方法:使用兩種已知濃度的質(zhì)控乳膠珠溶液,1份濃度為(35±5)×106/ml,另1份濃度為(18.0±2.5)×106/ml,評價(jià)4種計(jì)數(shù)方法的準(zhǔn)確性和精確性,并比較4種方法計(jì)數(shù)精液的結(jié)果。結(jié)果:計(jì)數(shù)乳膠珠時(shí),CellVU計(jì)數(shù)池的結(jié)果**接近已知濃度,分別為(39.70±4.76)、(19.09±2.02)×106/ml,變異系數(shù)(CV)值分別為12.80%和10.58%;血細(xì)胞計(jì)數(shù)池和Makler計(jì)數(shù)池結(jié)果均高于已知濃度,前者為(44.84±4.86)×106/ml、(21.04±1.87)×106/ml,CV值分別為10.81%和8.89%,后者為(52.36±7.78)×106/ml、(24.54±3.67)×106/ml,CV值分別為14.86%和14.96%;CASA系統(tǒng)結(jié)果低于已知濃度,為(28.53±2.06)、(14.62±0.95)×106/ml,但CV值比較低,分別為7.22%和6.50%。計(jì)數(shù)精液時(shí),CellVU計(jì)數(shù)池與CASA系統(tǒng)結(jié)果差異無***性(P=0.71),分別為(45.28±34.52)、(41.96±31.93)×106/ml,血細(xì)胞計(jì)數(shù)池和Makler計(jì)數(shù)池結(jié)果差異無***性(P=0.14),分別為(76.98±59.90)、(63.89±53.84)×106/ml,CellVU計(jì)數(shù)池、CASA系統(tǒng)與血細(xì)胞計(jì)數(shù)池、Makler計(jì)數(shù)池結(jié)果間差異***(P<0.05或P<0.01)。結(jié)論:計(jì)數(shù)精液時(shí),CASA系統(tǒng)與CellVU計(jì)數(shù)結(jié)果差異無***性。各實(shí)驗(yàn)室可選擇合適的手工或CASA計(jì)數(shù)方法。計(jì)算機(jī)輔助精子分析（computer- assisted sperm analysis）是2014年公布的泌尿外科學(xué)名詞。美國瀕危物種精子分析DAP

CASA可將每個(gè)精子的活力按以下分級：（1）前向運(yùn)動型（PR）：精子運(yùn)動活躍、線性運(yùn)動或者在較大的范圍內(nèi)運(yùn)動。（2）非前向運(yùn)動型（NP）：所有其他非前向運(yùn)動的形式，如精子在較小的范圍內(nèi)運(yùn)動，精子頭部輕微移位或只觀察到尾部擺動。（3）完全不動型（IM）：精子完全不動。CASA系統(tǒng)檢測的這些參數(shù)有一套標(biāo)準(zhǔn)的術(shù)語。（1）VCL=曲線速度（mm/s）。精子頭沿其實(shí)際的曲線，即在顯微鏡下見到的二維方式運(yùn)動軌跡的平均速度。檢測細(xì)胞活力。（2）VSL=直線速度（mm/s）。根據(jù)精子頭在開始檢測時(shí)的位置與***所處位置之間的直線運(yùn)動的時(shí)間平均速度。（3）VAP=平均路徑速度（mm/s）。精子頭沿其空間平均軌跡移動的時(shí)間平均速度。（4）ALH=精子頭側(cè)擺幅度（mm）。精子頭沿其空間平均軌跡側(cè)擺的幅度。以側(cè)擺的最大值或平均數(shù)值表示。（5）LIN=直線性。曲線軌跡的直線性。即VSL/VCL。（6）WOB=擺動性。精子頭沿其實(shí)際軌跡的空間平均路徑擺動的尺度。即VAP/VCL。（7）STR=前向性。空間平均路徑的直線性。即VSL/VAP。（8）BCF=鞭打頻率（Hz）。精子曲線軌跡越過其平均路徑軌跡的時(shí)間平均速率。（9）MAD=平均移動角度（度）。精子頭沿其曲線軌跡瞬間轉(zhuǎn)折角度的時(shí)間平均***值。美國計(jì)算機(jī)輔助精子分析高準(zhǔn)確率全自動精子分析儀極大提高臨床檢驗(yàn)水平，廣泛應(yīng)用于泌尿科，男性科以及計(jì)劃生育、優(yōu)生優(yōu)育研究等。

精子分析儀工作原理以灰度識別CASA為例，采用高分辨率的攝影技術(shù)與顯微鏡結(jié)合，**標(biāo)本液化后吸入計(jì)數(shù)，通過顯微鏡放大后，用圖像采集系統(tǒng)獲取精子動、靜態(tài)圖像后輸入計(jì)算機(jī)。根據(jù)設(shè)定的精子大小和灰度、精子運(yùn)動移位及運(yùn)動參數(shù)，對采集圖像進(jìn)行精子密度、活動力、活動率、運(yùn)動特征等幾十項(xiàng)檢驗(yàn)項(xiàng)目動態(tài)分析，由計(jì)算機(jī)處理后，打印出“**分析檢查報(bào)告以及精子動態(tài)特征分布圖”。一次能對1000個(gè)精子進(jìn)行動態(tài)檢測分析，2-3分鐘即可完成檢測[1]。優(yōu)點(diǎn)：操作簡便，用量少，檢測速度快，重復(fù)性優(yōu)于人工檢測，并且能夠快速、準(zhǔn)確的測定精子密度、活力、精子分級等，還可提供精子運(yùn)動狀態(tài)的多種參數(shù)等。缺點(diǎn)：影響分析結(jié)果的因素較多，除**本身性質(zhì)所含的固有誤差外，不同的精子計(jì)數(shù)池的相對準(zhǔn)確性和精確性可產(chǎn)生明顯不一致的效果。

二、生化及免疫學(xué)檢驗(yàn)：5、精漿肉堿測定【正常參考值】濃度為239.56±l05.59umol/L。【臨床意義】精漿肉堿測定精漿中的肉堿主要由附睪分泌，其次是精囊。精漿中肉堿分為游離肉堿和乙酰肉堿二種，附睪中含高濃度的肉堿，主要與精子在附睪成熟時(shí)所需的能量來源有關(guān)?，F(xiàn)認(rèn)為精漿肉堿含量和果糖含量的變化，常反映附睪、精囊的功能。精漿肉堿及果糖含量正常，表明附睪、精囊功能正常。當(dāng)肉堿含量高于正常的50%，而果糖含量降低，則提示精囊功能障礙，附睪功能正常；精漿肉堿約為正常含量的50%左右，果糖含量正常，說明附睪功能障礙，精囊功能正常；而肉堿急劇下降，果糖含量亦減少，表示精囊、附睪功能均發(fā)生障礙。6、抗精子抗體(AsAb)測定【正常參考值】陰性?！九R床意義】AsAb檢測對不育原因檢查有重要臨床意義。存在于血清或生殖道分泌液中的AsAb，可抑制精子的活動，干擾精子的運(yùn)行，阻礙精子穿透及精卵結(jié)合，使受精發(fā)生障礙。即使已經(jīng)受精，也可能影響發(fā)育中的胚胎，造成免疫性流產(chǎn)。不育夫婦AsAb陽性者占25%-30%，當(dāng)精子輸出管道受阻、睪丸損傷、炎癥、附睪等生殖系***時(shí)，系精子外逸而產(chǎn)生的自身抗體。HAMILTON THORNE精子分析儀可分析參數(shù)，鞭打頻率（BCF）?：精子曲線路徑跨越其平均路徑的平均頻率。

采集精液前5～7天內(nèi)必須停止性生活，并且不得有**、夢遺等情況，還應(yīng)禁煙戒酒，忌服對生精功能有影響的藥物等。采取精液時(shí)間以晨起為佳，采精前用溫水將雙手、**，尤其是**洗凈?？刹捎?*法或電動按摩**法引起排精。精液的排出具有一定順序，開頭部分來自前列腺、附睪及壺腹，伴有大量精子，***部分來自精囊，故應(yīng)收集整份精液，不要遺漏任何部分，尤其是開頭部分。正因?yàn)橐讈G失精液的***部分,故不能用體外**法收集精液。盛精液的容器應(yīng)干凈、無菌、干燥，采精前容器的溫度應(yīng)與室溫相同；瓶子不應(yīng)過大，但瓶口不應(yīng)過小，以免將精液射出瓶外；還應(yīng)貼上標(biāo)簽，記錄姓名及取精時(shí)間。在冷天應(yīng)將精液標(biāo)本保溫，放置在貼身內(nèi)衣袋中，不可傾斜或倒置，盡可能在1小時(shí)內(nèi)送到實(shí)驗(yàn)室。計(jì)算機(jī)輔助精子分析根據(jù)初估的精子濃度選擇合適的檢測方法，確保檢測過程的準(zhǔn)確性和可靠性?。魚精子分析重復(fù)性高

CASA系統(tǒng)減少了人為因素對檢測結(jié)果的影響，提高了檢測的客觀性和可重復(fù)性?。美國瀕危物種精子分析DAP

全自動的IVOS可以提供**快的分析速度以及高質(zhì)量數(shù)據(jù)輸出?？梢允褂靡淮涡缘暮涂芍貜?fù)的載玻片，深度從10um～100um。每次分析捕捉100幀圖像，掃描速度每秒60幀。**的軟件升級。IVOS能提供：精確、客觀、具有重復(fù)性的結(jié)果。高速分析，在60Hz下半秒掃描30幀，為實(shí)驗(yàn)室節(jié)省成本。[1]主要功能IVOS自動精子活動、濃度、形態(tài)分析系統(tǒng)。HamiltonThorne的CASA系統(tǒng)適用于臨床、研究實(shí)驗(yàn)室、動物繁殖基地、水產(chǎn)業(yè)、制藥公司等各種領(lǐng)域，成為了精液分析業(yè)的金標(biāo)準(zhǔn)?？梢詰?yīng)用于包括人類、公牛、馬、野豬、狗、兔子、老鼠、綿羊、山羊、魚以及各種瀕危動物。在TOXIVOS上有**的大鼠精液分析軟件。美國瀕危物種精子分析DAP