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MicroDrop-100數(shù)字PCR原理

來源: 發(fā)布時(shí)間:2022-03-01

       MicroDrop-100微滴式數(shù)字PCR是具有國內(nèi)自主知識產(chǎn)權(quán)的第三代JUE對定量PCR系統(tǒng),整套系統(tǒng)由MicroDrop-100A微滴生成儀、 MicroDrop-100B微滴檢測儀以及結(jié)果數(shù)據(jù)分析設(shè)備等構(gòu)成。系統(tǒng)通過自主設(shè)計(jì)的微流控芯片,利用油水相不兼容的原理,在2分鐘時(shí)間內(nèi)將PCR體系分割成100,000油包水的體系,每個(gè)體系為**的PCR反應(yīng)體系,體積約為0.2nL,單次實(shí)驗(yàn)一次可生成8個(gè)樣本的油包水體系。由于油包水體系的分割效應(yīng),使得數(shù)字PCR受PCRYi制物的影響相對較小,有利于復(fù)雜環(huán)境樣本的實(shí)驗(yàn)操作。區(qū)別于熒光定量PCR的過程性判讀方法,數(shù)字PCR結(jié)果判讀為終點(diǎn)法,故其對PCR擴(kuò)增效率的依賴也相對較小。  單次微滴生成*需2分鐘。MicroDrop-100數(shù)字PCR原理

MicroDrop-100數(shù)字PCR原理,數(shù)字PCR

       數(shù)字PCR(d PCR)是近年來引起重視并迅速發(fā)展起來的一種突破性的核酸定量分析技術(shù)。該技術(shù)先將核酸模板進(jìn)行稀釋,分配到大量**的反應(yīng)單元中,使每個(gè)反應(yīng)單元中只有單個(gè)模板分子,然后進(jìn)行PCR擴(kuò)增反應(yīng),擴(kuò)增結(jié)束后對每個(gè)反應(yīng)室的熒光信號進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,來定量DNA拷貝數(shù)。數(shù)字PCR采用先擴(kuò)增后定量,因此不依賴擴(kuò)增曲線的循環(huán)閾值(Ct),也無需采用內(nèi)參基因和標(biāo)準(zhǔn)曲線,準(zhǔn)確度高、重現(xiàn)性好,可以實(shí)現(xiàn)***定量分析。由于其獨(dú)特的技術(shù)優(yōu)勢,已經(jīng)在臨床診斷、轉(zhuǎn)基因成分定量、單細(xì)胞基因表達(dá)分析、環(huán)境微生物檢測和下一代測序等研究領(lǐng)域顯示出巨大的優(yōu)勢和應(yīng)用前景。MicroDrop-100數(shù)字PCR原理數(shù)字PCR技術(shù)與高通量的二代測序技術(shù),共同組成液體活檢領(lǐng)域的兩大利器。

MicroDrop-100數(shù)字PCR原理,數(shù)字PCR

相對于二代測序、基因芯片和定量PCR而言,數(shù)字PCR具備以下優(yōu)勢:


· 能夠有效區(qū)分濃度差異微小的樣品:更好的準(zhǔn)確度、精密度和重復(fù)性,可以用于精確測定靶基因的相對表達(dá),基因拷貝數(shù)變異分析等。


· 數(shù)字PCR可開發(fā)針對不同**、不同樣本以及不同的樣本環(huán)境提供檢測解決方案,該技術(shù)的應(yīng)用范圍廣,尤其在液體活檢領(lǐng)域,已開發(fā)針對肺*、乳腺*、腸*、胃*等上百個(gè)位點(diǎn)檢測試劑盒,可精細(xì)指導(dǎo)臨床***的診斷,以便患者在后續(xù)得到更及時(shí)并且適當(dāng)?shù)?**方案提供。

       我國***擁有完全自主知識產(chǎn)權(quán)的微滴式數(shù)字PCR儀MiniDrop?研發(fā)成功并投入生產(chǎn)。MiniDrop?創(chuàng)新性采用高壓驅(qū)動的方法將樣本分割成50萬份,打破了國外廠商在微滴式數(shù)字PCR領(lǐng)域的壟斷。永諾生物依以微滴式數(shù)字PCR儀為**,打造了全自動液體處理工作站、核酸提取試劑盒等創(chuàng)新產(chǎn)品,致力于解決**、***領(lǐng)域的精細(xì)診斷這是國內(nèi)***微滴式數(shù)字PCR檢測系統(tǒng),能廣泛應(yīng)用于醫(yī)療、農(nóng)業(yè)、環(huán)境等領(lǐng)域,未來,采用外周血、唾液、尿液、腦脊液等樣本進(jìn)行低成本、高靈敏、快速的無創(chuàng)檢測成為可能。MicroDrop?數(shù)字PCR可廣泛應(yīng)用于科研、醫(yī)療、出入境檢驗(yàn)檢疫等領(lǐng)域。

MicroDrop-100數(shù)字PCR原理,數(shù)字PCR

       數(shù)字PCR也叫Digital PCR(dPCR),是近幾年發(fā)展起來的一種核酸定量分析技術(shù)。相較于傳統(tǒng)熒光定量PCR來說,數(shù)字PCR對結(jié)果的判定不依賴于擴(kuò)增曲線循環(huán)Ct值,不受擴(kuò)增效率的影響,能夠直接讀出DNA的分子個(gè)數(shù),能夠?qū)ζ鹗紭颖竞怂岱肿?**定量。

       數(shù)字PCR基本原理是將一個(gè)樣本分成幾十到幾萬份,然后再將其分配到不同的反應(yīng)單元中,使每個(gè)微滴單元包含一個(gè)或多個(gè)拷貝的核酸分子(即DNA模板),每個(gè)單元都會對目標(biāo)分子進(jìn)行擴(kuò)增,然后再對每個(gè)單元進(jìn)行熒光信號的統(tǒng)計(jì)并計(jì)算。相對而言,傳統(tǒng)PCR或qPCR反應(yīng)都是發(fā)生于同一體系當(dāng)中,這也是數(shù)字PCR與其比較大的區(qū)別。 數(shù)字PCR技術(shù)是公認(rèn)的液體活檢領(lǐng)域靈敏度比較好的檢測方法。無錫數(shù)字PCR簡介

分辨率——低至0.1倍基因表達(dá)差異。MicroDrop-100數(shù)字PCR原理

二代測序輔助建庫

       目前靶向測序建庫方法包括擴(kuò)增子方法,在均相溶液中,當(dāng)擴(kuò)增引物增加時(shí),由于擴(kuò)增引物之間的相互作用,從而影響擴(kuò)增的效率;如果將其分散到大量微液滴中擴(kuò)增,將可降低引物間相互作用,提高擴(kuò)增效率。同時(shí)還可以實(shí)現(xiàn)對于少量模板的有效擴(kuò)增,得到更多的有效測序數(shù)據(jù)。


CRISPR-Cas9基因編輯結(jié)果驗(yàn)證

       CRISPR-Cas9技術(shù)的發(fā)明,是基因編輯技術(shù)的一大突破,但如何驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)是否成功,仍需要高靈敏度的檢測方法,數(shù)字PCR技術(shù)可以滿足這一需求。Broad研究所張鋒團(tuán)隊(duì)發(fā)明了以CRISPR為基礎(chǔ)的SHERLOCK技術(shù)可以對核酸進(jìn)行高靈敏度的定性檢測,但精確定量評估時(shí)仍采取了數(shù)字PCR進(jìn)行確認(rèn)。 MicroDrop-100數(shù)字PCR原理

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公司主要經(jīng)營產(chǎn)品包括:等離子清洗機(jī)、真空泵、噴霧干燥器、數(shù)字PCR、高壓滅菌鍋、培養(yǎng)箱、切片機(jī)、水分測定儀、激光粒度儀、光譜儀、溫濕度記錄儀等,目前主要合作品牌有:日本雅馬拓YAMATO、日本KASHIYAMA、日本HORIBA、廣州永諾 、日本KEM等。同時(shí),公司還提供專業(yè)的技術(shù)服務(wù),如設(shè)備的維護(hù)、驗(yàn)證等。

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