與常規(guī)的PCR的方法相比,dPCR有很好的優(yōu)勢(shì)。
***定量
常規(guī)PCR和實(shí)時(shí)熒光PCR定量檢測(cè)都需要已知拷貝數(shù)的標(biāo)準(zhǔn)DNA制定標(biāo)準(zhǔn)曲線,由于樣品測(cè)定在各種條件上不會(huì)完全一致,會(huì)造成PCR擴(kuò)增效率的差異,從而影響定量結(jié)果的準(zhǔn)確性。而ddPCR不受標(biāo)準(zhǔn)曲線和擴(kuò)增動(dòng)力學(xué)影響,可以進(jìn)行***定量。
樣品需求量低
在檢測(cè)珍貴樣品和樣品核酸存在降解時(shí)具有明顯的優(yōu)勢(shì)。
高靈敏度
ddPCR本質(zhì)上是將一個(gè)傳統(tǒng)的PCR反應(yīng)分成了數(shù)萬(wàn)個(gè)**的PCR反應(yīng),在這些反應(yīng)中可以精確地檢測(cè)到很小的目的片段的差異、單拷貝甚至是低濃度混雜樣品,且能避免非同源異質(zhì)雙鏈的形成。
高耐受性
由于目的序列被分配到多個(gè)微滴中,***降低了體系間的影響以及背景序列和***物對(duì)反應(yīng)的干擾,擴(kuò)增基質(zhì)效應(yīng)大大減小。 具備一鍵式自動(dòng)化操作。南京微流控芯片數(shù)字PCR
**個(gè)體化診療
通過(guò)檢測(cè)T790M位點(diǎn)突變情況,可以更好地評(píng)估一代TKI***的療效及耐藥情況并指導(dǎo)第三代TKI靶向藥Osimertinib的使用。然而,由于qPCR平臺(tái)ARMS檢測(cè)技術(shù)的靈敏度有限,沒(méi)有辦法在含大量EGFR基因野生型背景核酸中高效準(zhǔn)確的檢測(cè)到T790M突變。這個(gè)時(shí)候dPCR技術(shù)展現(xiàn)出了****的檢測(cè)精度,此外,dPCR***定量的優(yōu)勢(shì)也能充分發(fā)揮出來(lái)了,可以監(jiān)控突變含量變化,做到及早發(fā)現(xiàn)耐藥。
2.)基因表達(dá)分析
伊馬替尼(Imatinib)可以有效幫助很多慢性髓細(xì)胞白血?。–ML)患者延長(zhǎng)生存期,但是臨床上發(fā)現(xiàn),伊馬替尼的療效與BCR-ABL1融合基因的轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物表達(dá)量有很大的關(guān)系。研究人員采用dPCR對(duì)CML患者的BCR-ABL1融合基因轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物進(jìn)行測(cè)定,結(jié)果檢測(cè)下限可以達(dá)到0.001%,顯示出dPCR在痕量核酸檢測(cè)方面比qPCR具有無(wú)可比擬的優(yōu)勢(shì) 常州數(shù)字PCR單細(xì)胞研究:測(cè)序、PCR。
相對(duì)于二代測(cè)序、基因芯片和定量PCR而言,數(shù)字PCR具備以下優(yōu)勢(shì):
● 靈敏度可達(dá)到單個(gè)核酸分子:檢測(cè)限低至0.001%,主要系為數(shù)字PCR可以實(shí)現(xiàn)靶標(biāo)DNA/RNA的生物濃縮;
● 無(wú)需標(biāo)準(zhǔn)曲線活參照基因進(jìn)行對(duì)比來(lái)測(cè)定核算量,可對(duì)靶分子起始量進(jìn)行***定量,直接獨(dú)處DNA分子的個(gè)數(shù);
● 適合環(huán)境復(fù)雜樣品的檢測(cè):終點(diǎn)PCR檢測(cè),不依賴Ct值,不依賴擴(kuò)增效率,能克服PCR***劑的影響,避免樣品間的交叉***問(wèn)題,適合各類(lèi)復(fù)雜環(huán)境中的樣本進(jìn)行***定量,如動(dòng)血樣、糞便、尿液、痰液、水樣、土壤、植物等;
要了解為什么傳統(tǒng)PCR存在限制,務(wù)必要了解PCR反應(yīng)過(guò)程中發(fā)生了什么。基本PCR運(yùn)行可以分為三個(gè)階段:指數(shù)期每個(gè)循環(huán)積聚的產(chǎn)物準(zhǔn)確加倍(假定**反應(yīng)效率)。該反應(yīng)具有高度特異性和精確度。出現(xiàn)指數(shù)式擴(kuò)增,因?yàn)樗性噭┚迈r可用,反應(yīng)的動(dòng)力學(xué)推動(dòng)反應(yīng)有利于擴(kuò)增子加倍。線性期(高變異性)隨著反應(yīng)繼續(xù),一些試劑因擴(kuò)增而被消耗。反應(yīng)開(kāi)始減緩,并且每個(gè)循環(huán)的PCR產(chǎn)物不再加倍。平臺(tái)期(終點(diǎn):使用傳統(tǒng)方法進(jìn)行凝膠檢測(cè))反應(yīng)停止,不再產(chǎn)生更多產(chǎn)物,并且如果放置時(shí)間夠長(zhǎng),PCR產(chǎn)物將開(kāi)始降解。因?yàn)槊總€(gè)樣品具有不同的反應(yīng)動(dòng)力學(xué),所以每支試管或每個(gè)反應(yīng)將在不同的時(shí)間點(diǎn)進(jìn)入平臺(tái)期。在平臺(tái)期可以看到這些差異。在平臺(tái)期內(nèi),傳統(tǒng)PCR進(jìn)行測(cè)量,又稱(chēng)為終點(diǎn)檢測(cè)。檢測(cè)數(shù)量一次可達(dá)96個(gè)樣品。
數(shù)字PCR采用的策略概括起來(lái)非常簡(jiǎn)單,就是“分而治之”(divide and conquer)[1],這種做法非常類(lèi)似于計(jì)算機(jī)科學(xué)中的“分治算法”,將一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)PCR反應(yīng)分配到大量微小的反應(yīng)器中,在每個(gè)反應(yīng)器中包含或不包含一個(gè)或多個(gè)拷貝的目標(biāo)分子( DNA模板) ,實(shí)現(xiàn)“單分子模板PCR擴(kuò)增”,擴(kuò)增結(jié)束后,通過(guò)陽(yáng)性反應(yīng)器的數(shù)目“數(shù)出”目標(biāo)序列的拷貝數(shù)。在實(shí)際的數(shù)字PCR實(shí)驗(yàn)中,事實(shí)上是通過(guò)呈現(xiàn)兩種信號(hào)類(lèi)型的反應(yīng)器比例和數(shù)目進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,計(jì)算出原始樣本中的模板拷貝數(shù)。適用復(fù)雜樣品的檢測(cè)。無(wú)錫流式數(shù)字PCR哪家好
MiniDrop?研發(fā)團(tuán)隊(duì)由微流控、光學(xué)、機(jī)電學(xué)、化學(xué)、臨床醫(yī)學(xué)、分子生物學(xué)等多學(xué)科交叉領(lǐng)域的**組成。南京微流控芯片數(shù)字PCR
定量PCR和數(shù)字PCR的特點(diǎn):
5. 目前定量PCR已經(jīng)能實(shí)現(xiàn)高通量樣品條件下的自動(dòng)化操作。
6. 數(shù)字PCR在單分子層面上的***定量,可以徹底擺脫對(duì)標(biāo)準(zhǔn)曲線的依賴而直接給出靶序列的拷貝數(shù),提高了實(shí)驗(yàn)結(jié)果在批內(nèi)和批間的穩(wěn)定性,甚至能用來(lái)對(duì)標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行定標(biāo)。
7. 基于***定量的方式,數(shù)字PCR結(jié)果的高重復(fù)性和高精度可實(shí)現(xiàn)微小差異的基因表達(dá)分析,如等位基因的不平衡表達(dá)、單細(xì)胞基因表達(dá)分析、microRNA表達(dá)分析等等。所謂“微小差異”的標(biāo)準(zhǔn)一般而言是指表達(dá)水平的差異在2倍以內(nèi)。
8. 同等條件下,數(shù)字PCR在靈敏度方面擁有優(yōu)勢(shì),使得該技術(shù)已成為**的液態(tài)活檢、病原微生物檢測(cè)、轉(zhuǎn)基因成分測(cè)定、宿主殘留DNA分析等的熱門(mén)技術(shù)。
浚和(上海)儀器有限公司是一家供應(yīng)國(guó)內(nèi)外先進(jìn)儀器和設(shè)備的專(zhuān)業(yè)供應(yīng)商和服務(wù)商,致力于為客戶提供專(zhuān)業(yè)的定制化解決方案。多年來(lái),持續(xù)為醫(yī)藥、化工、高校、科研單位、檢測(cè)院等多個(gè)行業(yè)提供先進(jìn)的產(chǎn)品和專(zhuān)業(yè)的服務(wù)。
浚和在不斷引進(jìn)國(guó)內(nèi)外先進(jìn)儀器設(shè)備的同時(shí),結(jié)合行業(yè)和市場(chǎng)需求,加強(qiáng)和客戶之間的溝通,并與國(guó)際上多家**儀器設(shè)備制造商保持著長(zhǎng)期穩(wěn)定的合作關(guān)系,不定期地與合作商進(jìn)行技術(shù)交流,努力加強(qiáng)自身技術(shù)力量。公司配備了數(shù)名有著多年行業(yè)經(jīng)驗(yàn)的技術(shù)人員,依靠雄厚的技術(shù)實(shí)力、科學(xué)合理的配置方案、專(zhuān)業(yè)的安裝調(diào)試和周到的售后服務(wù),得到了廣大用戶的支持與信賴。
公司主要經(jīng)營(yíng)產(chǎn)品包括:等離子清洗機(jī)、真空泵、噴霧干燥器、數(shù)字PCR、高壓滅菌鍋、培養(yǎng)箱、切片機(jī)、水分測(cè)定儀、激光粒度儀、光譜儀、溫濕度記錄儀等,目前主要合作品牌有:日本雅馬拓YAMATO、日本KASHIYAMA、日本HORIBA、廣州永諾 、日本KEM等。同時(shí),公司還提供專(zhuān)業(yè)的技術(shù)服務(wù),如設(shè)備的維護(hù)、驗(yàn)證等。
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