單克隆抗體是一類重組蛋白,不論是科研還是醫(yī)療中,都有很大應(yīng)用。突出的表達重組單克隆抗體的宿主細胞系是CHO、NS0、SP2/0、HEK293和PER.C6。然而,大多數(shù)文獻都是關(guān)于CHO細胞的,該細胞仍然是現(xiàn)今工業(yè)生產(chǎn)重組蛋白藥物的主力,占到了70%(Jayapal等人,2007)。CHO細胞是于1986年一個被批準的重組生物制藥的表達系統(tǒng)(組織型纖溶酶原actin物;t-PA)。從那時起,CHO細胞就是是重組蛋白表達的選擇。盡管有其他哺乳動物表達系統(tǒng)可用,CHO細胞仍然是優(yōu)化重組蛋白表達研究的中心。重組蛋白的保存和運輸條件。R&DSystemsIL-2重組蛋白
為了保證重組蛋白良好的穩(wěn)定性和生物學(xué)活性,通常加8%(質(zhì)量比體積)的海藻糖和甘露醇作為凍干保護劑。海藻糖是一種以兩個葡萄糖分子通過 α,α,1,1-糖苷鍵連接的二糖。海藻糖是一種非還原糖,不與氨基酸或蛋白質(zhì)發(fā)生反應(yīng)。它本身不存在于哺乳動物體內(nèi),但哺乳動物體內(nèi)卻存在分解海藻糖的酶,且海藻糖作為一種小分子的半抗原,哺乳動物對其免疫反應(yīng)性很低。這使得海藻糖對live實驗或異種移植等實驗的干擾極小。海藻糖不僅可以防止蛋白在脫水狀態(tài)下改變其結(jié)構(gòu),更能在高溫、低溫、高滲透壓的條件下保留蛋白的生物學(xué)活性。目前,海藻糖以其高效的蛋白保護性能與相對低廉的價格漸漸代替 BSA,是免疫實驗產(chǎn)品和蛋白類產(chǎn)品添加劑的新寵。GMP級CXCL1重組蛋白重組蛋白藥物主要有哪些?
重組蛋白的活性低是讓科研工作者十分頭疼的難題,買來的重組蛋白活性低怎么辦?除了重組蛋白自身存在質(zhì)量問題外,它可能只是需要一個“搭檔”。在某些重組蛋白在使用時,需要加入交聯(lián)抗體,進行交聯(lián)(Cross-linking)反應(yīng)后才能表現(xiàn)出高活性,發(fā)揮出功能。其原理是,交聯(lián)反應(yīng)能夠?qū)⒅亟M蛋白的受體相互拉近,因為每個標簽抗體含有兩個抗原結(jié)合臂,從而能夠使兩個含標簽蛋白 - 受體復(fù)合物拉近,進而指數(shù)級放大下游信號,提升刺激的效率(表現(xiàn)為更低的 ED50 值)。眾所周知,在同一實驗中 ED50 越低表明著活性越高。
在科研實驗中,重組蛋白的生物學(xué)活性通常以ED50來表示。在大多數(shù)情況下,研究人員一般基于各類指示性細胞——如某些原代細胞或細胞系——來開展生物分析。常用的生物分析法包括細胞增殖分析,細胞趨化性分析,細胞因子生成分析和細胞毒性分析。通常以ED50來表示某一細胞因子的生物活性,該值表示能夠誘發(fā)50%大效應(yīng)的細胞因子濃度。這一表示效價的方法適用于那些劑量效應(yīng)曲線為S形的細胞因子。ED50被定義為處于max反應(yīng)50%水平的細胞因子濃度。這一表示現(xiàn)效價的方法適用于那些劑量效應(yīng)曲線為S形的細胞因子。將ng/mL單位的ED50活性值(注意:如當前為pg/mL,請先換算為ng/mL)轉(zhuǎn)換為(注意:如需當前單位為pg/mL,請先換算為ng/mL)單位/毫克(unit/mg)特定活性值的公式為(當ED50表示為處于一個范圍區(qū)間時,選擇此范圍的中點值):1 x 10E6/ED50* (ng/mL) = 以單位/毫克(Units/mg蛋白)表示為單位的特定蛋白特定活性。國產(chǎn)重組蛋白品牌有哪些?
在細胞培養(yǎng)過程中常用的生長因子,細胞因子和趨化因子,許多科學(xué)家傾向使用進口的重組蛋白,如R&D Systems,PeproTech,ProSpec,Gibco等。這就導(dǎo)致可選擇范圍變得很窄。想要增加重組蛋白可選種類,建議選擇國產(chǎn)重組蛋白。如進口品牌賽默飛選擇與國產(chǎn)品牌義翹神州(Sino Biologcical)合作來拓展他們的重組蛋白套裝范圍,為用戶提供1500種左右的重組蛋白(Thermo Fisher Scientific與Sino Biological聯(lián)合品牌)。Sino重組蛋白主要有四大優(yōu)勢:(1)包括粘附蛋白,細胞因子,趨化因子,生長因子,流感蛋白,蛋白酶,磷酸酶,轉(zhuǎn)錄因子,通道蛋白和受體在內(nèi)的多種選擇;(2)具有競爭力的價格;(3)為每一種蛋白產(chǎn)品提供更多種的包裝尺寸規(guī)格(4)大多數(shù)由哺乳動物細胞所表達,90%由人體細胞系表達,這樣有助于就可確保蛋白產(chǎn)品具擁有正確的哺乳動物翻譯后修飾。重組蛋白與重組融合蛋白的區(qū)別。BMP-5重組蛋白廠家
重組蛋白無論是保存還是運輸,請避免反復(fù)凍融。R&DSystemsIL-2重組蛋白
重組蛋白的細菌表達系統(tǒng)有各種各樣的載體和宿主菌可供選擇,大部分工程菌的增殖時間短,不僅便于快速評價實驗結(jié)果,而且降低了技術(shù)和設(shè)備無菌要求的嚴格性。無害大腸桿菌是腸道正常微生物群的一部分與生物體為共生關(guān)系,可以通過產(chǎn)生維生素K 2使機體受益,并防止病原菌在腸道增殖。大腸桿菌是用于重組蛋白生產(chǎn)的宿主菌,它不僅具有遺傳背景清楚、培養(yǎng)操作簡單、轉(zhuǎn)化和轉(zhuǎn)導(dǎo)效率高、生長繁殖快、成本低廉,可以快速大規(guī)模地生產(chǎn)目的蛋白等優(yōu)點,而且其表達外源基因產(chǎn)物的水平遠高于其它基因表達系統(tǒng),表達的目的蛋白量甚至能超過細菌總蛋白量的30%,對小分子蛋白的生產(chǎn)具有極大的優(yōu)勢,因此大腸桿菌是目前應(yīng)用多的重組蛋白質(zhì)表達系統(tǒng)。R&DSystemsIL-2重組蛋白
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