數(shù)字PCR(d PCR)是近年來引起重視并迅速發(fā)展起來的一種突破性的核酸定量分析技術(shù)。該技術(shù)先將核酸模板進行稀釋,分配到大量**的反應單元中,使每個反應單元中只有單個模板分子,然后進行PCR擴增反應,擴增結(jié)束后對每個反應室的熒光信號進行統(tǒng)計學分析,來定量DNA拷貝數(shù)。數(shù)字PCR采用先擴增后定量,因此不依賴擴增曲線的循環(huán)閾值(Ct),也無需采用內(nèi)參基因和標準曲線,準確度高、重現(xiàn)性好,可以實現(xiàn)***定量分析。由于其獨特的技術(shù)優(yōu)勢,已經(jīng)在臨床診斷、轉(zhuǎn)基因成分定量、單細胞基因表達分析、環(huán)境微生物檢測和下一代測序等研究領(lǐng)域顯示出巨大的優(yōu)勢和應用前景。高靈敏度——數(shù)字PCR的靈敏度與同體積反應體系的分割份數(shù)成正比。南通國產(chǎn)數(shù)字PCR原理

相對于二代測序、基因芯片和定量PCR而言，數(shù)字PCR具備以下優(yōu)勢:

● 靈敏度可達到單個核酸分子：檢測限低至0.001%，主要系為數(shù)字PCR可以實現(xiàn)靶標DNA/RNA的生物濃縮；

● 無需標準曲線活參照基因進行對比來測定核算量，可對靶分子起始量進行***定量，直接獨處DNA分子的個數(shù)；

● 適合環(huán)境復雜樣品的檢測：終點PCR檢測，不依賴Ct值，不依賴擴增效率，能克服PCR***劑的影響，避免樣品間的交叉***問題，適合各類復雜環(huán)境中的樣本進行***定量，如動血樣、糞便、尿液、痰液、水樣、土壤、植物等； 南京微流控芯片數(shù)字PCR銷售電話液體活檢：早篩、用藥、監(jiān)測、復發(fā)。

       數(shù)字PCR檢測及分析原理在上世紀90年代就被提出來了，但是無奈受限于當時的技術(shù)條件，樣本稀釋及分配都是靠手工來完成的，受到很多因素的干擾和限制；并且結(jié)果分析對于研究者來說也十分枯燥與繁瑣，因此在很長一段時間dPCR發(fā)展停滯不前。后來由于微流控技術(shù)與微納集成制造工藝的發(fā)展解決了dPCR過程中的幾個關(guān)鍵技術(shù)問題，推動了dPCR的研究與商業(yè)化的發(fā)展。

       目前根據(jù)dPCR樣本稀釋分配的方式，基本可分為三大類，一種是基于大規(guī)模集成微流控芯片；第二種是使用微反應室/孔板；第三種是微滴式。但不論是走芯片式還是微滴式，其基本原理都是將大量稀釋后的核酸溶液分散至芯片的微反應器或者微滴當中，每個反應器的核酸模板數(shù)少于1或者等于1。經(jīng)過PCR擴增之后，有一個核酸分子的模板的反應器就會給出熒光信號，沒有模板的反應器沒有熒光信號。根據(jù)相對比例和反應器的體積，可以推算出原始溶液的核酸濃度。

       數(shù)字PCR（Digital PCR-dPCR）技術(shù)是一種新的核酸檢測和定量方法，與傳統(tǒng)定量PCR（qPCR）技術(shù)不同，數(shù)字PCR采用***定量的方式，不依賴于標準曲線和參照樣本，直接檢測目標序列的拷貝數(shù)。由于這種檢測方式具有比傳統(tǒng)qPCR更加出色的靈敏度和特異性、精確性，dPCR迅速得到***的應用，這項技術(shù)在極微量核酸樣本檢測、復雜背景下稀有突變檢測和表達量微小差異鑒定方面變現(xiàn)出的優(yōu)勢已被普遍認可，而其在基因表達研究、microRNA研究、基因組拷貝數(shù)鑒定、**標志物稀有突變檢測、致病微生物鑒定、轉(zhuǎn)基因成分鑒定、NGS測序文庫精確定量和結(jié)果驗證等諸多方面具有的廣闊應用前景已經(jīng)受到越來越多的關(guān)注。分辨率——低至0.1倍基因表達差異。

二代測序輔助建庫

       目前靶向測序建庫方法包括擴增子方法，在均相溶液中，當擴增引物增加時，由于擴增引物之間的相互作用，從而影響擴增的效率;如果將其分散到大量微液滴中擴增，將可降低引物間相互作用，提高擴增效率。同時還可以實現(xiàn)對于少量模板的有效擴增，得到更多的有效測序數(shù)據(jù)。

CRISPR-Cas9基因編輯結(jié)果驗證

       CRISPR-Cas9技術(shù)的發(fā)明，是基因編輯技術(shù)的一大突破，但如何驗證實驗是否成功，仍需要高靈敏度的檢測方法，數(shù)字PCR技術(shù)可以滿足這一需求。Broad研究所張鋒團隊發(fā)明了以CRISPR為基礎的SHERLOCK技術(shù)可以對核酸進行高靈敏度的定性檢測，但精確定量評估時仍采取了數(shù)字PCR進行確認。 關(guān)于病原菌的檢測鑒定。南通國產(chǎn)數(shù)字PCR原理

國內(nèi)擁有完全自主知識產(chǎn)權(quán)的微滴式數(shù)字PCR儀。南通國產(chǎn)數(shù)字PCR原理

       在定量PCR時，我們常常糾結(jié)一個問題，究竟是相對定量還是***定量呢？如今，你無需糾結(jié)了，因為數(shù)字PCR（digital PCR）來了。盡管這兩種技術(shù)有些類似，都是估計起始樣品中的核酸量，但它們有一個重要的區(qū)別。定量PCR是依靠標準曲線或參照基因來測定核酸量，而數(shù)字PCR則讓你能夠直接數(shù)出DNA分子的個數(shù)，是對起始樣品的***定量。因此特別適用于依靠Ct值不能很好分辨的應用領(lǐng)域：拷貝數(shù)變異、突變檢測、基因相對表達研究（如等位基因不平衡表達）、二代測序結(jié)果驗證、miRNA表達分析、單細胞基因表達分析等。南通國產(chǎn)數(shù)字PCR原理

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