與常規(guī)的PCR的方法相比,dPCR有很好的優(yōu)勢。
***定量
常規(guī)PCR和實時熒光PCR定量檢測都需要已知拷貝數(shù)的標準DNA制定標準曲線,由于樣品測定在各種條件上不會完全一致,會造成PCR擴增效率的差異,從而影響定量結(jié)果的準確性。而ddPCR不受標準曲線和擴增動力學影響,可以進行***定量。
樣品需求量低
在檢測珍貴樣品和樣品核酸存在降解時具有明顯的優(yōu)勢。
高靈敏度
ddPCR本質(zhì)上是將一個傳統(tǒng)的PCR反應分成了數(shù)萬個**的PCR反應,在這些反應中可以精確地檢測到很小的目的片段的差異、單拷貝甚至是低濃度混雜樣品,且能避免非同源異質(zhì)雙鏈的形成。
高耐受性
由于目的序列被分配到多個微滴中,***降低了體系間的影響以及背景序列和***物對反應的干擾,擴增基質(zhì)效應大大減小。 分辨率——低至0.1倍基因表達差異。杭州國產(chǎn)數(shù)字PCR原理
目前數(shù)字PCR技術(shù)在臨床領域已經(jīng)有著非常***且***地應用,例如在病原微生物檢測中的應用:HBV檢測、HIV檢測、甲型流感病毒檢測等;在產(chǎn)前診斷中的應用:13/18/21號染色體三倍體檢測、遺傳性耳聾檢測、地中海貧血檢測及優(yōu)生五項的病毒檢測等;在**靶向***相關(guān)基因檢測中的應用:肺*EGFR基因突變、ALK基因融合檢測、結(jié)直腸*KRAS、BRAF基因突變檢測、乳腺*HER2基因擴增檢測、神經(jīng)膠質(zhì)瘤IDH基因突變檢測等。以**靶向***相關(guān)基因檢測為例,在**形成的超早期,會出現(xiàn)**細胞的壞死和凋亡,這些凋亡或壞死的**細胞會釋放其DNA進入外周血,因此通過分析循環(huán)血液中是否含有**特異的游離DNA就可以達到**早期篩查的目的。然而此時DNA含量極低,對檢測的靈敏度和精確性要求極高,目前只有數(shù)字PCR技術(shù)可以檢測出來。另外進行個體化***時,需要對基因組樣本進行分析,此時利用數(shù)字PCR技術(shù)也能**提高結(jié)果的可信性,進而建立合理***方案。南京廣州永諾數(shù)字PCR品牌不依賴Ct值,無需標準曲線。
二代測序輔助建庫
目前靶向測序建庫方法包括擴增子方法,在均相溶液中,當擴增引物增加時,由于擴增引物之間的相互作用,從而影響擴增的效率;如果將其分散到大量微液滴中擴增,將可降低引物間相互作用,提高擴增效率。同時還可以實現(xiàn)對于少量模板的有效擴增,得到更多的有效測序數(shù)據(jù)。
CRISPR-Cas9基因編輯結(jié)果驗證
CRISPR-Cas9技術(shù)的發(fā)明,是基因編輯技術(shù)的一大突破,但如何驗證實驗是否成功,仍需要高靈敏度的檢測方法,數(shù)字PCR技術(shù)可以滿足這一需求。Broad研究所張鋒團隊發(fā)明了以CRISPR為基礎的SHERLOCK技術(shù)可以對核酸進行高靈敏度的定性檢測,但精確定量評估時仍采取了數(shù)字PCR進行確認。
MicroDrop-100系統(tǒng)產(chǎn)品特點:
一、適應性廣,靈活性高
1、理論上可覆蓋qPCR(熒光定量PCR)的所有應用
2、樣本多樣性,樣本通量可達96個樣本,支持靈活設定
3、開放式平臺,支持用戶自行開發(fā)試劑、產(chǎn)品。
二、靈敏度高,準確性高
1、***定量——無需依賴標準曲線
2、采用微滴式技術(shù)高達100,000個的微滴
3、線性范圍達到6個數(shù)量級,靈敏度高達萬分之一
三、可分析復雜混合物
1、準確度不完全依賴于擴增效率
2、雙通道熒光檢測,支持EvaGreen染料及探針法
3、支持多重數(shù)字PCR
四、操作簡單,使用方便
1、全封閉防污染設計,一鍵式自動化操作。
2、可選全中文分析軟件 樣本多樣性,樣本通量可達96個樣本,支持靈活設定。
數(shù)字PCR是一種核酸分子***定量技術(shù)。當前核酸分子的定量有三種方法,光度法基于核酸分子的吸光度來定量;,Ct值就是指可以檢測到熒光值對應的循環(huán)數(shù);數(shù)字PCR是***的定量技術(shù),基于單分子PCR方法來進行計數(shù)的核酸定量,是一種***定量的方法。主要采用當前分析化學熱門研究領域的微流控或微滴化方法,將大量稀釋后的核酸溶液分散至芯片的微反應器或微滴中,每個反應器的核酸模板數(shù)少于或者等于1個。這樣經(jīng)過PCR循環(huán)之后,有一個核酸分子模板的反應器就會給出熒光信號,沒有模板的反應器就沒有熒光信號。根據(jù)相對比例和反應器的體積,就可以推算出原始溶液的核酸濃度。永諾生物MicroDrop-100微滴式數(shù)字PCR儀超越行業(yè)的10萬個微滴數(shù),保證泊松分布所需要的充分的樣本量。JUE對定量數(shù)字PCR正規(guī)代理
率先行業(yè)的10萬個微滴數(shù),保證泊松分布所需要的充分的樣本量。杭州國產(chǎn)數(shù)字PCR原理
微滴式數(shù)字PCR系統(tǒng)在傳統(tǒng)的PCR擴增前對樣品進行微滴化處理,即將含有核酸分子的反應體系分成成千上萬個納升級的微滴,其中每個微滴或不含待檢核酸靶分子,或者含有一個至數(shù)個待檢核酸靶分子。經(jīng)PCR擴增后,逐個對每個微滴進行檢測,有熒光信號的微滴判讀為1,沒有熒光信號的微滴判讀為0,根據(jù)泊松分布原理及陽性微滴的個數(shù)與比例即可得出靶分子的起始拷貝數(shù)或濃度。
與傳統(tǒng)PCR相比所具有的優(yōu)勢
不依賴Ct值或內(nèi)參基因,即可確定低至單拷貝的待檢靶分子的***數(shù)目。微滴技術(shù)讓數(shù)字PCR更低成本,且更實用。
杭州國產(chǎn)數(shù)字PCR原理
浚和(上海)儀器有限公司是一家供應國內(nèi)外先進儀器和設備的專業(yè)供應商和服務商,致力于為客戶提供專業(yè)的定制化解決方案。多年來,持續(xù)為醫(yī)藥、化工、高校、科研單位、檢測院等多個行業(yè)提供先進的產(chǎn)品和專業(yè)的服務。
浚和在不斷引進國內(nèi)外先進儀器設備的同時,結(jié)合行業(yè)和市場需求,加強和客戶之間的溝通,并與國際上多家**儀器設備制造商保持著長期穩(wěn)定的合作關(guān)系,不定期地與合作商進行技術(shù)交流,努力加強自身技術(shù)力量。公司配備了數(shù)名有著多年行業(yè)經(jīng)驗的技術(shù)人員,依靠雄厚的技術(shù)實力、科學合理的配置方案、專業(yè)的安裝調(diào)試和周到的售后服務,得到了廣大用戶的支持與信賴。
公司主要經(jīng)營產(chǎn)品包括:等離子清洗機、真空泵、噴霧干燥器、數(shù)字PCR、高壓滅菌鍋、培養(yǎng)箱、切片機、水分測定儀、激光粒度儀、光譜儀、溫濕度記錄儀等,目前主要合作品牌有:日本雅馬拓YAMATO、日本KASHIYAMA、日本HORIBA、廣州永諾 、日本KEM等。同時,公司還提供專業(yè)的技術(shù)服務,如設備的維護、驗證等。
浚和儀器將始終以行業(yè)特點為立足點,以客戶需求為導向,不斷地提高自身專業(yè)技術(shù)能力,不停地完善客戶服務質(zhì)量,在發(fā)展中保持創(chuàng)新的精神,力求與客戶共同進步,為行業(yè)的發(fā)展作出不懈的努力。