dPCR的基本原理

       目前dPCR主要有兩種形式，芯片式和液滴式，但基本原理都是將大量稀釋后的核酸溶液分散至芯片的微反應(yīng)器或微滴中，每個(gè)反應(yīng)器的核酸模板數(shù)少于或者等于1個(gè)。這樣經(jīng)過(guò)PCR循環(huán)之后，有一個(gè)核酸分子模板的反應(yīng)器就會(huì)給出熒光信號(hào)，沒(méi)有模板的反應(yīng)器就沒(méi)有熒光信號(hào)。根據(jù)相對(duì)比例和反應(yīng)器的體積，就可以推算出原始溶液的核酸濃度?？梢允褂脦追N不同的方法來(lái)分配樣品，包括微孔板，毛細(xì)管，油乳劑和帶有核酸結(jié)合表面的小型化腔室陣列。樣品的分配使人們可以通過(guò)假設(shè)分子種群遵循泊松分布來(lái)估計(jì)不同分子的數(shù)量，根據(jù)泊松分布的原理，反應(yīng)體系中目標(biāo)分子的拷貝數(shù)可以通過(guò)公式A=-ln[(N-X)/N]*N計(jì)算，從而解決了多個(gè)目標(biāo)分子存在于單個(gè)液滴中的可能性。 分辨率——低至0.1倍基因表達(dá)差異。杭州廣東數(shù)字PCR哪家好

相對(duì)于二代測(cè)序、基因芯片和定量PCR而言，數(shù)字PCR具備以下優(yōu)勢(shì):

· 能夠有效區(qū)分濃度差異微小的樣品：更好的準(zhǔn)確度、精密度和重復(fù)性，可以用于精確測(cè)定靶基因的相對(duì)表達(dá)，基因拷貝數(shù)變異分析等。

· 數(shù)字PCR可開(kāi)發(fā)針對(duì)不同**、不同樣本以及不同的樣本環(huán)境提供檢測(cè)解決方案，該技術(shù)的應(yīng)用范圍廣，尤其在液體活檢領(lǐng)域，已開(kāi)發(fā)針對(duì)肺*、乳腺*、腸*、胃*等上百個(gè)位點(diǎn)檢測(cè)試劑盒，可精細(xì)指導(dǎo)臨床***的診斷，以便患者在后續(xù)得到更及時(shí)并且適當(dāng)?shù)?**方案提供。 蘇州永諾數(shù)字PCR解決方案單張芯片一次可處理8個(gè)樣本。

       數(shù)字PCR也叫Digital PCR（dPCR），是近幾年發(fā)展起來(lái)的一種核酸定量分析技術(shù)。相較于傳統(tǒng)熒光定量PCR來(lái)說(shuō)，數(shù)字PCR對(duì)結(jié)果的判定不依賴(lài)于擴(kuò)增曲線循環(huán)Ct值，不受擴(kuò)增效率的影響，能夠直接讀出DNA的分子個(gè)數(shù)，能夠?qū)ζ鹗紭颖竞怂岱肿?**定量。

       數(shù)字PCR基本原理是將一個(gè)樣本分成幾十到幾萬(wàn)份，然后再將其分配到不同的反應(yīng)單元中，使每個(gè)微滴單元包含一個(gè)或多個(gè)拷貝的核酸分子（即DNA模板），每個(gè)單元都會(huì)對(duì)目標(biāo)分子進(jìn)行擴(kuò)增，然后再對(duì)每個(gè)單元進(jìn)行熒光信號(hào)的統(tǒng)計(jì)并計(jì)算。相對(duì)而言，傳統(tǒng)PCR或qPCR反應(yīng)都是發(fā)生于同一體系當(dāng)中，這也是數(shù)字PCR與其比較大的區(qū)別。

       MiniDrop數(shù)字PCR儀由Creator微滴生成儀、Detector微滴檢測(cè)儀、MD Microchip微流控芯片及MD Plotter數(shù)據(jù)分析軟件組成，該系統(tǒng)的**為微流控微滴生成技術(shù)，采用原創(chuàng)性的油液，在40um微管道中利用氣壓驅(qū)動(dòng)在2分鐘內(nèi)生成50萬(wàn)微滴，單次運(yùn)行生成400萬(wàn)微滴，微滴體積達(dá)皮升級(jí)，檢測(cè)線性范圍達(dá)到5個(gè)數(shù)量級(jí)，各項(xiàng)指標(biāo)均超越國(guó)內(nèi)外的主流產(chǎn)品。

       MiniDrop創(chuàng)新性采用高壓驅(qū)動(dòng)的方法將樣本分割成50萬(wàn)份，打破了國(guó)外廠商在微滴式數(shù)字PCR領(lǐng)域的壟斷。 準(zhǔn)確度不完全依賴(lài)于擴(kuò)增效率。

與常規(guī)的PCR的方法相比，dPCR有很好的優(yōu)勢(shì)。

***定量

常規(guī)PCR和實(shí)時(shí)熒光PCR定量檢測(cè)都需要已知拷貝數(shù)的標(biāo)準(zhǔn)DNA制定標(biāo)準(zhǔn)曲線，由于樣品測(cè)定在各種條件上不會(huì)完全一致，會(huì)造成PCR擴(kuò)增效率的差異，從而影響定量結(jié)果的準(zhǔn)確性。而ddPCR不受標(biāo)準(zhǔn)曲線和擴(kuò)增動(dòng)力學(xué)影響，可以進(jìn)行***定量。

樣品需求量低

在檢測(cè)珍貴樣品和樣品核酸存在降解時(shí)具有明顯的優(yōu)勢(shì)。

高靈敏度

ddPCR本質(zhì)上是將一個(gè)傳統(tǒng)的PCR反應(yīng)分成了數(shù)萬(wàn)個(gè)**的PCR反應(yīng)，在這些反應(yīng)中可以精確地檢測(cè)到很小的目的片段的差異、單拷貝甚至是低濃度混雜樣品，且能避免非同源異質(zhì)雙鏈的形成。

高耐受性

由于目的序列被分配到多個(gè)微滴中，***降低了體系間的影響以及背景序列和***物對(duì)反應(yīng)的干擾，擴(kuò)增基質(zhì)效應(yīng)大大減小。 FAM、VIC雙通道熒光檢測(cè)。蘇州永諾數(shù)字PCR解決方案

樣本多樣性，樣本通量可達(dá)96個(gè)樣本，支持靈活設(shè)定。杭州廣東數(shù)字PCR哪家好

       我國(guó)***擁有完全自主知識(shí)產(chǎn)權(quán)的微滴式數(shù)字PCR儀MiniDrop?研發(fā)成功并投入生產(chǎn)。這是國(guó)內(nèi)***微滴式數(shù)字PCR檢測(cè)系統(tǒng)，能廣泛應(yīng)用于醫(yī)療、農(nóng)業(yè)、環(huán)境等領(lǐng)域，未來(lái)，采用外周血、唾液、尿液、腦脊液等樣本進(jìn)行低成本、高靈敏、快速的無(wú)創(chuàng)檢測(cè)成為可能。

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