dPCR的基本原理
目前dPCR主要有兩種形式,芯片式和液滴式,但基本原理都是將大量稀釋后的核酸溶液分散至芯片的微反應器或微滴中,每個反應器的核酸模板數少于或者等于1個。這樣經過PCR循環(huán)之后,有一個核酸分子模板的反應器就會給出熒光信號,沒有模板的反應器就沒有熒光信號。根據相對比例和反應器的體積,就可以推算出原始溶液的核酸濃度??梢允褂脦追N不同的方法來分配樣品,包括微孔板,毛細管,油乳劑和帶有核酸結合表面的小型化腔室陣列。樣品的分配使人們可以通過假設分子種群遵循泊松分布來估計不同分子的數量,根據泊松分布的原理,反應體系中目標分子的拷貝數可以通過公式A=-ln[(N-X)/N]*N計算,從而解決了多個目標分子存在于單個液滴中的可能性。 單細胞研究:測序、PCR。南通廣東數字PCR如何選型
CNV(Copy Number Variations,拷貝數變異)研究需要極高的定量精度以區(qū)別不同拷貝數之間的微小差異,測序方法適用于高于30%的變異率檢測,而qPCR的比較**辨在1.5倍左右,數字PCR通過直接計數目標基因與參照基因( 拷貝數為1的基因,例如RNaseP) 的數目,計算比值,直接得到目標基因的拷貝數可以達到極高的拷貝數分辨精度。
除此之外,dPCR在病原微生物檢測、microRNA研究、基因表達研究、NGS測序文庫的***定量、表觀遺傳學直接相關的DNA甲基化定量檢測、ChIP定量鑒定等領域的應用都令人極為期待,而在轉基因成分鑒定、分子標準品精確定量、環(huán)境樣本檢測等具體的應用方向上,已經有大量實驗數據和結果證明了dPCR技術的優(yōu)良性能。
南通廣東數字PCR如何選型液體活檢:早篩、用藥、監(jiān)測、復發(fā)。
定量PCR和數字PCR的特點:
1. 在20多年的使用和發(fā)展中,定量PCR作為一種技術平臺,已經產出海量的數據,在工業(yè)界和分子檢測的某些應用上,定量PCR已經成為“金標準”?;A研究方面,則形成了被稱為MIQE的“定量PCR標準實驗指南”。
2. 在定量PCR的各種應用中,基因表達分析(gene expression analysis)的應用比重約占七成,綜合各種因素來看,眼下定量PCR還是進行基因表達研究的理想手段。
3. 上述的“各種因素”具體展開,主要包括:通量、自動化程度、各種檢測探針與染料、檢測通道、成本和可參考文獻與protocol的數目等等。
4. 就目前市場上已有的數字PCR設備來看,定量PCR在檢測的線性范圍上具有優(yōu)勢,意味著同一個run內可對各種表達豐度的樣品進行分析。
數字PCR可以直接計算目標序列的拷貝數,因此無需依賴于對照樣品和標準曲線就可以進行精確的***定量檢測;此外,由于數字PCR在進行結果判讀時*判斷有/無兩種擴增狀態(tài),因此也不需要檢測熒光信號與設定閾值線的交點,完全不依賴于Ct值的鑒定,因此數字PCR的反應受擴增效率的影響**降低,對PCR反應***物的耐受能力**提高;數字PCR實驗中標準反應體系分配的過程可以極大程度上降低與目標序列有競爭性作用的背景序列濃度,因此數字PCR技術也特別適合在復雜背景中檢測稀有突變。不依賴Ct值,無需標準曲線。
微滴式數字PCR系統(tǒng)為微流控微滴生成技術,采用原創(chuàng)性的油液,單個樣本在微米級流道中利用氣壓驅動在3分鐘內生成10萬微滴,單次運行生成80萬微滴,微滴體積達皮升級,檢測線性范圍達到6個數量級,各項指標均超越國內外主流產品。
在液滴生成數上,MicroDrop?能達到國外同級別產品的5倍。與此同時,設備制作成本只有國外同類產品的一半。這減低了精細醫(yī)療的成本,打破了國外廠商在微滴式數字PCR領域的壟斷。這意味著在未來,采用外周血、唾液、尿液、腦脊液等樣本進行低成本、高靈敏、快速的無創(chuàng)檢測成為可能。
國內擁有完全自主知識產權的微滴式數字PCR儀。南通廣東數字PCR如何選型
MiniDrop?研發(fā)團隊由微流控、光學、機電學、化學、臨床醫(yī)學、分子生物學等多學科交叉領域的**組成。南通廣東數字PCR如何選型
數字PCR的應用
檢驗檢疫 食品安全
?轉基因食品檢測(國標)
?病原菌鑒定
?動物源性檢測分析
科研
?基因表達差異監(jiān)測
?CRISPR-Cas9基因編輯結果驗證
?甲基化含量鑒定
?單細胞研究:測序、PCR
臨床
?**液體活檢:早篩、用藥、監(jiān)測、復發(fā)
?無創(chuàng)產前篩查:低成本、快速
?***性疾?。篐BV、HIV定量
據悉,MiniDrop?**團隊由微流控、光學、機電學、化學、臨床醫(yī)學、分子生物學等多學科交叉領域的**組成,依托精密儀器研發(fā)、生物納米材料與分子生物學等平臺,以微滴式數字PCR儀為**,打造了全自動液體處理工作站、核酸提取試劑盒等創(chuàng)新產品,致力于解決**、***領域的精細診斷。
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浚和(上海)儀器有限公司是一家供應國內外先進儀器和設備的專業(yè)供應商和服務商,致力于為客戶提供專業(yè)的定制化解決方案。多年來,持續(xù)為醫(yī)藥、化工、高校、科研單位、檢測院等多個行業(yè)提供先進的產品和專業(yè)的服務。
浚和在不斷引進國內外先進儀器設備的同時,結合行業(yè)和市場需求,加強和客戶之間的溝通,并與國際上多家**儀器設備制造商保持著長期穩(wěn)定的合作關系,不定期地與合作商進行技術交流,努力加強自身技術力量。公司配備了數名有著多年行業(yè)經驗的技術人員,依靠雄厚的技術實力、科學合理的配置方案、專業(yè)的安裝調試和周到的售后服務,得到了廣大用戶的支持與信賴。
公司主要經營產品包括:等離子清洗機、真空泵、噴霧干燥器、數字PCR、高壓滅菌鍋、培養(yǎng)箱、切片機、水分測定儀、激光粒度儀、光譜儀、溫濕度記錄儀等,目前主要合作品牌有:日本雅馬拓YAMATO、日本KASHIYAMA、日本HORIBA、廣州永諾 、日本KEM等。同時,公司還提供專業(yè)的技術服務,如設備的維護、驗證等。
浚和儀器將始終以行業(yè)特點為立足點,以客戶需求為導向,不斷地提高自身專業(yè)技術能力,不停地完善客戶服務質量,在發(fā)展中保持創(chuàng)新的精神,力求與客戶共同進步,為行業(yè)的發(fā)展作出不懈的努力。