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深圳流式數(shù)字PCR原理

來源: 發(fā)布時間:2021-08-03

       

       數(shù)字PCR也叫Digital PCR(dPCR),是近幾年發(fā)展起來的一種核酸定量分析技術。相較于傳統(tǒng)熒光定量PCR來說,數(shù)字PCR對結(jié)果的判定不依賴于擴增曲線循環(huán)Ct值,不受擴增效率的影響,能夠直接讀出DNA的分子個數(shù),能夠?qū)ζ鹗紭颖竞怂岱肿?**定量。

       數(shù)字PCR基本原理是將一個樣本分成幾十到幾萬份,然后再將其分配到不同的反應單元中,使每個微滴單元包含一個或多個拷貝的核酸分子(即DNA模板),每個單元都會對目標分子進行擴增,然后再對每個單元進行熒光信號的統(tǒng)計并計算。相對而言,傳統(tǒng)PCR或qPCR反應都是發(fā)生于同一體系當中,這也是數(shù)字PCR與其比較大的區(qū)別。


關于甲基化含量的鑒定。深圳流式數(shù)字PCR原理

深圳流式數(shù)字PCR原理,數(shù)字PCR

       我國***擁有完全自主知識產(chǎn)權的微滴式數(shù)字PCR儀MiniDrop?研發(fā)成功并投入生產(chǎn)。這是國內(nèi)***微滴式數(shù)字PCR檢測系統(tǒng),能廣泛應用于醫(yī)療、農(nóng)業(yè)、環(huán)境等領域,未來,采用外周血、唾液、尿液、腦脊液等樣本進行低成本、高靈敏、快速的無創(chuàng)檢測成為可能。

       MiniDrop?數(shù)字PCR儀由Creator微滴生成儀、Detector微滴檢測儀、MD Microchip微流控芯片及MD Plotter數(shù)據(jù)分析軟件組成,該系統(tǒng)的**為微流控微滴生成技術,采用原創(chuàng)性的油液,在40um微管道中利用氣壓驅(qū)動在2分鐘內(nèi)生成50萬微滴,單次運行生成400萬微滴,微滴體積達皮升級,檢測線性范圍達到5個數(shù)量級,各項指標均超越國內(nèi)外主流產(chǎn)品。 深圳流式數(shù)字PCR原理開放式平臺,支持用戶自行開發(fā)試劑、產(chǎn)品。

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       要了解為什么傳統(tǒng) PCR 存在限制,務必要了解 PCR 反應過程中發(fā)生了什么?;?PCR 運行可以分為三個階段:

指數(shù)期

       每個循環(huán)積聚的產(chǎn)物準確加倍(假定 ** 反應效率)。該反應具有高度特異性和精確度。出現(xiàn)指數(shù)式擴增,因為所有試劑均新鮮可用,反應的動力學推動反應有利于擴增子加倍。

線性期(高變異性)

       隨著反應繼續(xù),一些試劑因擴增而被消耗。反應開始減緩,并且每個循環(huán)的 PCR 產(chǎn)物不再加倍。

平臺期(終點:使用傳統(tǒng)方法進行凝膠檢測)

       反應停止,不再產(chǎn)生更多產(chǎn)物,并且如果放置時間夠長,PCR 產(chǎn)物將開始降解。因為每個樣品具有不同的反應動力學,所以每支試管或每個反應將在不同的時間點進入平臺期。在平臺期可以看到這些差異。在平臺期內(nèi),傳統(tǒng) PCR 進行測量,又稱為終點檢測。

相對于二代測序、基因芯片和定量PCR而言,數(shù)字PCR具備以下優(yōu)勢:

● 靈敏度可達到單個核酸分子:檢測限低至0.001%,主要系為數(shù)字PCR可以實現(xiàn)靶標DNA/RNA的生物濃縮;

● 無需標準曲線活參照基因進行對比來測定核算量,可對靶分子起始量進行***定量,直接獨處DNA分子的個數(shù);

● 適合環(huán)境復雜樣品的檢測:終點PCR檢測,不依賴Ct值,不依賴擴增效率,能克服PCR***劑的影響,避免樣品間的交叉***問題,適合各類復雜環(huán)境中的樣本進行***定量,如動血樣、糞便、尿液、痰液、水樣、土壤、植物等; MiniDrop?研發(fā)團隊由微流控、光學、機電學、化學、臨床醫(yī)學、分子生物學等多學科交叉領域的**組成。

深圳流式數(shù)字PCR原理,數(shù)字PCR

相對于二代測序、基因芯片和定量PCR而言,數(shù)字PCR具備以下優(yōu)勢:


· 能夠有效區(qū)分濃度差異微小的樣品:更好的準確度、精密度和重復性,可以用于精確測定靶基因的相對表達,基因拷貝數(shù)變異分析等。


· 數(shù)字PCR可開發(fā)針對不同**、不同樣本以及不同的樣本環(huán)境提供檢測解決方案,該技術的應用范圍廣,尤其在液體活檢領域,已開發(fā)針對肺*、乳腺*、腸*、胃*等上百個位點檢測試劑盒,可精細指導臨床***的診斷,以便患者在后續(xù)得到更及時并且適當?shù)?**方案提供。 MicroDrop?數(shù)字PCR可廣泛應用于科研、醫(yī)療、出入境檢驗檢疫等領域。深圳流式數(shù)字PCR原理

無創(chuàng)產(chǎn)前篩查:低成本、快速。深圳流式數(shù)字PCR原理

       數(shù)字PCR也叫Digital PCR(dPCR),是近幾年發(fā)展起來的一種核酸定量分析技術。相較于傳統(tǒng)熒光定量PCR來說,數(shù)字PCR對結(jié)果的判定不依賴于擴增曲線循環(huán)Ct值,不受擴增效率的影響,能夠直接讀出DNA的分子個數(shù),能夠?qū)ζ鹗紭颖竞怂岱肿?**定量。

       數(shù)字PCR基本原理是將一個樣本分成幾十到幾萬份,然后再將其分配到不同的反應單元中,使每個微滴單元包含一個或多個拷貝的核酸分子(即DNA模板),每個單元都會對目標分子進行擴增,然后再對每個單元進行熒光信號的統(tǒng)計并計算。相對而言,傳統(tǒng)PCR或qPCR反應都是發(fā)生于同一體系當中,這也是數(shù)字PCR與其比較大的區(qū)別。 深圳流式數(shù)字PCR原理

浚和(上海)儀器有限公司是一家供應國內(nèi)外先進儀器和設備的專業(yè)供應商和服務商,致力于為客戶提供專業(yè)的定制化解決方案。多年來,持續(xù)為醫(yī)藥、化工、高校、科研單位、檢測院等多個行業(yè)提供先進的產(chǎn)品和專業(yè)的服務。

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公司主要經(jīng)營產(chǎn)品包括:等離子清洗機、真空泵、噴霧干燥器、數(shù)字PCR、高壓滅菌鍋、培養(yǎng)箱、切片機、水分測定儀、激光粒度儀、光譜儀、溫濕度記錄儀等,目前主要合作品牌有:日本雅馬拓YAMATO、日本KASHIYAMA、日本HORIBA、廣州永諾 、日本KEM等。同時,公司還提供專業(yè)的技術服務,如設備的維護、驗證等。

浚和儀器將始終以行業(yè)特點為立足點,以客戶需求為導向,不斷地提高自身專業(yè)技術能力,不停地完善客戶服務質(zhì)量,在發(fā)展中保持創(chuàng)新的精神,力求與客戶共同進步,為行業(yè)的發(fā)展作出不懈的努力。