要了解為什么傳統(tǒng) PCR 存在限制，務(wù)必要了解 PCR 反應(yīng)過程中發(fā)生了什么?；?PCR 運(yùn)行可以分為三個(gè)階段：

指數(shù)期

       每個(gè)循環(huán)積聚的產(chǎn)物準(zhǔn)確加倍（假定 ** 反應(yīng)效率）。該反應(yīng)具有高度特異性和精確度。出現(xiàn)指數(shù)式擴(kuò)增，因?yàn)樗性噭┚迈r可用，反應(yīng)的動(dòng)力學(xué)推動(dòng)反應(yīng)有利于擴(kuò)增子加倍。

線性期（高變異性）

       隨著反應(yīng)繼續(xù)，一些試劑因擴(kuò)增而被消耗。反應(yīng)開始減緩，并且每個(gè)循環(huán)的 PCR 產(chǎn)物不再加倍。

平臺(tái)期（終點(diǎn)：使用傳統(tǒng)方法進(jìn)行凝膠檢測）

       反應(yīng)停止，不再產(chǎn)生更多產(chǎn)物，并且如果放置時(shí)間夠長，PCR 產(chǎn)物將開始降解。因?yàn)槊總€(gè)樣品具有不同的反應(yīng)動(dòng)力學(xué)，所以每支試管或每個(gè)反應(yīng)將在不同的時(shí)間點(diǎn)進(jìn)入平臺(tái)期。在平臺(tái)期可以看到這些差異。在平臺(tái)期內(nèi)，傳統(tǒng) PCR 進(jìn)行測量，又稱為終點(diǎn)檢測。 準(zhǔn)確的定量結(jié)果和優(yōu)異的重復(fù)性。杭州國產(chǎn)數(shù)字PCR銷售電話

定量PCR和數(shù)字PCR的特點(diǎn)：

1. 在20多年的使用和發(fā)展中，定量PCR作為一種技術(shù)平臺(tái)，已經(jīng)產(chǎn)出海量的數(shù)據(jù)，在工業(yè)界和分子檢測的某些應(yīng)用上，定量PCR已經(jīng)成為“金標(biāo)準(zhǔn)”?；A(chǔ)研究方面，則形成了被稱為MIQE的“定量PCR標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)指南”。   

2. 在定量PCR的各種應(yīng)用中，基因表達(dá)分析(gene expression analysis)的應(yīng)用比重約占七成，綜合各種因素來看，眼下定量PCR還是進(jìn)行基因表達(dá)研究的理想手段。   

3. 上述的“各種因素”具體展開，主要包括：通量、自動(dòng)化程度、各種檢測探針與染料、檢測通道、成本和可參考文獻(xiàn)與protocol的數(shù)目等等。   

4. 就目前市場上已有的數(shù)字PCR設(shè)備來看，定量PCR在檢測的線性范圍上具有優(yōu)勢，意味著同一個(gè)run內(nèi)可對各種表達(dá)豐度的樣品進(jìn)行分析。

研究方向

       低豐度及稀有序列的精確定量

       目前對于低豐度目標(biāo)序列的檢測，定量PCR、雜交、毛細(xì)管測序及NGS等方法都因受到背景DNA的干擾，使得檢測靈敏度及精確性都達(dá)不到精細(xì)定量的要求(如定量PCR檢測中Ct值大于33的情況下，其重復(fù)性就不是很高)， 而微滴式數(shù)字PCR系統(tǒng)通過**的微滴  化處理，使得稀有的核酸序列從大量的背景DNA中分離出來，從而提高了檢測的靈敏度及重復(fù)性。

       此外，由于樣品微滴化處理的同時(shí)，也將樣品中可能存在的***劑進(jìn)行了分裝，提高了數(shù)字PCR擴(kuò)增對于***劑的耐受程度，因此可具體應(yīng)用于很多臨床樣品(血液、尿液、糞便、痰液、腦脊液等)中對**核酸標(biāo)記物的檢測。一般而言，毛細(xì)管電泳和定量PCR的檢測靈敏度約在10%;NGS的靈敏度可達(dá)到1%;而ddPCR的檢測下限為0.001%。

       微滴式數(shù)字PCR系統(tǒng)在傳統(tǒng)的PCR擴(kuò)增前對樣品進(jìn)行微滴化處理，即將含有核酸分子的反應(yīng)體系分成成千上萬個(gè)納升級(jí)的微滴，其中每個(gè)微滴或不含待檢核酸靶分子，或者含有一個(gè)至數(shù)個(gè)待檢核酸靶分子。經(jīng)PCR擴(kuò)增后，逐個(gè)對每個(gè)微滴進(jìn)行檢測，有熒光信號(hào)的微滴判讀為1，沒有熒光信號(hào)的微滴判讀為0，根據(jù)泊松分布原理及陽性微滴的個(gè)數(shù)與比例即可得出靶分子的起始拷貝數(shù)或濃度。

與傳統(tǒng)PCR相比所具有的優(yōu)勢

       不依賴Ct值或內(nèi)參基因，即可確定低至單拷貝的待檢靶分子的***數(shù)目。微滴技術(shù)讓數(shù)字PCR更低成本，且更實(shí)用。

雙通道熒光檢測，支持EvaGreen染料及探針法。

研究方向

無創(chuàng)產(chǎn)前篩查

       無創(chuàng)傷的產(chǎn)前診斷, 如21號(hào)染色體為3倍體的唐氏綜合征、已知父母基因型的胎兒地貧檢測或已知父母基因型的其它核酸病檢測(孟德爾相關(guān)遺傳疾病)。目前標(biāo)本來源主要為血液，而待檢測的胎兒DNA受到母體DNA的干擾，影響了檢測的準(zhǔn)確性。而QX200檢測系統(tǒng)獨(dú)特的微滴化技術(shù)完全可以作為二代測序法的補(bǔ)充來進(jìn)行的無創(chuàng)傷產(chǎn)前診斷，從而提高工作效率及節(jié)約成本。

轉(zhuǎn)基因食品或成分的檢測

       目前在確定轉(zhuǎn)基因作物或成分的含量時(shí)采取定量PCR的標(biāo)準(zhǔn)曲線法，這種方法需要依賴于已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)品(Certified Reference Materials Calibrants, CRMCs)。ddPCR***定量的方式可以徹底解決這些標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的定標(biāo)工作。 20微升體系生成100,000微滴。上海廣東數(shù)字PCR解決方案

MicroDrop?數(shù)字PCR可廣泛應(yīng)用于科研、醫(yī)療、出入境檢驗(yàn)檢疫等領(lǐng)域。杭州國產(chǎn)數(shù)字PCR銷售電話

       我國***擁有完全自主知識(shí)產(chǎn)權(quán)的微滴式數(shù)字PCR儀MiniDrop?研發(fā)成功并投入生產(chǎn)。MiniDrop?創(chuàng)新性采用高壓驅(qū)動(dòng)的方法將樣本分割成50萬份，打破了國外廠商在微滴式數(shù)字PCR領(lǐng)域的壟斷。永諾生物依以微滴式數(shù)字PCR儀為**，打造了全自動(dòng)液體處理工作站、核酸提取試劑盒等創(chuàng)新產(chǎn)品，致力于解決**、***領(lǐng)域的精細(xì)診斷這是國內(nèi)***微滴式數(shù)字PCR檢測系統(tǒng)，能廣泛應(yīng)用于醫(yī)療、農(nóng)業(yè)、環(huán)境等領(lǐng)域，未來，采用外周血、唾液、尿液、腦脊液等樣本進(jìn)行低成本、高靈敏、快速的無創(chuàng)檢測成為可能。杭州國產(chǎn)數(shù)字PCR銷售電話

浚和（上海）儀器有限公司是一家供應(yīng)國內(nèi)外先進(jìn)儀器和設(shè)備的專業(yè)供應(yīng)商和服務(wù)商，致力于為客戶提供專業(yè)的定制化解決方案。多年來，持續(xù)為醫(yī)藥、化工、高校、科研單位、檢測院等多個(gè)行業(yè)提供先進(jìn)的產(chǎn)品和專業(yè)的服務(wù)。

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公司主要經(jīng)營產(chǎn)品包括：等離子清洗機(jī)、真空泵、噴霧干燥器、數(shù)字PCR、高壓滅菌鍋、培養(yǎng)箱、切片機(jī)、水分測定儀、激光粒度儀、光譜儀、溫濕度記錄儀等，目前主要合作品牌有：日本雅馬拓YAMATO、日本KASHIYAMA、日本HORIBA、廣州永諾 、日本KEM等。同時(shí)，公司還提供專業(yè)的技術(shù)服務(wù)，如設(shè)備的維護(hù)、驗(yàn)證等。

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