分工程菌的增殖時間短,不僅便于快速評價實驗結(jié)果,而且降低了技術(shù)和設備無菌要求的嚴格性。無害大腸桿菌是腸道正常微生物群的一部分與生物體為共生關(guān)系,可以通過產(chǎn)生維生素K 2使機體受益,并防止病原菌在腸道增殖。大腸桿菌是用于重組蛋白生產(chǎn)的宿主菌,它不僅具有遺傳背景清楚、培養(yǎng)操作簡單、轉(zhuǎn)化和轉(zhuǎn)導效率高、生長繁殖快、成本低廉,可以快速大規(guī)模地生產(chǎn)目的蛋白等優(yōu)點,而且其表達外源基因產(chǎn)物的水平遠高于其它基因表達系統(tǒng),表達的目的蛋白量甚至能超過細菌總蛋白量的30%,對小分子蛋白的生產(chǎn)具有極大的優(yōu)勢,因此大腸桿菌是目前應用多的重組蛋白質(zhì)表達系統(tǒng)。普欣生物是國內(nèi)外多家著名生物試劑公司和臨床診斷公司的重組蛋白OEM供應商。小鼠IL-7重組蛋白定制
北京義翹神州科技股份有限公司作為國家高新技術(shù)企業(yè),主要從事生物試劑研發(fā)、生產(chǎn)、銷售并提供技術(shù)服務的生物科技公司,主要業(yè)務包括重組蛋白、抗體、基因和培養(yǎng)基等產(chǎn)品,以及重組蛋白、抗體的開發(fā)和生物分析檢測等服務,同時也為制藥公司或者生物技術(shù)公司提供單克隆抗體候選藥物的臨床前規(guī)模生產(chǎn)服務。義翹神州擁有多項先進的技術(shù)以及從研發(fā)生產(chǎn)到放大生產(chǎn)的技術(shù)平臺,為重組蛋白或者抗體試劑的高通量、高效率研發(fā)生產(chǎn)提供保障,旨在為全球制藥企業(yè)和生命科學研究機構(gòu)提供高質(zhì)量的生物試劑產(chǎn)品和高水平的技術(shù)服務。人TNF-alpha重組蛋白R&D Systems是全球重組蛋白生產(chǎn)的前列。
重組蛋白的許多生產(chǎn)廠家都是不限制產(chǎn)品使用期限的,不規(guī)定重組蛋白和抗體產(chǎn)品的失效期或生產(chǎn)日期。在適當?shù)拇鎯l件下,重組蛋白和抗體可以保持活性穩(wěn)定多年。這些條件包括以凍干粉形式存儲蛋白,以大于 0.1 mg/mL 的蛋白濃度存儲冷凍的產(chǎn)品(-20 °C 或 -80 °C)以及限制凍融循環(huán)的次數(shù)。但是,廠家常規(guī)質(zhì)量控制測試可確保所有產(chǎn)品在銷售時都具有可接受的生物活性。在實驗室的正常條件下使用時,我們保證產(chǎn)品達到或超過我們提供的技術(shù)參數(shù)。由于無法控制終端用戶的存儲條件,通常,保質(zhì)期為自購買之日起 6-12 個月。若有特殊要求,請參見各產(chǎn)品說明書。
重組蛋白含與不含 CF 有什么區(qū)別?CF,是 Carrier Free 的意思。一般來說,為了對重組蛋白的結(jié)構(gòu)及活性進行保護,生產(chǎn)廠家會在蛋白產(chǎn)品中添加牛血清白蛋白(BSA)作為載體蛋白。但考慮到 BSA 會對某些實驗造成影響,廠家又研發(fā)出不含載體蛋白(BSA)的產(chǎn)品,即 Carrier Free 蛋白??蛻羧绾芜x擇呢?在用途上,一般情況下,我們建議使用含有 BSA 的重組蛋白用于細胞或組織培養(yǎng),或作為 ELISA 標準品。相對而言,當 BSA 可能會干擾實驗時,比如體內(nèi)實驗、蛋白標記等,則推薦使用 CF 蛋白。另外,如果實驗平臺有特殊要求,也應根據(jù)要求選擇不含 BSA 的蛋白。溶解后的重組蛋白如何保存?
功能性ELISA是一類以ELISA形式進行的、基于體外配體結(jié)合的分析法。該方法用于檢測目的蛋白與其天然結(jié)合物配體之間(如生長因子與其受體)的結(jié)合能力。如果在該檢測中生長因子能夠與其天然受體相結(jié)合,則該生長因子很可能是具有功能的。ED50為OD值讀取過程中能夠提供50%信號強度的生長因子濃度(在包被了受體的平板上)。重組蛋白使用了基于細胞的檢測分析或功能性ELISA分析對其生物學活性進行了檢測,產(chǎn)品頁上會提供相應的ED50值。也有些重組蛋白沒有提供生物活性數(shù)據(jù)。在大多數(shù)情況下,這表明沒有進行生物活性測試,但它并不一定意味著蛋白是沒有活性的。在沒有生物活性數(shù)據(jù)的情況下,這些蛋白可用做蛋白質(zhì)分子量標準,蛋白免疫印記陽性對照(如果是全長的重組蛋白)或免疫原。其它可能的用途是配體結(jié)合試驗或ELISA的標準品。重組蛋白在多種細胞培養(yǎng)中的應用。小鼠BMP-1重組蛋白
中國的重組蛋白藥物市場,前景廣闊。小鼠IL-7重組蛋白定制
重組蛋白的生化和生物學特性對于選擇表達策略來說是必須要考慮的,可以通過它們對表達結(jié)果和產(chǎn)物的可溶性做出初步預測。通過分析一級序列可以整合一組屬性用以預測二級結(jié)構(gòu)、生物學定位 (細胞膜、細胞質(zhì)、周質(zhì)腔或胞外)、家族歸類 (折疊和結(jié)構(gòu)域) 及推斷生化性質(zhì) (等電點、無序區(qū)域、配基)。目標蛋白質(zhì)的一些特征,如極可能存在的跨膜螺旋,可能要求必須使用為表達膜蛋白設計的系統(tǒng),或需要使用克隆單個結(jié)構(gòu)域的策略以表達蛋白質(zhì)的可溶部分。使用目標蛋白質(zhì)的特征來指導表達宿主的選擇和載體的構(gòu)建有助于獲得成熟的、定位適當?shù)牡鞍踪|(zhì)??梢允褂媚繕说鞍踪|(zhì)或同源蛋白質(zhì)的實驗數(shù)據(jù)和歷史數(shù)據(jù)對序列信息加以補充,從而有助于表達系統(tǒng)的進一步優(yōu)化。例如,已知某蛋白質(zhì)需要某種輔基以保持正確的功目旨,那就必須選擇特定的宿主以確保獲得具有完整功能的表達產(chǎn)物。小鼠IL-7重組蛋白定制
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