研究方向基因表達差異研究

檢測時完全不依賴傳統(tǒng)的Ct值即可實現(xiàn)真正意義上的***定量，從而提供了比實時熒光定量PCR更精確的基因差異表達研究，尤其對于那些靶基因表達差異微小的情況：microRNA、lncRNAs等的表達分析、等位基因的不平衡表達、單細胞基因表達分析、Exosome內核酸分子定量分析等。

拷貝數(shù)變異(CNV)研究

微滴化的樣品處理及檢測，這種擺脫Ct值的計算方法而直接獲取目標基因的***拷貝數(shù)，為拷貝數(shù)變異的研究提供了***的檢測精度。是其他諸如二代測序、芯片雜交等平臺無法達到的，因此采用數(shù)字PCR能夠有效對NGS、aCGH的實驗結果進行驗證，并具有成本低、通量高的特點。

MicroDrop?數(shù)字PCR是擁有完全自主知識產權的微滴式數(shù)字PCR儀。常州微滴式數(shù)字PCR哪家好

       同時，從公式也可以看出，隨著反應陽性體系數(shù)（X）的增加，體系中目標分子的拷貝數(shù)相對于X會有較大的差距，隨著X的持續(xù)增加，數(shù)字PCR結果的不確定度也隨著提高，總體來說，數(shù)字PCR陽性體系的數(shù)量不得超過總體系數(shù)量的80%。另一個方面，N的增加會使整個數(shù)字PCR體系具有較大的線性范圍，并可以提高反應的靈敏度、穩(wěn)定性以及可重復性。因此，目前dPCR都需要在成本可控的情況下，增加分配的腔室數(shù)和液滴數(shù)。

商業(yè)化dPCR平臺及其特點

       發(fā)展到現(xiàn)在，市面上常見的dPCR主要有兩種：微滴式dPCR（droplet dPCR，ddPCR）和芯片式dPCR（chip dPCR，cdPCR）技術。由于芯片式dPCR制造芯片的成本較高，目前微滴式dPCR正越來越受到企業(yè)的認可。 常州微滴式數(shù)字PCR哪家好關于甲基化含量的鑒定。

定量PCR和數(shù)字PCR的特點：

1. 在20多年的使用和發(fā)展中，定量PCR作為一種技術平臺，已經產出海量的數(shù)據(jù)，在工業(yè)界和分子檢測的某些應用上，定量PCR已經成為“金標準”。基礎研究方面，則形成了被稱為MIQE的“定量PCR標準實驗指南”。   

2. 在定量PCR的各種應用中，基因表達分析(gene expression analysis)的應用比重約占七成，綜合各種因素來看，眼下定量PCR還是進行基因表達研究的理想手段。   

3. 上述的“各種因素”具體展開，主要包括：通量、自動化程度、各種檢測探針與染料、檢測通道、成本和可參考文獻與protocol的數(shù)目等等。   

4. 就目前市場上已有的數(shù)字PCR設備來看，定量PCR在檢測的線性范圍上具有優(yōu)勢，意味著同一個run內可對各種表達豐度的樣品進行分析。

        精細診斷是精細醫(yī)學的關鍵環(huán)節(jié)，液體活檢作為一種無創(chuàng)、均一的檢測技術，迅速成為精細診斷領域的新星，2015年被《麻省理工大學科技評論》評選為年度**突破技術， 2017年入選世界經濟論壇評出的全球**新興技術，引發(fā)了全球科研、臨床和產業(yè)界的極大熱情，已在**、產前診斷、***移植等疾病領域***被應用。

       數(shù)字PCR技術與高通量的二代測序技術，共同組成液體活檢領域的兩大利器；數(shù)字PCR技術是公認的液體活檢領域靈敏度比較高的檢測方法，采用有限稀釋的方法將目標分子分割到**的反應體系中，在不依賴標準曲線條件下實現(xiàn)靶標***定量檢測，能檢測低至0.01%的突變基因；Bio-Rad及Thermo Fisher目前是這一領域的主導者，分別采用微滴或芯片方式將樣本分割成兩萬份，MiniDrop?創(chuàng)新性采用高壓驅動的方法將樣本分割成50萬份，打破了國外廠商在微滴式數(shù)字PCR領域的壟斷。

理論上可覆蓋qPCR（熒光定量PCR)的所有應用。

定量PCR和數(shù)字PCR的特點：

       5. 目前定量PCR已經能實現(xiàn)高通量樣品條件下的自動化操作。   

       6. 數(shù)字PCR在單分子層面上的***定量，可以徹底擺脫對標準曲線的依賴而直接給出靶序列的拷貝數(shù)，提高了實驗結果在批內和批間的穩(wěn)定性，甚至能用來對標準品進行定標。   

       7. 基于***定量的方式，數(shù)字PCR結果的高重復性和高精度可實現(xiàn)微小差異的基因表達分析，如等位基因的不平衡表達、單細胞基因表達分析、microRNA表達分析等等。所謂“微小差異”的標準一般而言是指表達水平的差異在2倍以內。   

       8. 同等條件下，數(shù)字PCR在靈敏度方面擁有優(yōu)勢，使得該技術已成為**的液態(tài)活檢、病原微生物檢測、轉基因成分測定、宿主殘留DNA分析等的熱門技術。

流式檢測，順序逐一檢測每個微滴，無熒光交叉干擾，微滴陰性陽性判讀準確。常州微滴式數(shù)字PCR哪家好

       數(shù)字PCR檢測及分析原理在上世紀90年代就被提出來了，但是無奈受限于當時的技術條件，樣本稀釋及分配都是靠手工來完成的，受到很多因素的干擾和限制；并且結果分析對于研究者來說也十分枯燥與繁瑣，因此在很長一段時間dPCR發(fā)展停滯不前。后來由于微流控技術與微納集成制造工藝的發(fā)展解決了dPCR過程中的幾個關鍵技術問題，推動了dPCR的研究與商業(yè)化的發(fā)展。

       目前根據(jù)dPCR樣本稀釋分配的方式，基本可分為三大類，一種是基于大規(guī)模集成微流控芯片；第二種是使用微反應室/孔板；第三種是微滴式。但不論是走芯片式還是微滴式，其基本原理都是將大量稀釋后的核酸溶液分散至芯片的微反應器或者微滴當中，每個反應器的核酸模板數(shù)少于1或者等于1。經過PCR擴增之后，有一個核酸分子的模板的反應器就會給出熒光信號，沒有模板的反應器沒有熒光信號。根據(jù)相對比例和反應器的體積，可以推算出原始溶液的核酸濃度。 常州微滴式數(shù)字PCR哪家好

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