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細(xì)胞培養(yǎng)基的種類很多,按其來源分為合成培養(yǎng)基和天然培養(yǎng)基(目前使用的培養(yǎng)基絕大部分是合成培養(yǎng)基),按其物質(zhì)狀態(tài)分為干粉培養(yǎng)基和液體培養(yǎng)基兩類。干粉培養(yǎng)基需由實(shí)驗(yàn)者自己配制并滅菌,液體培養(yǎng)基由專業(yè)商家提供,用戶可直接使用,非常方便。1、合成培養(yǎng)基的主要成分有:氨基酸、碳水化合物、無機(jī)鹽、維生素及其它輔助物質(zhì):氨基酸氨基酸是組成蛋白質(zhì)的基本單位。不同種類的細(xì)胞對(duì)氨基酸的要求各異,但有幾種氨基酸細(xì)胞自身不能合成,必須依靠培養(yǎng)液提供,這幾種氨基酸稱為必需氨基酸。其中谷氨酰胺是細(xì)胞合成核酸和蛋白質(zhì)必需的氨基酸,在缺少谷氨酰胺時(shí),細(xì)胞生長不良而死亡。因此,各種培養(yǎng)液中都有較大量的谷氨酰胺。但是,由于谷氨酰胺在溶液中很不穩(wěn)定,應(yīng)置于-20℃冰箱中保存,在使用前加入培養(yǎng)液內(nèi)。已含谷氨酰胺的培養(yǎng)液在4℃冰箱中儲(chǔ)存2周以上時(shí),還應(yīng)重新加入原來量的谷氨酰胺。碳水化合物碳水化合物是細(xì)胞生長主要能量來源,其中有的是合成蛋白質(zhì)和核酸的成分。主要有葡萄糖、核糖、脫氧核糖和醋酸等。無機(jī)鹽培養(yǎng)液中無機(jī)鹽的主要功能是幫助細(xì)胞維持滲透壓平衡。此外,通過提供鈉,鉀和鈣離子,幫助細(xì)胞調(diào)節(jié)細(xì)胞膜功能。MCDB131是MCDB培養(yǎng)基的一種,是由Knedler和Ham設(shè)計(jì)開發(fā)出來的,初用于培養(yǎng)人微血管內(nèi)皮細(xì)胞(HMVEC)。北京樣本細(xì)胞培養(yǎng)基批發(fā)
1.細(xì)胞培養(yǎng)基的種類按照細(xì)胞培養(yǎng)基的發(fā)展歷史,細(xì)胞培養(yǎng)基大致可分為平衡鹽溶液、天然細(xì)胞培養(yǎng)基、合成細(xì)胞培養(yǎng)基、無血清細(xì)胞培養(yǎng)基、限定化學(xué)成分細(xì)胞培養(yǎng)基等幾大種類。(balancedsaltsolution,BSS)BSS主要是由無機(jī)鹽、葡萄糖組成,它的作用是維持細(xì)胞滲透壓平衡,保持pH穩(wěn)定及提供簡單的營養(yǎng)。其主要用于細(xì)胞的漂洗、配制其他試劑等。幾種常用的BSS配方如下(表1-1)。D-Hank's與Hank's的一個(gè)主要區(qū)別是前者不含有Ca2+和Mg2+,因此D-Hank's常用于配制胰酶溶液。因?yàn)镃a2+、Mg2+是細(xì)胞膜的重要組成成份,參與細(xì)胞粘附等功能,使用不含Ca2+、Mg2+的BSS可避免細(xì)胞結(jié)團(tuán)。此外,Hanks液和Earle液是常用的BSS基礎(chǔ)溶液,前者緩沖能力較弱,適合于密閉培養(yǎng);后者緩沖能力較強(qiáng),適合于5%CO2的培養(yǎng)條件。天然培養(yǎng)基指來自動(dòng)物體液或利用組織分離提取的一類培養(yǎng)基,如血漿、血清、雞胚浸出液等。其優(yōu)點(diǎn)是營養(yǎng)成分豐富,培養(yǎng)效果良好,但缺點(diǎn)是成分復(fù)雜,來源受限且制作過程復(fù)雜、批間差異大。目前使用的天然培養(yǎng)基是血清,另外各種組織提取液、促進(jìn)細(xì)胞貼壁的膠原類物質(zhì)在培養(yǎng)某些特殊細(xì)胞也是必不可少。水解乳蛋白是乳白蛋白經(jīng)蛋白酶和肽酶水解的產(chǎn)物。上海醫(yī)療細(xì)胞培養(yǎng)基供應(yīng)商M199全稱Medium 199,廣泛應(yīng)用于各種動(dòng)物細(xì)胞的培養(yǎng),包括一些非哺乳類動(dòng)物細(xì)胞。
RPMI-1640細(xì)胞培養(yǎng)基RPMI-1640是Moore等人開發(fā)出來的,RPMI是該研究所開發(fā)的一類細(xì)胞培養(yǎng)基,1640是培養(yǎng)基代號(hào)。
RPMI-1640是改進(jìn)型的McCoy‘s5A培養(yǎng)基,使用碳酸氫鹽緩沖系統(tǒng),與大多數(shù)哺乳動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)基不同的是其典型的PH8的配方。
RPMI-1640培養(yǎng)基常初是為淋巴細(xì)胞培養(yǎng)專門設(shè)計(jì)的,現(xiàn)在已廣泛應(yīng)用于各種正常細(xì)胞和ai細(xì)胞的培養(yǎng),包括HeLa細(xì)胞、Jurkat細(xì)胞、MCF-7細(xì)胞、PC12細(xì)胞、PBMC細(xì)胞、星形膠質(zhì)細(xì)胞和ai細(xì)胞,是使用常為廣的培養(yǎng)基之一。
RPMIRPMI1640培養(yǎng)基相比其他培養(yǎng)基之所以具有獨(dú)特的效果,是因?yàn)槠渲泻羞€原劑谷胱甘肽和高濃度的維生素。RPMI1640培養(yǎng)基含有生物素、維生素B12以及PABA,這些成分是Eagle’sMEM和DMEM所不具備的。針對(duì)廣的細(xì)胞培養(yǎng)應(yīng)用,我們提供多種組分的RPMI1640改良培養(yǎng)基。
III)細(xì)胞系的大規(guī)模連續(xù)培養(yǎng)。該培養(yǎng)基主要用于培養(yǎng)和維護(hù)鱗翅類衍生細(xì)胞系和擴(kuò)增這些細(xì)胞系的病毒。IPL-41培養(yǎng)基基礎(chǔ)也以用于無血清夜蛾細(xì)胞的桿狀病毒重組蛋白表達(dá)。(balancedsaltsolution,BSS)BSS主要是由無機(jī)鹽、葡萄糖組成,它的作用是維持細(xì)胞滲透壓平衡,保持pH穩(wěn)定及提供簡單的營養(yǎng)。其主要用于細(xì)胞的漂洗、配制其他試劑等。目前用于細(xì)胞培養(yǎng)的血清主要是牛血清,培養(yǎng)某些特殊細(xì)胞也用人血清、馬血清等。牛血清對(duì)絕大多數(shù)哺乳動(dòng)物細(xì)胞都是適合的,但并不排除在培養(yǎng)某種細(xì)胞時(shí)使用其他動(dòng)物血清更合適。血清中含有各種血漿蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生長因子、無機(jī)物等,這些物質(zhì)對(duì)促進(jìn)細(xì)胞生長或抑制生長活性是達(dá)到生理平衡的。合成培養(yǎng)基是根據(jù)天然培養(yǎng)基的成分,用化學(xué)物質(zhì)模擬合成、人工設(shè)計(jì)、配制的培養(yǎng)基。William’s E培養(yǎng)基主要用于大鼠肝上皮細(xì)胞的長期培養(yǎng),也可用于其他哺乳動(dòng)物的肝細(xì)胞培養(yǎng)。
RPMI-1640培養(yǎng)基常初是為淋巴細(xì)胞培養(yǎng)專門設(shè)計(jì)的,現(xiàn)在已廣泛應(yīng)用于各種正常細(xì)胞和ai細(xì)胞的培養(yǎng),包括HeLa細(xì)胞、Jurkat細(xì)胞、MCF-7細(xì)胞、PC12細(xì)胞、PBMC細(xì)胞、星形膠質(zhì)細(xì)胞和ai細(xì)胞,是使用常為廣的培養(yǎng)基之一。RPMIRPMI1640培養(yǎng)基相比其他培養(yǎng)基之所以具有獨(dú)特的效果,是因?yàn)槠渲泻羞€原劑谷胱甘肽和高濃度的維生素。
L-丙氨酰-L-谷氨??梢源娴饶柕腖-谷氨酰胺,適用于所有的細(xì)胞,幾乎無需適應(yīng),并且可以延長細(xì)胞的培養(yǎng)時(shí)間,減少傳代次數(shù),即節(jié)省了時(shí)間也節(jié)約了金錢。與添加L-谷氨酰胺的培養(yǎng)基中培養(yǎng)的細(xì)胞相比,活性降低得更慢。延滯期略微延長的原因是肽酶的釋放和二肽的消化需要一定的時(shí)間。NEAA(非必須氨基酸),是在MEM培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上添加L-丙氨酸、L-谷氨酸、L-天(門)冬酰胺、L-天。門)冬氨酸、L-脯氨酸、L-絲氨酸和甘氨酸7種NEAA,能降低細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)細(xì)胞自身生產(chǎn)非必須氨基酸的副作用,有效促進(jìn)細(xì)胞增殖代謝。 Dulbecco’s 改良培養(yǎng)基增加了非必須氨基酸、微量鐵離子以及**酸鈉。遼寧實(shí)驗(yàn)細(xì)胞培養(yǎng)基全國發(fā)貨
針對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)應(yīng)用,我們提供多種組分的RPMI1640改良培養(yǎng)基。北京樣本細(xì)胞培養(yǎng)基批發(fā)
Dulbecco’s改良培養(yǎng)基–DMEM(Dulbecco’sModifiedEagleMedium)是在MEM培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上研制的,與MEM培養(yǎng)基相比,氨基酸的含量增加了2倍,維生素的含量增加了4倍,同時(shí)還增加了非必須氨基酸、微量鐵離子以及**酸鈉。DMEM培養(yǎng)基**初設(shè)計(jì)葡萄糖含量為1000mg/L(低糖型),后來又發(fā)展出葡萄糖含量為4500mg/L(高糖型),現(xiàn)已廣泛應(yīng)用于各種細(xì)胞的培養(yǎng)。針對(duì)***的細(xì)胞培養(yǎng)應(yīng)用,我們提供多種組分的DMEM改良培養(yǎng)基。高糖型培養(yǎng)基普遍應(yīng)用于生長快、粘附性低的細(xì)胞、雜交瘤的骨髓瘤細(xì)胞、克隆細(xì)胞、DNA轉(zhuǎn)染的轉(zhuǎn)化細(xì)胞、各種原代病毒宿主細(xì)胞、單一細(xì)胞的培養(yǎng)以及疫苗的生產(chǎn),例如利用CHO細(xì)胞表達(dá)EPO和生產(chǎn)乙肝疫苗。低糖培養(yǎng)基更適合代謝作用較慢、依賴性貼壁細(xì)胞的培養(yǎng)。不含葡萄糖的培養(yǎng)基可以根據(jù)研究需要,隨意調(diào)節(jié)葡萄糖的濃度,方便快捷。L-谷氨酰胺(Glutamine)是細(xì)胞培養(yǎng)中所必需的一種營養(yǎng)元素,但其在溶液中不穩(wěn)定,會(huì)自發(fā)降解,不含L-谷氨酰胺的培養(yǎng)基,可以根據(jù)研究需要任意調(diào)整L-谷氨酰胺的用量,在使用時(shí)添加新鮮的L-谷氨酰胺或其替代物更利于細(xì)胞的生長。 北京樣本細(xì)胞培養(yǎng)基批發(fā)
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