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CASA,即計(jì)算機(jī)輔助精子分析,是一種利用技術(shù)手段對(duì)精子活力、濃度和形態(tài)進(jìn)行精確評(píng)估的方法。WHO第五版指南強(qiáng)調(diào),相比人工檢測(cè),CASA提供更準(zhǔn)確的數(shù)據(jù)和精子動(dòng)力學(xué)參數(shù),如前向運(yùn)動(dòng)和超活化運(yùn)動(dòng),以及獲能精子特征參數(shù)。研究顯示,CASA檢測(cè)的精子參數(shù)與體內(nèi)外受精成功率和受孕時(shí)間有***關(guān)聯(lián)。使用CASA分析儀,通常通過(guò)相差顯微鏡識(shí)別活動(dòng)精子,適用于精子動(dòng)力學(xué)分析。但要確??煽拷Y(jié)果,操作者需注意標(biāo)本制備、幀頻率、精子濃度等因素。每份樣本至少需要分析200個(gè)活動(dòng)精子的運(yùn)動(dòng)軌跡,更多精子樣本有助于分類和變異性的分析。國(guó)內(nèi)已有自主研發(fā)的精子分析儀,通常進(jìn)行兩次分析,每次至少200個(gè)精子,結(jié)果通過(guò)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析得出。CASA在評(píng)估精子濃度時(shí),需精確測(cè)量精子體積,確保**完全液化并充分混勻。計(jì)數(shù)板的精確性和計(jì)數(shù)一致性是關(guān)鍵,每次檢測(cè)需滿足5個(gè)視野和200條以上精子的比較低要求。對(duì)于高濃度**,可能需要稀釋以減少誤差。形態(tài)分析方面,CASA能夠定量評(píng)估精子頭部、中段和主段,尾部缺陷可通過(guò)活力評(píng)估。對(duì)于碎片過(guò)多或黏稠的**,可能需要洗滌以減少背景干擾。CASA中涉及一系列術(shù)語(yǔ),如VCL(曲線速度)、VSL(直線速度)等,它們反映了精子運(yùn)動(dòng)的不同特性。不同品牌CASA分析的結(jié)果差異較大,因此,更高效精確的精液質(zhì)量檢測(cè)系統(tǒng)對(duì)促進(jìn)男科學(xué)發(fā)展具有重要的意義。上海計(jì)數(shù)精子分析VCL
美國(guó)Hamilton Thorne的TOX IVOS精子分析儀已經(jīng)被FDA和國(guó)內(nèi)外毒理學(xué)實(shí)驗(yàn)室所使用。本試驗(yàn)研究目的對(duì)精子分析儀和血細(xì)胞計(jì)數(shù)板在大鼠附睪精子計(jì)數(shù)結(jié)果的比較驗(yàn)證。方法選取三批次雄性SD大鼠60只,每批20只,對(duì)三批次雄鼠的精子計(jì)數(shù)進(jìn)行比較。健康雄鼠通過(guò)戊巴比妥鈉麻醉實(shí)施安樂(lè)死后,取左側(cè)附睪尾稱重,將附睪尾部放入37℃預(yù)熱的含有M199培養(yǎng)液平皿中,剪碎附睪尾,放入培養(yǎng)箱中37℃孵育5 min,然后吸取1份精子懸液,用M199培養(yǎng)液進(jìn)行一定倍數(shù)的稀釋,混勻后,取1滴稀釋液,滴入精子分析儀**載玻片上,將載玻片放入TOX IVOS精子分析儀載物臺(tái),進(jìn)行精子計(jì)數(shù),同時(shí)吸取稀釋后的精子懸液滴入血細(xì)胞計(jì)數(shù)板內(nèi),通過(guò)光學(xué)顯微鏡進(jìn)行計(jì)數(shù),比較兩種計(jì)數(shù)方法的差異性。結(jié)果***批次雄鼠精子分析儀和血細(xì)胞計(jì)數(shù)器的精子計(jì)數(shù)結(jié)果分別為70.2±33.2,61.0±27.1;第二批次雄鼠精子分析儀和血細(xì)胞計(jì)數(shù)器的精子計(jì)數(shù)結(jié)果分別為128.8±116.8,114.6±86.9;第三批次雄鼠精子分析儀和血細(xì)胞計(jì)數(shù)器的精子計(jì)數(shù)結(jié)果分別為165.9±91.7,140.0±59.6。三個(gè)批次的精子分析儀和血細(xì)胞計(jì)數(shù)板的精子計(jì)數(shù)結(jié)果無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。結(jié)論精子分析儀是一種方便、可靠、快速、高效的研究工具,在生殖毒理學(xué)研究中具有重要的應(yīng)用價(jià)值。香港水生動(dòng)物精子分析重復(fù)性高IVOS具有高分辨率和高靈敏度的特點(diǎn),能夠捕捉到微小的細(xì)節(jié)和變化,進(jìn)一步提高了精子分析的準(zhǔn)確性。
全自動(dòng)的IVOS可以提供**快的分析速度以及高質(zhì)量數(shù)據(jù)輸出。可以使用一次性的和可重復(fù)的載玻片,深度從10um~100um。每次分析捕捉100幀圖像,掃描速度每秒60幀。**的軟件升級(jí)。
IVOS能提供:精確、客觀、具有重復(fù)性的結(jié)果。高速分析,在60Hz下半秒掃描30幀,為實(shí)驗(yàn)室節(jié)省成本。 [1]主要功能IVOS自動(dòng)精子活動(dòng)、濃度、形態(tài)分析系統(tǒng)。Hamilton Thorne的CASA系統(tǒng)適用于臨床、研究實(shí)驗(yàn)室、動(dòng)物繁殖基地、水產(chǎn)業(yè)、制藥公司等各種領(lǐng)域,成為了精液分析業(yè)的金標(biāo)準(zhǔn)。可以應(yīng)用于包括人類、公牛、馬、野豬、狗、兔子、老鼠、綿羊、山羊、魚以及各種瀕危動(dòng)物。在TOX IVOS上有**的大鼠精液分析軟件。
精子分析儀工作原理
以灰度識(shí)別CASA為例,采用高分辨率的攝影技術(shù)與顯微鏡結(jié)合,**標(biāo)本液化后吸入計(jì)數(shù),通過(guò)顯微鏡放大后,用圖像采集系統(tǒng)獲取精子動(dòng)、靜態(tài)圖像后輸入計(jì)算機(jī)。根據(jù)設(shè)定的精子大小和灰度、精子運(yùn)動(dòng)移位及運(yùn)動(dòng)參數(shù),對(duì)采集圖像進(jìn)行精子密度、活動(dòng)力、活動(dòng)率、運(yùn)動(dòng)特征等幾十項(xiàng)檢驗(yàn)項(xiàng)目動(dòng)態(tài)分析,由計(jì)算機(jī)處理后,打印出“**分析檢查報(bào)告以及精子動(dòng)態(tài)特征分布圖”。一次能對(duì)1000個(gè)精子進(jìn)行動(dòng)態(tài)檢測(cè)分析,2-3分鐘即可完成檢測(cè) [1]。
優(yōu)點(diǎn):
操作簡(jiǎn)便,用量少,檢測(cè)速度快,重復(fù)性優(yōu)于人工檢測(cè),并且能夠快速、準(zhǔn)確的測(cè)定精子密度、活力、精子分級(jí)等,還可提供精子運(yùn)動(dòng)狀態(tài)的多種參數(shù)等。
缺點(diǎn):
影響分析結(jié)果的因素較多,除**本身性質(zhì)所含的固有誤差外,不同的精子計(jì)數(shù)池的相對(duì)準(zhǔn)確性和精確性可產(chǎn)生明顯不一致的效果。 精子分析儀參數(shù),平均路徑速率(VAP)?:精子頭沿其平均路徑移動(dòng)時(shí)的時(shí)均速率。
五、精子活動(dòng)力檢測(cè)[正常參考值]**后30-60分鐘活動(dòng)力為Ⅲ級(jí)以上的精子>0.80:**后120分鐘內(nèi)活動(dòng)力為Ⅲ級(jí)以上的精子>0.60;**120分鐘后0.25-0.60的精子仍能活動(dòng)。[臨床意義]活動(dòng)不良或不活動(dòng)的精子增多,是導(dǎo)致不育的重要原因之一。常見(jiàn)于精索靜脈曲張、泌尿生殖系的非特異性***如大腸桿菌***,某些代謝藥、抗瘧藥、雌***、氧化氮芥等,也可使精子活動(dòng)力下降。六、精子計(jì)數(shù)[正常參考值](100-150)×109/L或一次排精總數(shù)為(4-6)×108。[臨床意義]1.精子計(jì)數(shù)小于20×109/L或一次排精總數(shù)少于1×108為不正常,見(jiàn)于精索靜脈曲張、鉛金屬等有害工業(yè)污染、大劑量放射線及某些藥物影響。2.精液多次未查到精子為無(wú)精癥,主要見(jiàn)于睪丸生精功能低下,先天性輸精管、精囊缺陷或輸精管阻塞。輸精管結(jié)扎術(shù)2個(gè)月后精液中應(yīng)無(wú)精子,否則說(shuō)明手術(shù)失敗。3.老年人從50歲開(kāi)始精子數(shù)減少以至逐步消失。該設(shè)備還支持多種分析模式,包括精子濃度、活力、形態(tài)和DNA損傷等參數(shù)的測(cè)量,滿足用戶的多樣化需求。廣州快速運(yùn)動(dòng)精子分析WOB
精子分析系統(tǒng)較傳統(tǒng)的分析法比較,具有速度快、量比性好、準(zhǔn)確性高、為臨床和科研提供客觀的檢測(cè)依據(jù)。上海計(jì)數(shù)精子分析VCL
擴(kuò)展性檢查:可以在某些情況下由實(shí)驗(yàn)室選擇或根據(jù)臨床醫(yī)生的特殊要求而使用的項(xiàng)目。手冊(cè)增加了精子DNA損傷、遺傳學(xué)和炎癥細(xì)胞等相關(guān)檢查項(xiàng)目。提出了基因突變是導(dǎo)致不育和精液常規(guī)檢查異常的原因。新增了精液相關(guān)細(xì)胞因子、趨化因子等檢測(cè)的方法、試劑、檢測(cè)步驟等內(nèi)容。在精液參數(shù)異常的男性中普遍存在精子DNA損傷,并且已有報(bào)道指出其與精液參數(shù)正常男性的不育有關(guān)。由于與精液質(zhì)量相關(guān),精子DNA損傷檢測(cè)是男性不育檢查中的重要補(bǔ)充內(nèi)容,已成為男科學(xué)基礎(chǔ)和臨床中論述**多、**有前景的精子損傷分子標(biāo)志物之一。本版手冊(cè)增加了大量篇幅對(duì)其原理和檢測(cè)方法進(jìn)行了描述。新增了基因和基因組測(cè)序內(nèi)容。臨床上,越來(lái)越多的人意識(shí)到染色體異常[數(shù)量異常、結(jié)構(gòu)異常(包括微缺失和微重復(fù))]和基因突變是導(dǎo)致各種男性不育癥的基礎(chǔ)病因,而這正是在精液分析中觀察到的許多異常的原因。盡管基因和基因組測(cè)序常規(guī)在醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行,但一些男科實(shí)驗(yàn)室也在做同樣的檢測(cè)。為明確生殖道炎癥對(duì)于男性不育的影響,泌尿男科醫(yī)生可能提出對(duì)精液中的趨化因子和細(xì)胞因子進(jìn)行評(píng)估。本手冊(cè)納入了精液中白細(xì)胞介素檢測(cè)方法。上海計(jì)數(shù)精子分析VCL