定量PCR和數(shù)字PCR的特點(diǎn):
5. 目前定量PCR已經(jīng)能實(shí)現(xiàn)高通量樣品條件下的自動化操作。
6. 數(shù)字PCR在單分子層面上的***定量,可以徹底擺脫對標(biāo)準(zhǔn)曲線的依賴而直接給出靶序列的拷貝數(shù),提高了實(shí)驗結(jié)果在批內(nèi)和批間的穩(wěn)定性,甚至能用來對標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行定標(biāo)。
7. 基于***定量的方式,數(shù)字PCR結(jié)果的高重復(fù)性和高精度可實(shí)現(xiàn)微小差異的基因表達(dá)分析,如等位基因的不平衡表達(dá)、單細(xì)胞基因表達(dá)分析、microRNA表達(dá)分析等等。所謂“微小差異”的標(biāo)準(zhǔn)一般而言是指表達(dá)水平的差異在2倍以內(nèi)。
8. 同等條件下,數(shù)字PCR在靈敏度方面擁有優(yōu)勢,使得該技術(shù)已成為**的液態(tài)活檢、病原微生物檢測、轉(zhuǎn)基因成分測定、宿主殘留DNA分析等的熱門技術(shù)。
數(shù)字PCR的應(yīng)用
檢驗檢疫 食品安全
?轉(zhuǎn)基因食品檢測(國標(biāo))
?病原菌鑒定
?動物源性檢測分析
科研
?基因表達(dá)差異監(jiān)測
?CRISPR-Cas9基因編輯結(jié)果驗證
?甲基化含量鑒定
?單細(xì)胞研究:測序、PCR
臨床
?**液體活檢:早篩、用藥、監(jiān)測、復(fù)發(fā)
?無創(chuàng)產(chǎn)前篩查:低成本、快速
?***性疾?。篐BV、HIV定量
據(jù)悉,MiniDrop?**團(tuán)隊由微流控、光學(xué)、機(jī)電學(xué)、化學(xué)、臨床醫(yī)學(xué)、分子生物學(xué)等多學(xué)科交叉領(lǐng)域的**組成,依托精密儀器研發(fā)、生物納米材料與分子生物學(xué)等平臺,以微滴式數(shù)字PCR儀為**,打造了全自動液體處理工作站、核酸提取試劑盒等創(chuàng)新產(chǎn)品,致力于解決**、***領(lǐng)域的精細(xì)診斷。
廣州微流控芯片數(shù)字PCR現(xiàn)貨基因表達(dá)差異的監(jiān)測。
相對于二代測序、基因芯片和定量PCR而言,數(shù)字PCR具備以下優(yōu)勢:
● 靈敏度可達(dá)到單個核酸分子:檢測限低至0.001%,主要系為數(shù)字PCR可以實(shí)現(xiàn)靶標(biāo)DNA/RNA的生物濃縮;
● 無需標(biāo)準(zhǔn)曲線活參照基因進(jìn)行對比來測定核算量,可對靶分子起始量進(jìn)行***定量,直接獨(dú)處DNA分子的個數(shù);
● 適合環(huán)境復(fù)雜樣品的檢測:終點(diǎn)PCR檢測,不依賴Ct值,不依賴擴(kuò)增效率,能克服PCR***劑的影響,避免樣品間的交叉***問題,適合各類復(fù)雜環(huán)境中的樣本進(jìn)行***定量,如動血樣、糞便、尿液、痰液、水樣、土壤、植物等;
CNV(Copy Number Variations,拷貝數(shù)變異)研究需要極高的定量精度以區(qū)別不同拷貝數(shù)之間的微小差異,測序方法適用于高于30%的變異率檢測,而qPCR的比較**辨在1.5倍左右,數(shù)字PCR通過直接計數(shù)目標(biāo)基因與參照基因( 拷貝數(shù)為1的基因,例如RNaseP) 的數(shù)目,計算比值,直接得到目標(biāo)基因的拷貝數(shù)可以達(dá)到極高的拷貝數(shù)分辨精度。
除此之外,dPCR在病原微生物檢測、microRNA研究、基因表達(dá)研究、NGS測序文庫的***定量、表觀遺傳學(xué)直接相關(guān)的DNA甲基化定量檢測、ChIP定量鑒定等領(lǐng)域的應(yīng)用都令人極為期待,而在轉(zhuǎn)基因成分鑒定、分子標(biāo)準(zhǔn)品精確定量、環(huán)境樣本檢測等具體的應(yīng)用方向上,已經(jīng)有大量實(shí)驗數(shù)據(jù)和結(jié)果證明了dPCR技術(shù)的優(yōu)良性能。
采用主流可靠的解決方案,由微滴生成儀、微滴檢測儀、數(shù)據(jù)分析軟件組成。
研究方向
無創(chuàng)產(chǎn)前篩查
無創(chuàng)傷的產(chǎn)前診斷, 如21號染色體為3倍體的唐氏綜合征、已知父母基因型的胎兒地貧檢測或已知父母基因型的其它核酸病檢測(孟德爾相關(guān)遺傳疾病)。目前標(biāo)本來源主要為血液,而待檢測的胎兒DNA受到母體DNA的干擾,影響了檢測的準(zhǔn)確性。而QX200檢測系統(tǒng)獨(dú)特的微滴化技術(shù)完全可以作為二代測序法的補(bǔ)充來進(jìn)行的無創(chuàng)傷產(chǎn)前診斷,從而提高工作效率及節(jié)約成本。
轉(zhuǎn)基因食品或成分的檢測
目前在確定轉(zhuǎn)基因作物或成分的含量時采取定量PCR的標(biāo)準(zhǔn)曲線法,這種方法需要依賴于已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)品(Certified Reference Materials Calibrants, CRMCs)。ddPCR***定量的方式可以徹底解決這些標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的定標(biāo)工作。 CRISPR-Cas9基因編輯結(jié)果驗證。深圳數(shù)字PCR哪家好
樣本多樣性,樣本通量可達(dá)96個樣本,支持靈活設(shè)定。南京永諾數(shù)字PCR銷售電話
數(shù)字PCR通過將一個樣本分成幾十到幾萬份,分配到不同的反應(yīng)單元(微滴),包含一個或多個拷貝的核酸分子(也就是說我們所說的 DNA 模板) ,這是與PCR或qPCR反應(yīng)比較大的區(qū)別,PCR或qPCR只在一個反應(yīng)體系中進(jìn)行,而數(shù)字PCR在每個反應(yīng)單元(微滴)中都會對目標(biāo)分子進(jìn)行擴(kuò)增,擴(kuò)增結(jié)束后統(tǒng)計熒光信號并分析。是不是聽起來特別高(yi)大(lian)上(meng)?舉個栗子,PCR或qPCR檢測突變像是在大海里撈一個會發(fā)光的針,周圍都是海水,很難看到針的光在哪,而dPCR就像把海水盛到好多個碗里面,瞧一眼很容易就知道哪個碗在發(fā)光了,而且,系統(tǒng)還會數(shù)出來到底有多少個碗里是發(fā)光的,多少個碗里是沒發(fā)光的,這樣一比,不就很容易的知道有多少數(shù)量的突變,就能做到***定量了。南京永諾數(shù)字PCR銷售電話
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